Den EMB agar är ett selektivt och differentiellt medium som används för fast odlings isolering av gramnegativa baciller, speciellt Enterobacteriaceae och andra gramnegativa bakterier mindre krävande. Det är också känt av förkortningen EAM, som står för eosin-metylenblått.
Detta medium skapades av Holt-Harris och Teague 1916. Det innehåller pepton, laktos, sackaros, dipotassiumfosfat, agar, eosin, metylenblått och vatten. Det liknar mycket MacConkey Agar, särskilt när du använder Levines modifierade EMB Agar, som inte innehåller sackaros.
Metallisk glans av Escherichia coli på EMB-agar Källa: Carmen Moreno González, från Wikimedia Commons
I själva verket beslutar varje laboratorium om man ska arbeta med det ena eller det andra, eftersom de uppfyller samma funktion, även om de är biokemiskt olika.
Det har till och med samma nackdel som klassisk MacConkey-agar när det gäller att värma produktion av släktet Proteus. För att undvika detta fenomen kan agarkoncentrationen därför ökas med upp till 5%.
Grund
Selektiv
EMB-agar är subtilt selektiv eftersom den innehåller anilinfärgämnen (eosin och metylenblått), som fungerar som hämmare, vilket förhindrar tillväxten av de flesta Gram-positiva bakterier och några snåla Gram-negativa stavar.
Denna agar har emellertid nackdelen att vissa Gram-positiva bakterier kan motstå närvaron av de hämmande substanserna och växa som små färglösa punktskolonier, såsom Enterococcus faecalis och vissa Staphylococcus.
Vissa jästar kan också växa, till exempel Candida albicans-komplexet, vilket ger mycket små rosa kolonier. Klamydosporer kan till och med utvecklas från denna jäst om provet är djupfröat.
Differentiell
Å andra sidan är EMB-agar också ett differentiellt medium, eftersom dessa färgämnen tillsammans (eosin och metylenblått) har egenskapen att bilda en fällning vid surt pH, därför tjänar de som indikatorer för dess produktion.
Således producerar svagt laktos- eller sackarosfermenterande bakterier lila kolonier inom 24 till 48 timmar. Till exempel släkten Klebsiella, Enterobacter och Serratia.
De bakterier som kraftigt fermenterar laktos, såsom Escherichia coli eller sackaros, såsom Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, bildar en grönsvart fällning, vilket ger ett karakteristiskt metalliskt glansutseende i dessa arter.
Det bör noteras att om EMB-levinmedium (utan sackaros) används, kommer Yersinia enterocolitica och Proteus penneri att producera klara kolonier.
Bakterier som inte fermenterar laktos eller sackaros näras av närvaron av peptoner, som ger de aminosyror och kväve som är nödvändiga för bakterietillväxt, och producerar klara kolonier. Till exempel släkten Salmonella och Shigella, bland andra.
På samma sätt är det viktigt att notera att släktet Acinetobacter kan presentera lavendelblå kolonier, även om det inte är en laktosfermenter eller sackaros, men har egenskapen att fixera metylenblått på dess cellvägg. Detta kan också hända med andra oxidativa bakterier.
Förberedelse
Det ursprungliga dehydratiserade mediet är ljusbeige i färg.
För att framställa detta odlingsmedium måste 36 gram av det dehydratiserade mediet vägas och suspenderas i en kolv innehållande en liter destillerat vatten.
När du har låtit blandningen vila i 5 minuter, ta kolven till en värmekälla, blanda kraftigt och ständigt tills den kokar och upplöses helt.
Därefter måste det redan lösta odlingsmediet steriliseras med hjälp av autoklaven vid 121 ° C under 15 minuter.
I slutet av tiden tas den bort från autoklaven och lämnas för att stå kort. Sedan serveras fortfarande varm (45-50 ° C) 15-20 ml agar i varje steril petriskål. Mediet ska vara lakmusblått.
Efter servering lämnas plattorna något täckta tills agaren svalnar något. De täcks sedan och får stelna fullständigt. Därefter arrangeras de i inverterade platthållare och förvaras i kylskåp (8 ° C) tills användning.
Denna procedur utförs företrädesvis i en laminär flödeshuva eller framför en Bunsen-brännare för att undvika kontaminering.
Det är viktigt att komma ihåg att varje kommersiellt hus kommer att ange hur mycket som ska vägas för att förbereda odlingsmediet.
Mediets slutliga pH måste vara 7,2 ± 0,2
tillämpningar
Detta medium används för att så urin och avföring eller vilken typ av klinisk prov som helst, speciellt om förekomsten av icke-snäv gramnegativa baciller misstänks, till exempel bacillerna som hör till familjen Enterobacteriaceae, som växer mycket bra på detta medium.
Enteropatogena bakterier från Shigella- och Salmonella-släkten kännetecknas av deras färglösa eller svagt bärnstensfärgade kolonier.
Andra icke-laktosfermenterande baciller som Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, växer också.
På samma sätt är detta medium mycket användbart i den mikrobiologiska analysen av mat och vatten, eftersom det är idealiskt för den fullständiga bekräftande fasen för bestämning av coliforms, det vill säga att bekräfta närvaron av E. coli från grumliga EG-buljonger från av den mest troliga siffertekniken (MPN).
QA
För att verifiera att det nylagda odlingsmediet fungerar bra kan kontrollstammar planteras för att observera koloniernas egenskaper och kontrollera att de ger som förväntat.
För detta kan ATCC-stammar eller väl identifierade stammar av E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa och vissa Gram-positiva bakterier, såsom S. aureus, användas.
E. coli förväntas generera väl utvecklade blå-svarta kolonier med en grön metallisk glans. Enterobacter aerogenes och Klebsiella sp bör ge väl utvecklade blå-svarta slemkolonier.
Å andra sidan måste Salmonella typhimurium och Shigella flexneri utveckla stora kolonier, färglösa eller med en liten bärnstensfärg.
Slutligen växer släktet Pseudomonas aeruginosa som färglösa kolonier av oregelbunden storlek, medan Gram-positiva bakterier bör hämmas totalt eller växa gles med mycket små kolonier.
Slutgiltiga tankar
Ibland får steriliseringen att metylenblått reduceras, vilket visar en medellång orange färg. För att metylenblått ska oxidera och återvinna den lila färgen, måste den blandas försiktigt tills färgen har återhämtats.
Efter sterilisering kan färgämnet också fällas ut, så det bör blandas väl innan Petri-skålarna serveras.
referenser
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B och Velázquez O. 2009. Tekniker för mikrobiologisk analys av livsmedel. 2: a upplagan Fakulteten för kemi, UNAM. Mexico.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karaktärisering och distribution av potentiellt patogena Escherichia coli-stammar isolerade från slaktkyllingar från fjäderfägårdar i Peru. Rev. investiga. veterinär. Peru 2012 23 (2): 209-219. Finns på: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin och Methylene Blue Agar. 2010. Finns på: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (With Eosin and Methylene Blue) 2011. Tillgänglig på: britanialab.com
- BD-laboratorier. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), modifierad. 2013. Finns på: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA