CZAPEK AGAR: GRUND, BEREDNING, ANVÄNDNING OCH BEGRÄNSNINGAR - BIOLOGI - 2025

Den Czapek (CZA) är ett selektivt fast medium särskilt utformade för odling av saprofytiska bakterier och svampar. Det skapades av botanisten Friedrich Johann Franz Czapek, av polskt ursprung, och den amerikanska kemisten Arthur Wayland Dox; av denna anledning är denna agar också känd som Czapek-Dox-medium.

Det ursprungliga mediet var flytande, men agar tillsattes senare för att göra det till ett fast medium. Czapek-medium består av natriumnitrat, bipotassiumfosfat, magnesiumsulfat, kaliumklorid, järnhaltig sulfat, sackaros, agar och destillerat vatten.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Källa: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH för Czapek agar är 7,3, men det finns en variant till vilken 10% mjölksyra tillsätts, vars pH förblir vid 3,5. Detta syremedium används för odling av syrofila mikroorganismer.

Å andra sidan modifierade vissa kommersiella hus sammansättningen av Czapek agar genom att byta magnesiumsulfat och bipotassiumfosfat med glycerofosfat; denna modifiering förhindrar magnesiumfosfatfällningen observerad med den konventionella formeln från att bildas. På samma sätt finns det en annan variant till vilken jästekstrakt läggs till.

Slutligen rekommenderas Czapek agar av American Public Health Association APHA för studien av Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp och Penicillium sp. Dessa arter kännetecknas av att de är miljömässiga mikroorganismer och opportunistiska patogener.

Grund

Detta medium innehåller sackaros; Detta kolhydrat fungerar som kolkälla, medan natriumnitrat är kvävekällan, men till skillnad från andra media är kvävet som tillhandahålls oorganiskt.

Av detta skäl anses Czapek-mediet vara selektivt, eftersom endast mikroorganismer som kan använda oorganiska föreningar som enda kvävekälla kan växa.

Som ett reglerande ämne för mediets osmolaritet är bipotassiumfosfat. För sin del tillhandahåller magnesiumsulfat, kaliumklorid och järn sulfat viktiga mineraler för tillväxt av saprofytiska (frittlevande) mikroorganismer. Denna formel bildar en fällning av magnesiumfosfat.

Slutligen är agar-agar den förening som ger den fasta konsistensen till mediet och vatten är lösningsmedlet för alla komponenter.

Med den modifierade Czapek-agarformeln finns det ingen bildning av fällningar och det förbättrar tillväxtprestanda för vissa svampar.

Acid Czapek Agars extrema surhet gör det till ett mer selektivt medium, vilket endast tillåter tillväxt av sura mikrofilmer som kan utnyttja oorganiskt kväve. Samtidigt förbättrar Czapek-jästagar prestanda för vissa svampar.

Förberedelse

Medium Czapek-Dox

Väg upp 49 g av det dehydratiserade odlingsmediet och upplöst i destillerat vatten. Applicera värmen tills den kokar. Skaka blandningen ofta tills den är helt upplöst.

-Czapek Agar kilar

Distribuera den upplösta blandningen i rör och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. När du tar bort från autoklaven, homogenisera innan du lägger ned rören och låt stelna.

-Czapek agarplattor

Autoklavera den upplösta blandningen vid 121 ° C i 15 minuter och låt den svalna till 50 ° C, homogeniseras och häll 20 ml i sterila petriskålar. Låt stelna, vänd in och förvara i kylen tills den används.

PH bör förbli vid 7,3 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är vit och det beredda mediet är ljusbärnstens, något grumligt på grund av närvaron av en flockningsberoende fällning.

Czapek-medium vid surt pH

Förbered som redan beskrivits, men tillsätt 10 ml steril 10% mjölksyra för varje liter beredd medium. Det modifierade Czapek-mediet bör ligga vid pH 3,5 ± 0,2.

Modifierat Czapek Medium

Väg ut 45,4 g av det uttorkade mediet och upplöst i 1 liter vatten. Resten av beredningen är densamma som beskrivits ovan. Färgen på det dehydratiserade mediet är vit och det beredda mediet är vitaktig. Mediets slutliga pH är 6,8 ± 0,2.

