- Grund
- tillämpningar
- Chokladagar förberedd med Columbia agar
- Chokladagar framställd med GC-basagar (för gonokocker)
- Chokladagar förberedd med Müeller Hinton-agar
- Chokladagar förberedd med Thayer Martin agar
- Förberedelse
- beräkningar
- Väg och upplös
- Sterilisera
- Blodaggregat
- Ett annat sätt att förbereda chokladagar utan att använda blod
- QA
- referenser
Den chokladagar är ett fast odlingsmedium, berikat, icke - selektiva och icke - differential. Det används främst för isolering av mikroorganismer som krävs ur näringssynpunkt, även om alla typer av bakterier kan växa i den.
Av detta skäl ökar dess användbarhet särskilt vid sådd av prover som normalt är sterila, såsom CSF och ledvätska. Även om det också ingår i det valda sättet att såga polymikrobiella prover, men i dessa fall är det nödvändigt att lägga till antibiotika som hämmar den samtidiga floran.
Chokladagar med bakterietillväxt
Detta medium har en karakteristisk brun färg som mycket liknar choklad, därav dess namn. Beredningen är mycket lik blodagar, bara i detta fall måste blodet upphettas för att de röda blodkropparna ska bryta ner.
Dess beredning, som blodagar, är mycket känslig eftersom den lätt förorenas. Av denna anledning föredrar många laboratorier att förvärva detta medium som redan är förberett av kommersiella företag som garanterar dess kvalitet.
Grund
Detta medium består av en näringsrik agarbas och uppvärmt blod. Hemolysen av röda blodkroppar tillhandahåller faktor X (hemin) och faktor V (NAD), nödvändig för tillväxten av vissa mikroorganismer, såsom släktet Haemophilus. Det är också mycket användbart för isolering av Neisserias sp.
Liksom blodagar kan olika media användas som basagar beroende på behov. Bland de medier som används är hjärnainfusion och tryptikas sojaagar, även om de mest rekommenderade är Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar och Thayer Martin agar.
Vissa varianter av chokladagar inkluderar ett kommersiellt tillgängligt förstärkt tillägg som kallas Isovitalex eller Polivitex.
Dessa kosttillskott innehåller vitamin B 12 , L-glutamin, adenin, guaninhydroklorid, p-aminobensoesyra, nikotinamidadenkleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, järnnitrat, tiaminhydroklorid, cysteinhydroklorid, L-cystin och glukos.
Det är viktigt att notera att chokladagar är mer anrikad än blodagar, men det tillåter inte observation av hemolysmönster.
tillämpningar
Källa: pixnio.com. Författare:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP
Chokladagar förberedd med Columbia agar
Detta medium innehåller könsbrittssmältning av kasein och hjärta, peptisk matsmältning av kött, natriumklorid, agar, jästextrakt och majsstärkelse. Den är också rik på vitaminer, mineraler och essentiella aminosyror.
Denna uppvärmda blodbas är idealisk för isolering av bakterier i släktet Neisseria. Å andra sidan, om ett tillägg för Brucella tillsätts till mediet kan den nämnda mikroorganismen isoleras. Resultaten förbättras med hjälp av hästblod.
Chokladagar framställd med GC-basagar (för gonokocker)
Detta medium innehåller peptoner, majsstärkelse, monobasiska och dibasiska buffertar, natriumklorid och agar.
De flesta kommersiellt framställda chokladagarpresentationer kommer med denna bas och innehåller inte upphettat blod, utan snarare en syntetisk blandning av hemin och ett kemiskt tillskott av tillväxtfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyror, faktor V och glukos.
Chokladagar förberedd med Müeller Hinton-agar
Det används för att testa den antimikrobiella känsligheten hos snäva mikroorganismer, såsom Streptococcus pneumoniae med 5% upphettat fårblod.
