BHI AGAR: GRUND, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den BHI-agar eller Brain Heart Infusion agar medium är en närande fast kultur. På spanska hänvisar vi till det som hjärnainfusion agar. Det är ett icke-selektivt odlingsmedium, vilket innebär att alla typer av Gram-positiva och Gram-negativa bakterier kan utvecklas, liksom vissa jäst- och filamentösa svampar.

Den består av en infusion av kalvhjärn och hjärta, peptiskt hydrolysat från djurvävnader, pankreashydrolysat av kasein, natriumklorid, glukos, dinatriumfosfat och agar.

BHI-plattor. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

Det bör noteras att BHI-agar är ett av de mest använda odlingsmedierna i bakteriologilaboratorier. Det kan användas utan tillskott som primärodling, subkultur av kolonier som erhållits på andra selektiva medier eller för underhåll av stammar i laboratoriet.

Å andra sidan är det ett idealiskt medium att användas som bas vid framställningen av anrikat medium, såsom blodagar och chokladagar. Båda är idealiska för att isolera krävande mikroorganismer ur näringssynpunkt. Det bör emellertid noteras att eftersom det innehåller glukos är det inte lämpligt att observera hemolysmönster.

På liknande sätt kan BHI-agar användas för framställning av specialmedier för isolering av svårväxta patogena mikroorganismer i vanliga media, bland dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae och Histoplasma capsulatum.

Med antibiotikatillsatsen blir BHI-agar ett selektivt medium för isolering av svampar.

Grund

Det är ett näringsrikt kulturmedium för att isolera måttligt krävande mikroorganismer, och dess anrikning kan ökas med tillsats av blod och andra kosttillskott.

Det är ett icke-selektivt odlingsmedium, därför tillåter det tillväxt av de flesta Gram-positiva och Gram-negativa bakterier, liksom vissa svampar. Det kan emellertid göras selektivt med tillsats av antibiotika.

Mediet innehåller kalvhjärn- och hjärtainfusion, djurvävnads peptiskt hydrolysat och pankreatisk kaseinhydrolysat; Alla dessa föreningar fungerar som källor till vitaminer, aminosyror, kväve och kol.

Glukos är ett kolhydrat som ger energi till mikroorganismer när de har fermenterat det. Under tiden upprätthåller natriumklorid och dinatriumfosfat osmotisk balans och tillhandahåller ett pH nära neutralitet. Slutligen ger agaren den medelstora fasta konsistensen.

Förberedelse

Väg 52 gram av det dehydratiserade mediet och löst i en liter destillerat vatten. Ta blandningen till en värmekälla tills den kokar under omrörning ofta under upplösningsprocessen.

BHI-agarplattor eller -kilar kan framställas utan tillsatser.

kilar

För beredning av kilar, servera beredningen tills hälften av varje rör är fylld, täck och steriliseras i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter, när du lämnar, läggs på en bas tills de stelnar. Förvara senare i kylen tills den används.

BHI-kilar för bakterioteca. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

plattor

Den upplösta blandningen autoklaveras vid 121 ° C under 15 minuter, vilket låter den svalna till 50 ° C och 20 ml av mediet serveras i sterila petriskålar. De får stelna, inverteras och förvaras i kylen tills de används. Låt plattorna komma till rumstemperatur innan sådd.

Mediets pH måste förbli vid 7,4 ± 0,2.

Det råa mediet är beigefärgat och det beredda mediet är ljusbärnstensfärgat.

Beredning av blodagar

Efter sterilisering av mediet kyldes till en temperatur av cirka 45 till 50 ° C, tillsätt sedan blodet (50 ml), blanda försiktigt för att homogenisera och servera aseptiskt 20 ml i varje petriskål. Om det bildas bubblor på plattan, bör den lättare lågan passera snabbt över bubblorna för att eliminera dem.

På samma sätt kan specialmedier framställas genom tillsats av motsvarande tillsatser när blandningen når en temperatur av 45 till 50 ° C.

