MAJSAGAR: BAKGRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den majsmjölagar är ett fast odlingsmedium, lågt näringsvärde effekt, användbar för subkultivering av vissa svampar och för att demonstrera de chlamydosporer i stammar av Candida albicans komplex. På engelska kallas det Corn Meal Agar.

Det konventionella majsmjölmediet har en mycket enkel komposition, det innehåller majsmjöl, agar-agar och vatten. På grund av dess låga näringsnivå är den idealisk för användning vid underhåll av svampstammar under måttliga perioder, särskilt svarta svampar.

A. Grafisk framställning av Candida albicans Complex på majsagar. B. Klamydosporer från Candida albicans-komplexet sett under mikroskopet, bildat på majsmjölagar. Källa: A. GrahamColm / B. Av: CDC / Dr. William Kaplan, med tillstånd: Public Health Image Library.

Sporulering av Candida albicans-komplexet föredras i detta medium om 1% av Tween 80 tillsätts under beredningen av agaren. Bildningen av klamydosporer är karakteristisk för denna art och praktiskt taget den enda som drabbar människor.

Det finns andra arter som bildar klamydosporer, men det är troligt att de inte påverkar människor, till exempel Candida australis, som finns i pingvinavsugning eller C. clausenii, som är en saprofyt som sällan stöter på. Likaså kan exceptionellt arterna C. stellatoidea och C. tropicalis bilda dem.

Å andra sidan gynnar tillsatsen av glukos till majsmjölmediet bildningen av pigment i Trichophytom rubrum-stammar.

Det är viktigt att lyfta fram att det finns svampar som inte bildar hyfer eller pseudohyphae i majsmjölagar, till exempel Cryptococcus neoformans, som skiljer sig från andra släkter.

Cornmeal agar kan tillverkas hemma i laboratoriet eller kommersiella medier kan också användas.

Grund

Cornmeal är substratet, agar är stelningsmedlet och vatten är lösningsmedlet.

Cornmeal agar kan kompletteras med tween 80 (sorbitan monooleat eller polysorbate polyester 80). Denna förening minskar mediets ytspänning på grund av dess emulgerande kraft.

Det skapar också en fientlig miljö som hämmar överdriven cellförökning och stimulerar tillväxten av hyfer, vilket också gynnar produktionen av klamydosporer; den senare betraktade strukturer av motstånd. Denna struktur hjälper till att identifiera Candida albicans-arter.

För sin del ökar glukos i detta medium pigmentbildande kapacitet hos vissa svampar.

Det bör noteras att majsmjölmediet med glukos inte är användbart för demonstration av klamydosporer i Candida albicans-komplexet.

Förberedelse

Hemlagad Cornmeal Agar Preparation

Väg ut 47 g gult majsmjöl och löst i 500 ml destillerat vatten. Värm upp till 60 ° C under omrörning av beredningen under en period av cirka 1 timme. Filtrera sedan genom en bit gasväv och bomull, eventuellt kan den filtreras igen genom att förbereda preparatet genom ett Whatman No. 2-filterpapper.

Fyll på volymen till 1000 ml med destillerat vatten. Tillsätt 17 g agar-agar, värm tills den är löst. Autoklav i 15 minuter vid 121 ºC.

Servera i sterila petriskålar. Förvara i kylskåp.

Färgen på det beredda mediet är vitaktig med ett klumpigt utseende.

Om du vill förbereda majsmjöl med glukos till det preparat som beskrivs ovan, tillsätt 10 g glukos.

Kommersiell majsagar

Väg 17 g av det dehydratiserade mediet och upplös i 1 liter destillerat vatten. Blandningen kan värmas upp, skakas försiktigt för att upplösas fullständigt. Sterilisera i en autoklav vid 121 ºC, vid 15 pund, i 15 minuter.

Häll i sterila petriskålar. Låt stelna. Vänd in och förvara i kylen tills den används. Temperatur före användning.

PH bör vara 6,0 ± 0,2 vid 25 ºC.