Det används också för primär isolering av Neisserias och Haemophilus, men i det speciella fallet för isolering av Haemophilus föredras användning av hästblod, eftersom det är en rik källa till faktor X och V.
Å andra sidan, om provet som ska sås kommer från ett icke-sterilt område, rekommenderas tillsats av antibiotika för att hämma den normala floran i området.
Exempel på andningsprover där förekomst av bakterier i släktet Haemophilus misstänks, bacitracin används för att hämma tillväxten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus och saprophytic Neisserias.
När det gäller genital chancre-prover, där Haemophilus ducreyi misstänks, har en chokladagar framställd enligt följande använts med framgång: Müeller - Hinton-agar med 5% chokladhästblod, 1% berikning av Isovitalex och 3 pg / ml vankomycin.
Chokladagar förberedd med Thayer Martin agar
Detta medium är speciellt för isolering av Neisseria gonorrhoeae. Det måste innehålla antibiotika för att hämma den medföljande floran. Lammets blod används.
Förberedelse
Du bör se indikationerna för beredningen av basagaren som ska användas. De finns på baksidan av behållaren med det dehydratiserade mediet. De beskriver i allmänhet hur mycket du måste väga för att förbereda en liter kulturmedium.
Den exakta mängden som behövs kan beredas på laboratoriet, den kan vara mer eller mindre än en liter.
beräkningar
En regel om tre används för att beräkna hur mycket man ska väga för att förbereda den önskade volymen. Exempel:
Om det för 1 liter är nödvändigt att väga 40 gr och laboratoriet kräver 800 ml, sägs det:
1000 ml ----------- 40 gr
800 ml -----------– X
Formeln kommer att vara följande:
X = 32 gr (kvantitet som ska vägas för 800 ml).
Väg och upplös
Den nödvändiga mängden vägs och placeras i en kolv med vattnet.
Värm över måttlig värme och blanda försiktigt med roterande rörelser tills det dehydratiserade mediet helt upplöses, låt det koka i 1 minut.
Sterilisera
Kolven placeras i autoklaven för att sterilisera mediet vid 121 ° C under 20 minuter.
Blodaggregat
När man lämnar autoklaven får man stå tills temperaturen på mediet är ungefär mellan 56 till 70 ° C för att placera blodet och blanda tills mediet blir brunt.
Om du lägger till kosttillskott är det dags att göra det. Blanda därefter och servera 20 ml till varje steril petriskål.
Hela förfarandet bör göras i en laminär flödeshuva eller runt Bunsen-brännaren.
Låt stå tills de stelnar och förvaras inverterat i kylen.
Ett annat sätt att förbereda chokladagar utan att använda blod
Basmediet framställs såsom beskrivits ovan, det kommersiellt erhållna dehydratiserade hemoglobinet löses och steriliseras i autoklaven.
Båda lösningarna får svalna till 50 ° C, sammanfogas och tillskottet tillsättes. Blanda under aseptiska förhållanden och server sedan i sterila petriskålar.
QA
Det är viktigt att blodet placeras vid den angivna temperaturen, eftersom det är det ideala att lysa de röda blodkropparna och samtidigt bibehålla faktor V, som är värmekänslig.
Inga bubblor ska finnas kvar på ytan av agaren. Från varje sats med 100 plattor bör en eller två plattor inkuberas i ugnen vid 37 ° C i 24 timmar för att verifiera deras sterilitet.
För bästa resultat ska chokladagar användas kort efter beredningen.
Kontrollbakteriestammar bör förvaras i laboratoriet för att utvärdera effektiviteten hos det färska mediet för tillväxt av de viktigaste hårda mikroorganismerna av klinisk betydelse.
referenser
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
- Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Möjlighet att använda GC-Biocen Agar baskulturmedium i mikrobiologilaboratoriet. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Finns på: scielo.sld.
- Wikipedia-bidragsgivare. Chokladagar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 17 december 2018, 19:54 UTC. Finns på: en.wikipedia.org.