Den cetrimid-agar eller cetrimid är ett selektivt fast kulturmedium utformat för isolering av Pseudomonas aeruginosa. Det är baserat på att visa produktionen av karakteristiska pigment av denna art och gjordes från modifieringen av Tech-agar, skapad av King, Ward och Raney.
Den ursprungliga formeln innehöll salter av magnesiumklorid, kaliumsulfat, bukspottkörtelnsmältning av gelatin och agar-agar. Modifieringen av formeln bestod av tillsats av cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) och glycerol.
Cetrimidagar frönad med Pseudomonas aeruginosa Källa: BiotechMichael, från Wikimedia Commons
Cetrimid-agar är användbar för den mikrobiologiska studien av prover där man misstänker närvaron av Pseudomonas aeruginosa. Det bör noteras att denna bakterie är oerhört viktig, för även om den är en del av den normala miljömikrobiota, uppträder den ofta som en opportunistisk patogen.
Av detta skäl är ett av de vanligaste problemen som orsakas av denna bakterie nosokomiala infektioner, det vill säga de som förekommer i sjukhusmiljön och attackerar patienter som har ett deprimerat immunsystem.
Å andra sidan, på grund av den affinitet som denna mikroorganism har med fuktighet, är de mest sårbara föroreningsmålen: assisterad andningsutrustning, mediciner, nebulisatorer, vattenkällor, luftkonditioneringsapparater, desinfektionsmedel, tvållösningar, injicerbara lösningar, öppna sår , katetrar, urinrör, bland andra.
I detta avseende är cetrimidagar användbar för att utföra mikrobiologiska kontroller och kulturer till de tidigare nämnda elementen.
Grund
Cetrimidagar baseras på mediets förmåga att främja tillväxten av P. aeruginosa, stimulera produktionen av dess pigment och i sin tur hämma tillväxten av andra mikroorganismer.
Dessa egenskaper beror på funktionen för var och en av dess komponenter. Den närvarande gelatinpeptonen tjänar som en källa till kväve, vitaminer och mineraler. Glycerol eller glycerin fungerar som en kolkälla.
För sin del är cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) det ämne som hämmar tillväxten av andra bakterier än P. aeruginosa, inklusive andra arter som tillhör samma släkt.
Inhibering sker eftersom cetramid fungerar som ett katjoniskt tvättmedel och lyckas destabilisera plasmamembranet för de flesta bakterier, med undantag för P. aeruginosa och några andra som lyckas överleva.
Å andra sidan innehåller den magnesiumklorid och kaliumsulfat. Dessa föreningar stimulerar fenotypiskt uttryck relaterat till förmågan hos Pseudomonas aeruginosa att producera olika pigment, inklusive: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin och fluorescein. Slutligen innehåller den agar-agar, vilket ger den en stabil konsistens.
tolkning
Tolkningen av tillväxten erhållen i denna agar utförs enligt följande:
Observationen av runda, jämna kolonier med regelbundna kanter, med produktion av blågrönaktig, grön, brun eller rödaktig pigment, plus utsläpp av fruktig lukt (aminoacetofenon), är ett antagande resultat av närvaron av denna bakterie i nämnda prov.
Å andra sidan är observationen av ett ljust gröngult pigment på kolonierna en indikation på P. aeruginosa när plattan utsätts för ultraviolett ljus.
Fluorescens av P. aeruginosa-kolonier på cetrimidagar under ultraviolett ljus.
Det bör noteras att varje observerad färg beror på produktionen av ett specifikt pigment. Det blågröna pigmentet motsvarar produktionen av pyocyanin, det gröna till pyoverdin, det rödaktiga till pyorubin, det bruna till pyomelanin och den ljusgulgröna fluorescensen under UV-ljus till fluorescein.
Förberedelse
Väg ut 43 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i destillerat vatten. Tillsätt 10 ml glycerol. Ta blandningen till en värmekälla. Låt det koka i några minuter tills fullständig upplösning.
Autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Låt stå och servera i sterila petriskålar när temperaturen är cirka 50 ° C.
Låt stelna, vänd, beställ i plaqueros och förvara i kylen tills den används. Cetrimid-agarplattor bör avlägsnas från kylskåpet i förväg till sådd och får komma till rumstemperatur.
Mediets slutliga pH bör vara 7,2 ± 0,2.
Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och beredningen är ogenomskinlig vit.
tillämpningar
Alla typer av prover i vilka förekomst av Pseudomonas aeruginosa misstänks kan sås på cetrimidagar. Därför är det användbart inom alla områden inom mikrobiologi (miljö, industri, klinik, vatten och livsmedel).
Det är av stor vikt att analysera sjukhusmiljöer och därmed kunna tillämpa korrigerande åtgärder, eftersom denna mikroorganism når patienter genom förorenad utrustning, mediciner, lösningar och tillbehör som används av patienten.
På detta sätt kan mikroorganismen infektera de nedre luftvägarna, urinvägarna och såren hos immunsupprimerade patienter.
Koloniträden av P. aeruginosa kan också göras i mikrobiella gränstester.
sås
Cetrimidagar kan användas som en primär kultur. Plattan ympas på en av sina kanter och därifrån distribueras den genom utmattning till resten av plattan. Flytande prover kan ytas med en drigalski-spatel.
Plattorna inkuberas aerobt vid 37 ° C under 24 timmars inkubation.
begränsningar
-En liten procentandel av Pseudomonas aeruginosas-stammar producerar inte pyocyanin, så ett falskt negativt kan tolkas.
-Vissa Pseudomonas-arter av klinisk betydelse hämmas i detta medium.
- Trots att de egenskaper som beskrivs för Pseudomonas aeruginosa måste observeras måste de bekräftas med ytterligare identifieringstester. Ett test som inte får missa är oxidastestet, det måste ge positivt.
-Vissa Enterobacteriaceae kan växa i detta medium och utveckla ett gult pigment, men det skiljer sig från Pseudomonas aeruginosa genom att när plattan utsätts för ultraviolett ljus finns det ingen fluorescens.
- Serratia marcescens lyckas utveckla och producerar ett rosa pigment.
-Om plattorna som ympats med cetrimidagar exponeras under en tid vid rumstemperatur kan P. aeruginosa-stammarna förlora den fluorescens som observerats under ultraviolett ljus, men egenskapen återvinns om de inkuberas igen vid 37 ° C.
QA
För att analysera den goda prestanda för cetrimidagar kan kontrollstammar användas, såsom: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.
De förväntade resultaten är:
- Bra tillväxt för P. aeruginosa, med blågrönt pigment och positivt fluorescein.
- S. maltophilia och S. aureus kommer delvis att vara helt inhiberade.
- Escherichia coli förväntas hämmas fullständigt.
referenser
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypisk och serologisk karaktärisering av kliniska isolat från Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimid-agarbas. 2014. Finns på: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimide agar. 2015. Finns på: britanialab.com
- BD-laboratorier. BD Pseudosel-agar (Cetrimide-agar). 2013. Finns på: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. Tillgänglig på: http://f-soria.es