BILE ESCULIN AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den galla eskulin agar är ett selektivt och differentiellt medium fast kultur. Det används som ett diagnostiskt test för att bestämma förmågan hos en viss mikroorganism att växa i ett medium som innehåller galla och också bryter ner glukosid-esculin till esculetin och glukos.

Detta diagnostiska test används för att differentiera arter av släktet Streptococcus som tillhör grupp D (gallesculin-positivt), från andra grupper av Streptococcus som reagerar negativt på detta test.

Galle-esculin-agarplatta, ympad med en Enterococcus-stam (test positivt). Källa: Ingen maskinläsbar författare tillhandahålls. Philippinjl antog (baserat på upphovsrättsanspråk).

Det bör noteras att en del Streptococcus från viridans-gruppen kan hydrolysera esculin, men inte kan växa i närvaro av gall i en koncentration av 40%, därför är reaktionen för denna grupp negativ i detta medium.

Å andra sidan är gallesesculinmediet också användbart för diagnos av Listeria monocytogenes eller Aerococcus sp-arter, eftersom dessa mikroorganismer är gallaesculin-positiva.

Esculin gallagar består av pepton, köttekstrakt, oxgall, esculin, järncitrat, agar och destillerat vatten. Vissa kommersiella hus inkluderar natriumazid i sammansättningen av mediet.

Mediet kan framställas i laboratoriet om du har alla föreningar separat eller det kan framställas från det kommersiella dehydratiserade mediet.

Grund

Esculin-gallemediet innehåller peptoner och köttekstrakt, båda föreningarna ger de nödvändiga näringsämnena för tillväxt av mikroorganismer.

Den innehåller också esculin; Denna förening är en glykosid bildad genom sammanslagning av en enkel monosackarid (glukos) med en förening som kallas 6,7-dihydroxykoumarin eller esculetin (aglucon), kopplad med en acetal eller glukosidisk bindning.

Testet är baserat på att visa om bakterierna kan hydrolysera esculin. Om detta inträffar bryts esculinet ned i esculetin och glukos. Esculetina reagerar med det järn som finns i mediet och bildar en mörkbrun, nästan svart förening.

Detta innebär att järncitrat fungerar som en reaktionsutvecklare. Denna egenskap gör Bile Esculin Agar till ett differentiellt medium.

För sin del är gallan en hämmare som förhindrar tillväxten av vissa mikroorganismer, därför måste bakterien, innan den delar upp esculin, kunna växa i närvaro av gall. Därför anses detta medium vara selektivt.

Bakterierna som kan utvecklas i denna miljö är främst de som lever i tarmmiljön.

I detta avseende lägger vissa kommersiella företag natriumazid till mediet för att ytterligare hämma tillväxten av enteriska Gram-negativa baciller, vilket ökar mediets selektivitet för tillväxten av Streptococcus.

Slutligen ger agaren den fasta konsistensen till mediet och vatten är lösningsmedlet för föreningarna.

Förberedelse

Hemlagad beredning av gallesculin agar

Att väga:

5 g peptoner

3 g köttekstrakt

40 g nötkall

1 g esculin

0,5 g järncitrat

15 g agar

1000 ml destillerat vatten

Vid tillsats av natriumazid vägs 0,25 g / liter och sättes till blandningen.

Lös upp komponenterna i liter destillerat vatten, värm tills föreningarna är helt löst. Fördel 5 ml i 16 x 125 mm provrör. Autoklav vid 121 ° C, 15 kilo tryck under 15 minuter.

Ta bort från autoklaven och luta rören på ett stöd, så att agaren stelnar i en bred flöjt näbb.

Förvara i kylskåp tills användning. Häll till rumstemperatur innan sådd.

Galle-esculinagarplattor kan också framställas; i detta fall autoklaveras hela blandningen i en kolv och fördelas därefter i sterila petriskålar. Låt dem stelna och förvara i kylen.

Mediets pH måste vara 6,6 ± 0,2.

Framställning av gallesesculinagar från ett kommersiellt medium

Väg det belopp som anges i skäret. Detta kan variera från ett företag till ett annat. Därefter fortsätter du på samma sätt som förfarandet ovan.

PH för mediet bör vara 6,6 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är mörkt bärnsten.

Kommersiellt galla-esculinmedium. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

tillämpningar

Galle-esculinmediet används främst för att differentiera grupp D Streptococcus (gallesculin-positiv), från resten av Streptococcus-grupperna (gallesculin negativ).

Om man kombinerar det hypersalterade buljongtillväxtprovet med gallesesculintestet kan man identifiera en speciell grupp av grupp D Streptococcus som kallas Enterococcus.

Denna speciella grupp av Streptococcus tillhör gruppen D av ovannämnda släkt och de kan hydrolysera esculin i närvaro av galla, liksom resten av medlemmarna i grupp D, men de kan också utvecklas i ett hypersaltat medium (BHI med klorid av 6,5% natrium), en egenskap som gör skillnaden.

Därför kallas Streptococci som hydrolyserar esculin gall, men som inte växer i hypersalt buljong, icke-enterococci Group D Streptococci.

sås

Inokulera mediet företrädesvis från en ren Todd-Hewitt 24-timmars buljong.

Tillsätt 2 droppar på ytan på mediet med en Pasteur-pipett och sprid i mediet med en platinaslinga.

Inkubera vid 35 ° C i 48 timmar, medan inkubationstiden är uppnådd kan den övervakas för att se om det finns en positiv reaktion. Om reaktionen vid slutet av tiden förblir negativ kan den inkuberas i upp till 72 timmar.

tolkning

Positiv reaktion : utseendet på en mörkbrun, nästan svart färg i flöjtnäbben (i fallet med rörtestet) eller svärning av agaren runt kolonierna (i fallet med platttestet).

Negativ reaktion : ingen svärtning av mediet inträffar eller det finns ett svart utseende i mindre än hälften av röret efter 72 timmars inkubation. Å andra sidan bör bakterietillväxt i mediet utan den svarta färgens uppfattning betraktas som ett negativt test.

QA

För att utvärdera mediets kvalitet måste en Enterococcus faecalis ATCC 29212-stam vara tillgänglig som en positiv kontroll och en Streptococcus-stam som inte tillhör grupp D som en negativ kontroll.

begränsningar

-Media som inte innehåller natriumazid tillåter tillväxt av enteriska Gram-negativa baciller. Vissa av dem kan svärta mitten.

- Vissa kommersiella hus lägger till låg koncentration av galla (10%) och av denna anledning kan en del Streptococcus som inte tillhör grupp D utvecklas i mediet och hydrolysera esculin, vilket kan generera tolkningsfel.

referenser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Labann Britannia. Esculin gall med azidagar. 2015. Finns på: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, den fria encyklopedin. 22 aug 2017, 17:30 UTC. 22 april 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Finns på: bd.com
7. Neogen Laboratories. Bile esculin agar. Finns på: foodafety.neogen.com