BAIRD PARKER AGAR: FOUNDATION, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar Baird Parker är ett fast medium selektiv och differentierad kultur. Det skapades 1962 för upptäckt och räkning av koagulaspositiva stafylokocker (Staphylococcus aureus).

Den består av pancreashydrolysat av kasein, köttekstrakt, jästextrakt, litiumklorid, glycin, natriumpyruvat, kaliumtellurit, agar och äggula-emulsion.

Typiska Staphylococcus aureus-kolonier på Baird Parker-agar. Källa: Daizy John

Baird Parker Agar är baserad på S. aureus förmåga att minska tellurit och producera lecitinas. Båda egenskaperna genererar en koloni med specifika egenskaper för denna art. Därför är det mycket effektivt att detektera denna mikroorganism.

De typiska S. aureus-kolonierna är svarta eller mörkgrå, med en färglös gräns och en ljus gloria som omger dem och skiljer dem från andra mikroorganismer. Denna patogen finns i kliniska prover, vatten, kosmetika och råa eller kokta livsmedel.

Dess diagnos eller upptäckt är av yttersta vikt, beroende på de olika patologierna som den producerar, såsom matförgiftning, skalad hudsyndrom, toxisk chocksyndrom, abscesser, meningit, septikemi, endokardit, bland andra.

Grund

Närande kraft

Pankreatisk hydrolysat av kasein, köttekstrakt och jästextrakt är källorna till näringsämnen, vitaminer och mineraler som är nödvändiga för allmän mikrobiell utveckling, medan pyruvat och glycin är föreningar som gynnar den specifika tillväxten av Staphylococcus aureus.

Selektiv

Baird Parker Agar är selektiv eftersom den innehåller ämnen som hämmar tillväxten av den medföljande floran samtidigt som den främjar utvecklingen av S. aureus. De hämmande föreningarna är litiumklorid och kaliumtellurit.

Differentiell

Detta medium gör det möjligt att skilja S. aureus från resten av de koagulasnegativa Staphylococci. S. aureus har förmågan att reducera tellurit till fritt metalliskt svart tellur och bildar svarta eller mörkgrå kolonier.

På samma sätt tillhandahåller äggulan substraten för att demonstrera närvaron av enzymet lecitinas och lipas. S. aureus är lecitinas-positiv och därför kommer en tydlig gloria att observeras runt kolonin, vilket indikerar att lecitinet hydrolyserades.

I detta avseende tyder utseendet på denna agar av glänsande svarta eller mörkgrå kolonier med en ljus gloria runt dem närvaron av S. aureus.

Om det bildas en nederbördzon tyder det på lipasaktivitet. Vissa stammar av S. aureus är lipas-positiva och andra negativa.

I det fall att S. aureus är lipas-positiv, kommer ett ogenomskinligt område att observeras runt den svarta eller mörkgrå kolonin, och sedan en lätt halo på grund av verkan av lecitinas.

Kolonier av andra bakterier än S. aureus som kan växa på detta medium kommer att utveckla färglösa eller bruna kolonier utan omgivande halo.

Atypiska svarta kolonier kan också ses med eller utan en färglös kant, men utan en lätt gloria. Dessa kolonier bör inte beaktas, de motsvarar inte S. aureus.

Förberedelse

Äggulaemulsion

Ta ett nytt kycklingägg, tvätta det väl och lägg det i 70% alkohol i 2 till 3 timmar. Ägget öppnas sedan aseptiskt och det vita separeras försiktigt från äggulan. Därefter tas 50 ml av äggulan och blandas med 50 ml steril fysiologisk lösning.

Kaliumtellurit 1% vikt / volym

Vissa kommersiella hus säljer 1% kaliumtellurit redo att användas. Det sättes till mediet innan mediet stelnar.

För att framställa denna lösning i laboratoriet vägs 1,0 g kaliumtellurit och upplöses i en del vatten. Därefter slutförs mängden vatten tills den når 100 ml. Lösningen måste steriliseras med filtreringsmetoden.

Beredning av kulturmedium

Väg ut 60 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i 940 ml destillerat vatten. Låt blandningen sitta i cirka 5-10 minuter.

