Den agar Biggy är ett fast medium selektiv och differentierad kultur. Det var utformat för att isolera och hjälpa till att identifiera de viktigaste Candida-arterna. Dess namn BIGGY kommer från förkortningen på engelska Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Den ursprungliga formeln skapades av Nickerson, varför detta medium också kallas Nickerson agar. För närvarande består det av jästextrakt, glycin, dextros, ammoniumcitrat, vismutcitrat, natriumsulfit och agar.
Grafisk representation av BIGGY-agar. Källa: Flickr.com
BIGGY-agar är formulerad för differentiering av arten Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei och C. kefyr, men andra arter växer också såsom Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum och Saccharomyces cerevisiae.
Den har god känslighet och specificitet, men jämförs med andra medier med en liknande funktion, är det på andra plats och överträffas av CHROMagar. Av denna anledning föredrar många laboratorier de senare, även om de är mycket dyrare.
Det bör vara tydligt att användningen av BIGGY-agar, liksom andra liknande medel, hjälper till med en snabb presumtiv identifiering, men aldrig bekräftande. Därför måste ytterligare identifieringsmetoder finnas tillgängliga; till exempel Vitek 32 och API 20 identifieringssystem.
Grund
BiGGY-agar anses vara ett delvis selektivt medium för isolering av jäst, särskilt av släktet Candida, även om andra släkter kan växa.
Det är också ett differentiellt medium eftersom beroende på den berörda arten kommer olika egenskaper att observeras när det gäller utseende, färg, form och storlek. Det anses vara ett kromogent medium på grund av utvecklingen av olika färger i kolonierna.
Färgen på jästkolonierna beror på förekomsten av vismutsulfit i agaren. Nickerson insåg att jästar av släktet Candida utför en extracellulär reduktion av vismutsulfit och omvandlade den till vismutsulfid (en olöslig svart substans). Detta resulterar i ljusbruna till svarta kolonier.
Denna agar innehåller jästextrakt och dextros, som ger källan till basiska näringsämnen och energi för utveckling av jäst. Glycin är ett jästtillväxtstimulant, medan det hämmar tillväxten av vissa bakterier.
I samma mening fungerar ammonium och vismutcitrat såväl som natriumsulfit som hämmare av bakterietillväxt. Agar är det medel som ger den medeltida fasta konsistensen.
Förberedelse
Väg ut 45 g av det dehydratiserade odlingsmediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Skaka och värm blandningen, koka i 1 minut tills fullständig upplösning. Detta odlingsmedium är inte autoklaverbart.
Häll 20 ml på sterila petriskålar efter kylning till cirka 45 ° C i ett vattenbad.
Färgen på det dehydratiserade mediet är gulaktiggrått och framställt är en gulaktig vit gel, i vilken en svag flockningsutfällning kan observeras.
PH bör vara 6,8 ± 0,2.
Det beredda mediet ska förvaras i kylskåp (4 ° C) och skyddas mot ljus. Eftersom det är ett medium som inte kan autoklaveras, bör det användas så snart som möjligt. Användningen rekommenderas före 3 dagar efter beredningen.
Använda sig av
Plattorna inkuberas vid rumstemperatur (25 ° C) under 24, 48 och 72 timmar, och inkubationstiden kan förlängas upp till 5 dagar.
Varje art av Candida utvecklar vissa egenskaper som gör att de skiljer varandra från varandra. Tillverkarna av mediet beskriver följande egenskaper för varje art:
-Candida albicans komplex: utvecklas på denna agar som släta, runda, bruna eller svarta kolonier, med en liten mycelgräns. Med undantag att den mörka färgen inte diffunderar till mitten.
-Candida tropis: ljusa, små, mörkbruna kolonier med en svart mitt och en liten mycelgräns. Den mörka färgen diffunderar mot mitten, en egenskap som är typisk för denna art efter att ha inkuberats i 72 timmar.
-Candida krusei utvecklar stora, platta, grova kolonier med en brun till svartaktig gräns.
-Candida parakrusei: medelstora kolonier, oftast grov, platt. Färgen kan variera från ljus mörkrödbrun till ljusrödbrun. Koloniernas gräns har omfattande, gulaktigt mycel.
-Candida stellatoidea: utvecklar medium, platta kolonier, mörkbrun, nästan svart. Mycelial utveckling är mycket knapp.
En studie utförd av Yücesoy och Marol 2003 visade att CHROMagar-medium har bättre känslighet och specificitet för differentiering och identifiering av olika Candida-arter än BIGGY-agar.
QA
För sterilitetskontroll inkuberas oinokulerade plattor vid 25 ° C, i mörkret under 24 till 48 timmar, förväntas det inte finnas någon tillväxt av något slag eller färgförändring.
ATCC-stammarna som rekommenderas för kvalitetskontroll av mediet är:
Candida albicans ATCC 60193 komplex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. I alla av dessa förväntas tillväxt enligt beskrivningen ovan.
Följande stammar kan också användas:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 och Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. I de första två förväntas total hämning, men vid delvis växande blir kolonierna krämfärgade.
I fallet med S. aureus förväntas det hämmas totalt, men om det växer delvis är dess kolonier vita.
begränsningar
Vissa bakterier kan växa i detta medium och kan till och med bli mörkfärgade, simulera en Candida-koloni, men när man smetar kolonin och observerar den under ett mikroskop kasseras den lätt.
Tabell: Egenskaper för kolonierna hos vissa jästar på BIGGY-agar enligt Yücesoy M och Marol S.
Källa: Yücesoy M, Marol S. Prestanda av CHROMAGAR candida och BIGGY-agar för identifiering av jästarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
referenser
- Yücesoy M, Marol S. Prestanda av CHROMAGAR candida och BIGGY-agar för identifiering av jästarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Tekniska datablad BIGGY Agar. Finns på: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Finns på: foodafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. STORT agar. Finns på: condalab.com
- BD-laboratorier. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Jäst Agar). 2011. Finns på: bd.com