SIMMONS CITRATE AGAR: BEGRÄNSNING, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar Simmons citrat det är ett fast medium används som biokemiska identifieringstestmikroorganismer, särskilt gram - negativa baciller. Det ursprungliga mediet skapades av Koser 1923.

Kosers citratmedium bestod av en buljong innehållande natriumfosfat, ammoniumfosfat, monopotassiumfosfat, magnesiumsulfat och natriumcitrat.

A. Dehydratiserat Simmons Citrate Agar kommersiellt medium B. Beredd Simmons Citrate Agar. Källa: A. Foto taget av MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, från Wikimedia Commons

Som man kan se, är den enda källan till kol i mediet citrat, och av kväve är ammoniumfosfat, och proteiner och kolhydrater utelämnas som en källa till dessa element, de finns ofta i andra media.

Därför kan bakterierna som ympas i detta medium endast reproducera sig om den kan ta upp kolet från citrat. Testet var positivt om det var grumlighet i mediet, men det hade nackdelen att ospecifik grumlighet kunde uppstå.

Detta problem löstes av Simmons genom att tillsätta bromotymolblått och agar till Kosers ursprungliga formel. Även om principen är densamma, tolkas den annorlunda.

Grund

Vissa bakterier har förmågan att överleva i frånvaro av jäsning eller mjölksyraproduktion och behöver få energi genom användning av andra substrat. I detta test är den enda kolkällan som erbjuds citrat.

Bakterier som kan överleva under dessa förhållanden metaboliserar citrat snabbt i ett alternativ till den traditionella vägen, med användning av trikarboxylsyracykeln eller citratfermenteringscykeln.

Katabolismen av citrat av bakterier innefattar en enzymatisk mekanism utan ingripande av koenzym A. Detta enzym är känt med namnet citricas (citratoxaloacetat lyas) eller citrat desmolas. Reaktionen kräver närvaro av en tvåvärd katjon, som i så fall tillförs av magnesium.

Reaktionen alstrar oxaloacetat och pyruvat, som sedan ger upphov till organiska syror i mitten av ett alkaliskt pH bildat genom användning av kvävekällan. Dessa organiska syror används som en kolkälla som genererar karbonater och bikarbonater, vilket ytterligare alkaliserar miljön.

Såningsläge

Simmons citratmedium bör lätt inokuleras i fiskstjärna med en rak slinga eller nål och inkuberas i 24 timmar vid 35-37 ° C. Efter tiden observeras resultaten.

Såddningen sker endast på ytan av agaren. Punktera inte.

tolkning

Om mediet förblir den ursprungliga färgen (grön) och det inte finns någon synlig tillväxt, är testet negativt, men om mediet blir blått indikerar det närvaron av alkaliska produkter, som upptäcks av pH-indikatorn. I detta fall är testet positivt.

Citrat (+) och (-). Källa: MSc. Marielsa gil

Detta händer eftersom om bakterien använder citratets kol kan den också ta kväve av ammoniumfosfat som den frigör ammoniak, vilket alkaliserar mediet.

Å andra sidan, om tillväxt av bakterier observeras i mediet, men det inte sker någon färgförändring, måste testet också betraktas som positivt, eftersom om det finns tillväxt betyder det att bakterierna kunde använda citrat som kolkälla, även om det inte finns någon förändring i pH just nu (ibland kan det ta tid).

Om det finns några tvivel i tolkningen av den slutliga färgen, kan den jämföras med ett icke-inokulerat citratrör.

Förberedelse

Väg 24,2 g av det dehydratiserade mediet i en liter vatten. Blanda och låt den vila i cirka 5 minuter. Avsluta med att lösa upp mediet genom att värma i 1 eller två minuter, skaka ofta.

Häll 4 ml i provrör och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. När du lämnar autoklaven, luta med hjälp av ett stöd på ett sådant sätt att agaren stelnar i form av en flöjt näbb med lite block eller botten och mer avfasning.

Det slutliga pH för citratmediet är 6,9 (grön färg). Detta medium är mycket känsligt för förändringar i pH.

Vid pH 6 eller lägre blir mediet gult. Denna färg observeras inte i bakterietestet.

Och vid pH 7,6 eller högre blir mediet djupt preussiskt blått.

Använda sig av

Simmons Citrate Agar används för identifiering av vissa mikroorganismer, särskilt baciller som tillhör Enterobacteriaceae-familjen och andra icke-glukosfermenterande baciller.

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

Slutgiltiga tankar

Simmons citratmedium är ett mycket känsligt test, eftersom falska positiva resultat kan erhållas om vissa misstag görs.

Den omsorg som måste vidtas är följande:

inokulat

En mycket tjock eller belastad bakteriell ympning bör inte göras, eftersom det kan orsaka att en gult färg i coppery utvecklas på såplatsen utan att påverka resten av mediet, men det kan leda till att det finns tillväxt. Det betyder inte testets positivitet.

Dessutom kan en tjock inokulum generera ett falskt positivt, eftersom organiska föreningar som formas in i cellväggarna hos döende bakterier kan frigöra tillräckligt med kol och kväve för att vrida pH-indikatorn.

Därför är idealet att så med hjälp av nålen istället för platinahandtaget för att undvika att ta överflödigt material.

sås

Å andra sidan, när batteriet med biokemiska tester för identifiering av mikroorganismen i fråga utsädes, är det viktigt att citratprovet är det första som ympas, för att undvika överföring av proteiner eller kolhydrater från ett annat medium.

Under denna omständighet är det möjligt att få ett falskt positivt, eftersom någon av dessa ämnen som införs av misstag kommer att metaboliseras och orsakar en förändring i pH.

Ett annat sätt att undvika överföring av ämnen är att bränna slingan väl och ta en ny inokulum mellan ett test och ett annat.

Man måste också vara försiktig när man vidrör kolonin för att utföra ympningen, eftersom det bör undvikas att dra en del av agaren från kulturen från vilken bakterierna kommer, på grund av det ovan förklarade.

I detta avseende rekommenderar Matsen, Sherris och Branson att späda inokulatet i fysiologisk lösning innan inokulera citratprovet för att undvika överföring av andra kolkällor.

Färgintensitet

Det bör beaktas att intensiteten på färgen som produceras när testet är positiv kan variera beroende på affärshuset.

Dessutom finns det mikroorganismer som testar positivt efter 24 timmar, men det finns andra stammar som kräver 48 timmar eller mer för att producera en förändring i pH.

referenser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
4. BD-laboratorier. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Finns på: bd.com
5. Britannia Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016. Finns på: andinamedica.com.