Majsmjölagar med Tween 80

För att uppfylla ISO 18416 måste majsmjölagar framställas enligt följande:

Väg 65 gram per liter och tillsätt 10 ml Tween 80. Värm och kok upp i några minuter tills det är löst, och se till att inte överhettas för mycket. Sterilisera vid 121 ºC i 15 minuter.

Majsagar med glukos

För att förbättra den kromogena kraften hos Trichophyton rubrum-kolonier och skilja dem från T. mentagrophytes, kan 0,2% glukos läggas till den ursprungliga formeln. Du behöver inte ha Tween 80, eftersom glukos hämmar bildningen av klamydosporer.

Använda sig av

Huvudsakligen är användningen av majsmjölagar avsedd för studier av Candida-stammar, vilket hjälper till att identifiera dem genom den karakteristiska observationen av klamydosporer i albikanerna. Det vill säga användningen av denna agar fungerar som ett hjälpmetod för identifiering av dessa jästar.

Både saprofytiska och patogena arter kan utvecklas på denna agar, men var och en bildar karakteristiska mycelstrukturer. Till exempel producerar arter av släktet Torulopsis inte mycelium och reproduceras endast med blastoconidia.

På samma sätt producerar Trichosporon- och Geotrichum-artrokonidier på majsmjölagar och det är ibland svårt att skilja mellan det ena och det andra.

Arthroconidia i släktet Geotrichum producerar en förlängning av hyferna som liknar en hockeypinne.

Produktionen av pigment med användning av majsmjölagar kompletterad med glukos är användbar vid identifiering av Trichophytom rubrum.

sås

Misstänkta Candida-kolonier erhållna i det primära odlingsmediet - Sabouraud-agar - från kliniska prover, kosmetika, jordar, bland annat, odlas på majsmjölagar. Mediet ympas och inkuberas vid 22 ° C under 24 till 48 timmar. Inkubationstiden kan förlängas vid behov.

Chlamydospore demonstration

För detta ändamål måste majsmjölagaren med Tween 80 ympas med hjälp av Dalmau-tekniken. Denna metod består av att ta en del av den misstänkta kolonin med platinahandtaget och göra tre parallella skär i mitten, och hålla handtaget vid 45º. Snitten ska separeras med ett avstånd på 1 cm från varandra.

Därefter placeras ett tidigare flammat täckföremål på de sådd sträckorna, på ett sådant sätt att hälften täcks och den andra avtäckes.

Inkubera de ympade plattorna vid 30 ° C i 48-72 timmar och undersök sedan under mikroskopet genom täckglaset.

Underhåll av svampstammar

För underhåll av stammar förvaras de utsäde och odlade plattorna i kylskåp (4 till 8 ºC). På detta sätt kan de pågå i flera veckor och användas för undervisnings- eller forskningsändamål.

QA

För sterilitetskontrollen inkuberas en platta utan ympning vid rumstemperatur, det förväntas att ingen tillväxt eller färgförändring kommer att ske.

För kvalitetskontroll kan kända stammar sås såsom: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De förväntade resultaten är partiell hämning för S. aureus och E. coli. Medan en tillfredsställande tillväxt förväntas i resten av stammarna.

Aspergillus niger växer med svarta och sporulerade kolonier under ungefär 5 dagar inkubation.

Candida albicans jästkolonier med produktion av klamydospor.

Saccharomyces cerevisiae producerar stora jästceller.

begränsningar

En gul fällning bildas i botten av plattan som inte bör förväxlas med kolonier.

referenser

1. Neogen Laboratories. Corn Meal Agar. Finns på: foodafety.neogen.com.
2. Culture Media Microkit. Corn Meal Agar. Finns på: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Yeast Identification Guide. Finns på: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Folkhälsa, 2002; 19 (4): 206-208. Finns på: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Allmän mykologi. 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Jämförande studie av vissa makro- och mikroskopiska metoder för isolering och igenkänning av släktet Candida. Colombiansk Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Finns på: Ciencias.unal.edu.co