Den agar Endo eller Endo mediet är ett fast medium, differential och med viss grad av selektivitet kultur. Den ursprungliga formeln skapades av Endo 1904 för att skilja laktosfermentering från icke-jäsande bakterier. Ursprungligen var det utformat för isolering av Salmonella typhi, men senare blev syftet med mediet att söka efter koliformer.
Endo Agar-principen har varit kvar, men dess formulering har genomgått otaliga förändringar genom åren. För närvarande består mediet av peptisk smälta av djurvävnad, laktos, dipotassiumvätefosfat, natriumsulfit, basisk fuchsin och agar.
A: Virgin Endo Agar B: Seeded Endo Agar, i mitten av agaren kan du märka den metalliska glansen från en E. coli-stam. Källa: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Den huvudsakliga användningen av mediet har kopplats till isolering och differentiering av Gram-negativa baciller som hör till familjen Enterobacteriaceae och till andra nära familjer.
Under en lång tid användes det för upptäckt av koliformer i vatten-, mejeri- och livsmedelsprover, men idag har användningen av detta medium förskjutits av andra med liknande funktioner. Vissa mikrobiologiska laboratorier använder emellertid denna agar för isolering av Enterobacteriaceae från prover av kliniskt ursprung.
Grund
Endo agar innehåller peptoner som fungerar som en källa till aminosyror, kväve, kol och energi, nödvändig för tillväxt av krävande mikroorganismer.
Å andra sidan tillhandahålls agarns något selektiva karaktär genom tillsats av natriumsulfit och basisk fuchsin; båda komponenterna hämmar delvis eller totalt tillväxten av de flesta Gram-positiva bakterier.
Skillnaden karaktär ges av närvaron av det jäsbara kolhydratet, som i detta fall är laktos och basisk fuchsin, som också fungerar som en pH-indikator.
Gramnegativa bakterier som växer på denna agar och som kan fermentera laktos kommer att bilda starka rosa kolonier; som är patognomonisk för Escherichia coli bildandet av mörkröda kolonier med en iriserande grönaktig metallisk glans. Detta beror på den höga produktionen av syror från kolhydratfermentering.
Det bör noteras att mediet runt kolonierna också får en stark rosa färg. Medan icke-laktosfermenterande Gram-negativa stavar bildar blekrosa kolonier som liknar medelstora eller färglösa.
Dipotassium vätefosfat balanserar pH i mediet och agar är den komponent som ger den fasta konsistensen.
Förberedelse
Endo agar
Väg ut 41,5 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i 1 liter destillerat vatten. Värm blandningen med ofta omrörning tills det är fullständig upplösning av mediet. Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C, vid 15 kg tryck, under 15 minuter.
När du tar bort från autoklaven, låt den svalna till en temperatur av cirka 45-50 ° C, skaka blandningen till homogenisering innan servering. Häll 20 ml i sterila petriskålar.
Låt plattorna stelna, invertera och förvara i en plaquero eller linda med mörkt papper innan de förvaras i kylen. Det är mycket viktigt att skydda det beredda mediet från direkt ljus. En bästa praxis är att förbereda det exakta beloppet du behöver.
Om de förvaras i kylskåp ska plattorna tillåtas värmas upp före användning.
PH för mediet bör vara mellan 7,2 och 7,6 och färgen på det beredda mediet är blekrosa.
M-Endo agarvariant
Det finns en annan version av Endo agar (m-Endo) som följer formeln för McCarthy, Delaney och Grasso, som innehåller fler föreningar och varierar i beredningsform.
Denna variant innehåller: laktos, tryptos, enzymatisk smälta av kasein, enzymatisk smälta av djurvävnad, natriumklorid, dibasisk kaliumfosfat, natriumsulfit, jästextrakt, monobasisk kaliumfosfat, basisk fuchsin, natriumdeoxikolat, laurylsulfat natrium och agar.
I detta fall vägs 51 g av det dehydratiserade mediet och suspenderas i 1 liter destillerat vatten innehållande 20 ml etanol.
Värm något under omrörning tills mediet löses fullständigt. Det ska inte överhettas och bör inte autoklaveras. När blandningen är homogen, serveras i sterila petriskålar och låt stelna.
Använda sig av
I vissa länder används det fortfarande för att räkna totala och fekala koliformer i mat- och vattenprover, särskilt närvaron av Escherichia coli som den viktigaste indikatorn på fekal kontaminering.
M-Endo Agar rekommenderas av American Public Health Association (APHA) för övervakning och kontroll av desinfektions- och avloppsreningsprogram samt för utvärdering av dricksvattenens kvalitet.
Den mest använda metoden är membranfiltrering efter berikning av provet med Laurylsulfatbuljong i 2 till 4 timmar.
Det kan också användas som ett substitut för EMB-agar i den mikrobiologiska analysen av mat och vatten med den mest troliga taltekniken (MPN), specifikt i den fullständiga bekräftelsefasen för att bekräfta närvaron av E. coli från molniga EC-buljonger.
QA
Kända eller certifierade kontrollstammar sås för att bedöma kvaliteten på den beredda Endo-agar-satsen.
Bland de stammar som kan användas för detta ändamål är: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteo mirC1500003 .
Stammarna ympas genom utmattning och inkuberas vid 37 ° C under 24 timmar i aerobios.
De förväntade resultaten är:
- För Escherichia coli: starka röda kolonier, med metalliskt glans.
- För E. cloacae och K. pneumoniae bör kolonierna vara rosa mucoid.
- När det gäller S. typhimurium, S. flexneri och P. mirabilis är kolonierna vanligtvis ljusrosa eller färglösa.
- Slutligen förväntas E. faecalis delvis hämmas, därför måste tillväxten vara dålig med mycket små, starka rosa kolonier.
begränsningar
-Endo medium har låg selektiv effekt, därför är det möjligt att vissa Gram-positiva mikroorganismer som Staphylococcus, Enterococcus och till och med jäst kan växa.
-Andra baciller som inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen kan utvecklas i detta medium, såsom Pseudomonas sp och Aeromonas sp. Egenskaperna hos dessa stammar är färglösa oregelbundna kolonier.
-Detta beredda medium är mycket känsligt för ljus, därför förlänger långvarig exponering för det indikatorsystemet och skadar mediet irreversibelt.
-Komponenten i mediet anses vara cancerframkallande, därför bör direkt kontakt undvikas.
-Dehydratiserade mediet är mycket hygroskopiskt och måste förvaras i sin ursprungliga behållare vid rumstemperatur, tätt stängd och i torr miljö.
referenser
- BD-laboratorier. Endo Agar. 2013. Finns på: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Finns på: foodafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 7 september 2017, 08:27 UTC. 28 februari 2019, 22:55. Finns på: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Endo agar. 2019. Finns på: merckmillipore.com
- Tekniska arklaboratorier. M –Endo Agar LES. 2015. Finns på: liofilchem.net