Mediet förblir körsbärsrött.

tillämpningar

Använd utan kosttillskott

BHI Agar utan tillsatser är användbar som en primärodling och för att såga rena stammar av mikroorganismer med låg eller medelkrav för deras efterföljande identifiering.

Eftersom det är ett ljusfärgat medium är det idealiskt för att observera pigment och eftersom det inte innehåller störande ämnen kan vissa biokemiska tester, såsom oxidas och katalas, utföras på det, eller andra biokemiska tester kan monteras från kolonier från detta agar.

På samma sätt används BHI-agarkilar för att underhålla stammar under en viss tid på laboratoriet (bakterioteca).

Plattor eller kilar som ympats med ytan med bakteriestammar inkuberas vid 37 ° C under 24 till 48 timmar. Samtidigt beror temperaturen och inkubationstiden i svampar på typen av svamp som söks.

Som basagar för beredning av andra media

Med denna bas kan berikade och selektiva medier framställas.

berikad

Dess huvudfunktion är att tjäna som bas för beredningen av blodagar för rutinmässig användning i mikrobiologilaboratorier. Speciellt bidrar BHI-basen till isoleringen av Streptococcus sp. Det har emellertid nackdelen att den inte är lämplig för att observera hemolysmönster eftersom den innehåller glukos.

Det används också för beredning av kanin- eller hästblodagar för isolering av Haemophilus sp. För bästa resultat kan ett anrikningstillägg (IsoVitaleX) läggas till.

Om proverna kommer från luftvägarna, kan bacitracin sättas till agaren för att hämma den medföljande floraen och öka sannolikheten för återhämtning av Haemophilus sp. Stammarna.

Alternativt kan blodagar (lamm eller människa) med cystintelurit beredas för att isolera Corynebacterium difteriae. På samma sätt är det användbart att framställa kaninblodagar, med tillsats av cystin och glukos för isolering av Francisella tularensis.

Ympningen av blodet agarplattor görs genom utmattning, och de inkuberas vid 35-37 ° C under 24-48 timmar i microaerophilicity (5-10% CO ₂ ).

Selektiv

Detta medium med tillsats av antibiotika kan ersätta Sabouraud-agar för isolering av svampar.

Kombinationen av BHI-agar med kloramfenikol - gentamicin eller penicillin -, streptomycin och hästblod är idealisk för isolering av Histoplasma capsulatum.

Beroende på mikroorganismen som ska isoleras rekommenderas inkubering vid 35-37 ° C eller vid rumstemperatur i aerobios. Ibland är inkubation nödvändig i båda temperaturintervallen med 2 plattor för detta.

Vissa svampar som Trichophyton mentagrophytes måste inkuberas vid rumstemperatur i upp till 7 dagar.

QA

Från varje framställt sats rekommenderas att inkubera en platta eller kil vid 37 ° C under 24 timmar och kontrollera att det inte finns någon tillväxt; Det är särskilt viktigt vid beredning av blodagar, eftersom det är ett lätt förorenat medium.

Å andra sidan kan kvaliteten på mediet utvärderas genom inokulering av kända eller certifierade standardstammar och iakttagande av deras utveckling.

För att utvärdera BHI-agar utan tillsatser kan stammar av Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231 användas på 24 ° C i 24 till 48 timmar. I alla fall förväntas tillfredsställande tillväxt.

Stammar av Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 kan ympas för att utvärdera blodagarplattor.

Bakteriestammar inkuberas vid 37 ° C i mikroaerofilicitet under 24 timmar, medan svampen inkuberas vid rumstemperatur i en fuktig kammare i upp till 7 dagar. Tillfredsställande tillväxt förväntas i alla fall.

referenser

1. Britannia Laboratories. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Finns på: britanialab.com.
2. BD-laboratorier. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Finns på: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogen Laboratory. Brain Heart Infusion Agar. Finns på: foodafety.neogen.com
5. Gil M. Blodagar: grund, användning och beredning. 2018. Finns på: lifeder.com.
6. Wikipedia-bidragsgivare. Hjärnainfusion. Wikipedia, den fria encyklopedin. 19 september 2018, 03:58 UTC. Finns på: wikipedia.org. Öppnade 2 mars 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.