Czapek-jästmedium

Kallas också Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Den innehåller elementen i den klassiska Czapek-agaren plus jästextrakt.

Använda sig av

Czapek-mediet används för att söka efter saprofytiska mikroorganismer i prover av jord, grönsaker, spannmål, luft, insekter, bland andra.

Czapek-agar vid surt pH-värde används för tillväxt av syrofila mikroorganismer, medan modifierad Czapek-agar är särskilt användbar för bildning av klamydosporer i arter av Candida albicans-komplexet.

Slutligen är Czapek-jästagar mycket användbar för isolering av Aspergillus och Penicillium.

sås

-Czapek agar

För att söka efter Actinomycetes i jorden, fortsätt enligt följande: provet behandlas med fenoliserat vatten under 30 minuter och sedan sås 1 ml av suspensionen på Czapek agar. Inkubera vid 28 ° C i 5 till 7 dagar.

För prover av grönsaker, spannmål och insekter placeras de direkt på agaren. Du kan också göra spädningar och utsäde 0,1 ml på agarytan.

-Modifierad Czapek-agar

För sådd används en rak slinga eller nål, den impregneras med vattpinnen och agaren ympas genom att göra en punktering tills den berör plattans bas. Inkubera i 24 timmar vid 28 ° C och undersök under mikroskop över och under plattan för att se om klamydosporer har bildats.

Inkubationstemperatur och -tid

Inkubationstemperaturen och tiden varierar beroende på typen av mikroorganism som ska isoleras. Plattor inkuberas vanligtvis under en till två veckor i ett temperaturintervall av 20 till 25 ° C.

Det finns emellertid specifika förhållanden för vissa stammar. Till exempel växer de flesta arter av släktet Aspergillus optimalt vid 30 ° C; A. A. fumigatus växer emellertid vid 50 ° C.

När det gäller inkubationstiden är en eller två veckor normal, men Candida albicans kan utvecklas inom 24 till 48 timmar vid 25 ° C.

Egenskaper hos vissa kolonier på detta medium

-Penicillium atrovenetum

Det utvecklas under 12 dagar inkubation vid 27 ° C. Deras kolonier är små (25 mm).

Kolonierna har ett sammetiskt utseende, med en definierad vit kant och en blågrön nyans i mitten som blir grå när den åldras. Koloniens baksida är orange, vilket gör mitten till samma färg på grund av pigmentproduktionen.

-Aspergillus niger

Det utvecklas med vitt till gult mycel och svarta sporer.

-Candida albicans

Krämig ljusbeige kolonier utvecklas. I modifierad Czapek-agar bildar den klamydosporer.

-Aspergillus parasiticus

Ett mörkgrönt mycel utvecklas på 7 dagar vid 25 ° C.

QA

För att utvärdera odlingsmediets kvalitet kan certifierade kontrollstammar planteras, såsom: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger utvecklar vitt till gult mycelium och svarta sporer på cirka 5 dagar, medan Candida albicans kommer att ha en tillfredsställande tillväxt under 24 timmars inkubation vid 25 ° C; kolonierna är krämfärgade.

begränsningar

Vissa studier har visat att för återvinning av Actinomycetes är agaren med bästa utbyte potatisdextrosagar, med Czapek agar på andra plats, men för återvinning av Aspergillus och Penicillium är Czapek agar den som ger den högsta återvinningsgraden.

referenser

1. Dávila M, et al. Antagonistiska aktinomyceter mot fytopatogena svampar av jordbruksvikt. Pastor Mex. Vetenskap. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Finns på: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, vete Á. Isolering av stammar av Aspergillus niger, producerande ochratoxin A, i lagrat grönt kaffe (Coffea arabica). Pastor Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Finns på.scielo.org.
3. Wikipedia-bidragsgivare. Czapek medium. Wikipedia, den fria encyklopedin. 13 januari 2019, 20:30 UTC. Finns på: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Modifierad Czapek-Dox Agar. Finns på: condalab.com
5. Culture Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible på: Medioscultivo.com