Applicera värme genom att omröra mediet ofta för att förbättra upplösningsprocessen. Koka upp en minut. Sterilisera i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Låt stå tills den når en temperatur på 45 ° C och tillsätt 50 ml av äggulaemulsionen och 10 ml 1% tellurit. Blanda väl och häll 15-20 ml på sterila petriskålar.

Låt stelna, beställ inverterade i plaketter och förvara i kylskåp tills användning.

Det slutliga pH-värdet för det beredda mediet måste vara 6,8 ± 0,2.

Innan du sätter ett prov, vänta på att plattan når rumstemperatur. Fröa plattorna genom att strö eller genom ympning med en Drigalski-spatel.

Färgen på det dehydratiserade mediet är ljusbrunt och färgen på det beredda mediet är ljusbärnstensfärgat.

Använda sig av

Kliniska prover

De kliniska proverna sås direkt och tappar ut en del av materialet i ena änden av plattan och därifrån ströks det av utmattning. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C.

Matprover

Väg 10 gram av livsmedelsprovet och homogeniseras i 90 ml 0,1% peptonvatten, varifrån utspädningar bereds vid behov. Inokulera plattorna i triplikat med 0,3 ml av de beredda lösningarna och utsäde på ytan med en Drigalski-spatel. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C.

Denna metod gör det möjligt att räkna de erhållna typiska kolonierna och är idealisk när förekomsten av S. aureus misstänks över 10 CFU per g / ml prov.

Om mängden S. aureus misstänks vara liten eller det finns en hel del medföljande flora föreslås det att berika provet i tryptikas soybuljong med 10% NaCl och 1% natriumpyruvat. Detta kommer att främja tillväxten av S. aureus och hämma utvecklingen av den åtföljande floran. Grumliga rör utsädes på Baird Parker agar.

Vattenprover

I ett steriliserat vakuumfiltreringssystem filtreras 100 ml studievatten, och därefter avlägsnas det mikroporösa membranet på 0,4 mikron med en steril pincett och placeras på en Baird Parker-platta. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C. Denna teknik möjliggör räkning av typiska S. aureus-kolonier.

QA

Kända stammar såsom Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071 kan användas för att utvärdera kvaliteten på Baird Parker agar.

I fallet med S. aureus ATCC-stammar är det känt att minska tellurit, och de är lipas- och lecitinas-positiva. Därför måste det ske en tillfredsställande utveckling och växa konvexa kolonier med en svart mitt och färglös kant, med en opak halo och en lätt yttersta gloria.

För sin del förväntas S. epidermidis utvecklas dåligt på detta medium, med brungrå till svarta kolonier, utan en lätt gloria.

För E. coli och P. mirabilis förväntas det hämmas helt eller delvis. Vid tillväxt kommer bruna kolonier att utvecklas utan ett ogenomskinligt område eller lätt halo.

rekommendationer

-Mediet bör inte upphettas efter tillsättning av telluriten och äggulan.

-Förberedelsen av äggulaemulsionen och dess tillsats i mitten är ett mycket sårbart steg för kontaminering. Extrem försiktighet måste tas.

-Om det finns närvaro av typiska S. aureus-kolonier, bör det bekräftas genom montering av ett koagulas-test på nämnda stam.

-Om det finns tveksamma resultat med koagulas bör andra bekräftande test monteras.

-Var noga med att inte förväxla förekomsten av typiska S. aureus-kolonier med atypiska svarta kolonier.

referenser

1. Wikipedia-bidragsgivare. Baird-Parker agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 15 mars 2017, 19:36 UTC. Tillgängligt på: wikipedia.org/ Öppnad 18 februari 2019.
2. BD-laboratorier. Baird Parker Agar. 2006. Finns på: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parker agar bas. 2015. Finns på: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Finns på: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Kalium tellurit. 2015. Finns på: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Transport av enterotoxigenic Staphylococcus aureus typ A, i nasopharyngeal utstryk i mathanterare. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelanska Standard Covenin 1292-89. (1989). Livsmedel. Isolering och uppräkning av Staphylococcus aureus. Finns på: sencamer.gob.ve