KLISTRAD AGAR: GRUND, ANVÄNDNING OCH BEREDNING - BIOLOGI - 2025

Den CLED agar (cystin-laktos-elektrolyt-Deficient) är ett fast odlingsmedium avvikelsen, användas för diagnos av urinvägsinfektioner. Kulturmediets sammansättning är utformad för god tillväxt av urinpatogener och är idealisk för kvantifiering av kolonidannande enheter (CFU).

CLED-odlingsmediet är icke-selektivt, eftersom Gram-negativa och Gram-positiva mikroorganismer kan växa i det. Men detta är inte ett problem, eftersom de flesta UTI orsakas av endast en typ av mikroorganism.

CLED agar

Vid polymikrobiella infektioner kan 2 eller 3 olika bakterier erhållas, men det är mycket sällsynt och för det mesta är det kontaminerade prover.

Bland Gram-negativa bakterier som kan växa i detta medium är bacillerna som tillhör familjen Enterobacteriaceae och andra enteriska baciller, varvid uropatogenerna oftast isoleras i urinprover är följande: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, bland andra.

På samma sätt är bland de Gram-positiva bakterierna som kan växa i detta medium Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp och till och med jäst, såsom Candida albicans-komplexet.

På grund av mediets kemiska sammansättning tillåter det emellertid inte tillväxt av vissa krävande genitourinära patogener, såsom Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, bland andra.

CLED Agar Rationale

CLED-odlingsmediet har köttekstrakt, pankreashydrolysat av kasein och hydrolysat av gelatin som energikälla. De tillhandahåller näringsämnen för utveckling av krävande bakterier.

Den innehåller också cystin, en aminosyra som tillåter tillväxt av koliformer, som kan särskiljas genom deras lilla storlek.

På samma sätt innehåller den laktos som ett jäsbart kolhydrat, av detta skäl är detta medium differentiellt; att kunna skilja jäsningsbakterierna från jäsningen som inte är laktos.

Jäsande bakterier får mediets pH-värde att förändras genom produktion av syror, utveckla gula kolonier, medan icke-jäsande bakterier inte genererar förändringar i mediet, därför tar de färgen på den ursprungliga agaren, grön.

Fermentationsreaktionen avslöjas tack vare närvaron av pH-indikatorn, som i detta medium är brothymolblått.

Å andra sidan hämmar mediets låga elektrolytkoncentration den typiska invasiva tillväxten av släktet Proteus, kallad den uppvärmande effekten. Detta genererar en fördel jämfört med andra media, eftersom det tillåter räkning av CFU: er, inklusive om Proteus-släktet är närvarande.

Emellertid hämmar den låga koncentrationen av elektrolyter tillväxten av vissa arter av släktet Shigella, vilket är en nackdel jämfört med andra media.

Motivering för CLED-agar (Bevis)

Det finns en variant eller modifiering av detta medium gjord av Bevis, som införlivade syrafuchsin (Andrades indikator) i den ursprungliga kompositionen. Det fungerar tillsammans med bromotymolblått för att skilja jäsning från icke-jäsande bakterier.

Skillnaden mellan konventionellt och modifierat medium är färgen som kolonierna tar på sig. När det gäller laktosfermenterande bakterier blir kolonierna rödorange med en rosa eller röd gloria, medan de icke-jäsande bakterierna är blågrå.

tillämpningar

CLED-agar används uteslutande för utsäde av urinprover. Användningen av detta medium är särskilt ofta i europeiska laboratorier, medan det i Amerika används mindre.

Provsamling måste uppfylla vissa parametrar för att få tillförlitliga resultat, inklusive:

• Ta inte antibiotika innan provtagning.
• Ta helst urinen först på morgonen, eftersom det är mer koncentrerat, när det inte är möjligt att ta provet med invasiva metoder.
• Tvätta könsdelarna väl innan du tar provet.
• Kasta den första urinströmmen och placera sedan behållaren.
• Samla 25 till 30 ml urin i en väl märkt steril behållare.
• Ta omedelbart till laboratoriet omgiven av is.
• Det måste behandlas inom 2 timmar efter utfärdandet eller kylas vid 4 ° C i högst 24 timmar.

Sådd urinprover

Urinprovet ska spädas 1:50.

För utspädning, placera 0,5 ml patienturin och späd med 24,5 ml steril fysiologisk lösning.

Mät ut 0,1 ml av den utspädda urinen och ytans spridning med en drigalski-spatel på CLED-mediet. Detta är den bästa såningsmetoden för att räkna kolonier. Av denna anledning används det i urinprover eftersom resultaten måste uttryckas i CFU / ml.

Gör så här för att kvantifiera de erhållna kolonierna: räkna kolonierna på plattan och multiplicera med 10 och sedan med 50. Detta ger dig mängden CFU / ml urin.

tolkning

Räknar över 100 000 CFU / ml - Indikerar urininfektion

Räknar under 1000 CFU / ml- Ingen infektion

Räknar mellan 1000-10.000 CFU / ml - Tvivelaktig, möjlig förorening, upprepa provtagningen

ID

Kolonierna som odlas på CLED-agar bör ha en Gram och beroende på mikroorganismens morphotintoriella egenskaper utförs en viss subkultur.

Om det till exempel är en Gram-negativ bacillus sås den på en MacConkey-agar, där jäsningen eller inte av laktos är bekräftad. Dessutom fästs en näringsagar för att utföra oxidas-testet.

Om Gram avslöjar Gram-positiva cocci, kan den subkultureras på salt mannitolagar och på näringsagar. I det senare utförs katalasstestet. Slutligen, om jäst observeras, sås det på Sabouraud agar.

Många laboratorier undviker användning av CLED-medium och föredrar endast att använda blodagar, MacConkey och näringsämnen till urinprover från utsäde.

Förberedelse

I en kolv med en liter destillerat vatten löses 36,2 g CLED agarpulver. Efter 5 minuters stående uppvärmning av den återsuspenderade agaren, blandning konstant till kokning under 1 minut.

Sterilisera sedan vid 121 ° C i 15 minuter i autoklaven. I slutet av tiden avlägsnas den från autoklaven och får svalna till en temperatur av 45 ° C. Därefter serveras 15-20 ml i varje steril petriskål.

Plåtserveringsproceduren måste utföras inuti en laminär flödeshuva eller framför Bunsenbrännaren för att undvika kontaminering.

Plåtarna som serveras lämnas till stelning, arrangeras i ett inverterat rack och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills användning.

Det slutliga pH för det beredda mediet bör vara 7,3 ± 0,2.

referenser

1. Rekommendationer för mikrobiologisk diagnos av urininfektion. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Finns på: scielo.org.
2. Panchi J. Identifiering av det mikrobiella medlet som orsakar urinvägsinfektioner hos patienter som genomgår blåsekateterisering. 2016. Grundarbete för att kvalificera sig för kandidatexamen i kliniskt laboratorium. Technical University of Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED medium. Finns på: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Bruksanvisning, CLED Agar. 2013 Finns på: es.renylab.ind.br.
5. Odlade laboratorier. Grundläggande manual för mikrobiologi. Finns på: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agaralternativet i urinodlingsrutin. En prospektiv och jämförande utvärdering. Diagnostik Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.