Den agar Hektoen eller Hektoen enterisk agar fast medium är en selektiv och differentierad kultur. Det skapades på Hektoen Institute av King och Metzger för isolering av enteropatogena bakterier från Shigella- och Salmonella-släkten.
Mediet består av proteospepton, jästextrakt, gallsalter, laktos, sackaros, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, järncitrat, ammoniumcitrat, bromotymolblått, syrafuchsin och agar. Denna formulering gör det möjligt att differentiera släkten Shigella och Salmonella från resten av bakterierna som kan växa i detta medium.
A. Virgin Hektoen agar B. Seeded Hektoen agar. Källa: Flickr.com/Den ursprungliga uppladdaren var Philippinjl på franska Wikipedia.
Även om det finns andra media med samma funktion som Hektoen agar, har det en större fördel jämfört med andra media, särskilt när du vill återfå Shigella-arter.
Arten av båda könen orsakar allvarliga gastrointestinala problem hos människor på grund av konsumtion av förorenad mat; därför överföring är fecal - oral. Det är därför användningen av Hektoen agar främst indikeras i den mikrobiologiska analysen av avföring och livsmedelsprover.
Grund
Hektoen Agar innehåller peptoner och jästextrakt som källa till näringsämnen, vilket ger de väsentliga elementen för mikrobiell utveckling.
Men det har också gallgaller som verkar genom att hämma tillväxten av vissa bakterier, särskilt Gram-positiva och vissa Gram-negativa. Det är av detta skäl som det betraktas som ett selektivt medium.
Å andra sidan är Hektoen agar ett differentiellt medium. Denna egenskap tillförs genom närvaron av jäsbara kolhydrater såsom laktos, sackaros och salicin, tillsammans med pH-indikatorsystemet, representerade av bromotymolblått och surt fuchsin.
Alla bakterier som kan växa på detta medium som inte tillhör släktet Salmonella och Shigella kommer att utveckla lax- eller apelsinkolonier med undantag för släktet Proteus. Detta beror på jäsningen av en eller flera närvarande kolhydrater, vilket surgör mediet, vilket får pH-indikatorn att svänga.
Släktet Shigella och Salmonella kan för sin del inte fermentera något av de närvarande kolhydraterna och använder endast peptoner som energikälla, vilket alkaliserar mediet och därför är deras kolonier blågröna.
Bakterier som kan bilda vätesulfid (färglös gas) kan också särskiljas i detta medium. Natriumtiosulfat fungerar som svavelkällan medan järncitrat är utvecklaren. Båda föreningarna möjliggör bildandet av en svart fällning av järnsulfid som visar reaktionen.
Den svarta fällningen i mitten av kolonin med en transparent gloria runt den ger ett ögonfisk. Denna egenskap antyder förekomsten av släktet Salmonella.
Slutligen bibehåller natriumkloriden den osmotiska balansen och agaren ger mediet den fasta konsistensen.
Förberedelse
Väg 76 g av det dehydratiserade mediet och löst i en liter destillerat vatten. Skaka blandningen kraftigt och låt den sedan vila i 10 till 15 minuter. Det kan värmas upp och kokas, vilket ger roterande rörelser tills dess totala upplösning. Detta medium är inte autoklaverat.
När mediet når en temperatur av ungefär 45 ° C hälls en volym av 20 ml direkt i sterila petriskålar.
Agaren får stelna. Vid den tiden är de redo att användas. Det rekommenderas att använda dem omedelbart. Om detta inte är möjligt förvaras de i kylen tills de används.
Plattor bör tas bort från kylskåpet i förväg innan sådd för att sätta dem till rumstemperatur.
PH för mediet bör vara 7,5 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är lila och det beredda mediet är brungrönt.
Använda sig av
Användning av Hektoen-agar rekommenderas för att leta efter bakterier av släktet Shigella och Salmonella i avföring och matprover.
Möjligheten att isolera dessa bakterier ökar avsevärt om provet tidigare har anrikats i speciella buljonger, såsom selenbuljong, cystin selenitbuljong, tetrathionatbuljong etc.
Inokulumet måste vara starkt och såddningen sker genom strimling. Plattorna inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i aerobios.
Inkubation i 48 timmar rekommenderas eftersom koloniernas egenskaper är tydligare för deras tolkning och differentiering vid denna tidpunkt.
QA
För att utföra kvalitetskontroll på detta medium används certifierade bakteriestammar, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 och Shigella sonnei ATCC 25931.
De förväntade resultaten är följande: Salmonella typhimurium och Salmonella enteritidis bör utveckla blågröna kolonier med eller utan svart centrum. Medan Shigella-arterna kommer att växa som blågröna kolonier.
Stammar från Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 och Staphylococcus aureus ATCC 25923 kan också inkluderas.
I dessa fall är de observerade egenskaperna följande: E. coli och K. pneumoniae kommer att utveckla lax-orange orange kolonier i detta medium med en fällning med samma färg runt dem. Proteus kommer att utveckla blågröna kolonier med eller utan svart centrum.
Medan S. aureus och E. faecalis måste hämmas, lyckas E. faecalis ibland växa som mycket små gula kolonier.
Å andra sidan, eftersom detta medium inte autoklaveras, är det viktigt att utvärdera mediets sterilitet. Därför bör en till två oinokulerade plattor inkuberas från 37 ° C under 24 timmar i aerobios, från varje framställd sats.
Uppenbarligen väntas ingen tillväxt av något slag på plattan.
begränsningar
-Proteus-arten kan utvecklas i detta medium och egenskaperna hos deras kolonier kan förväxlas med Salmonella- eller Shigella-arter. Av denna anledning måste varje misstänkt koloni bekräftas med biokemiska tester.
-Det är nödvändigt att följa användningen av detta medium med andra mindre selektiva agarer, för om den sökta mikroorganismen finns i låga koncentrationer kanske den inte utvecklas i detta medium.
-Vär inte överhettas under beredningen, eftersom överdriven värme ändrar mediets sammansättning.
-Ovanligt kan det förekomma kolonier av laktosjäsande Salmonella som kan bli obemärkt.
referenser
- Wikipedia-bidragsgivare. Hektoen enteric agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 13 mars 2019, 23:38 UTC. Finns på: .wikipedia.org / Åtkomst till 16 mars 2019.
- BD-laboratorier. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Finns på: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Finns på: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2: a upplagan. Finns i: bd.com/europe