AGAR FRU: STIFTELSE, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar MRS är ett selektivt fast medium kultur som användes för isolering och räkning av mjölksyrabakterier, i synnerhet av släktet Lactobacillus. Denna agar skapades 1960 av Man, Rogosa och Sharpe, med samma namn, men på grund av dess komplexitet används ofta förkortningen MRS.

Det består av proteospepton, köttekstrakt, jästekstrakt, glukos, sorbitanmonoleat, dipotassiumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat och agar.

Man Rogosa och Sharpe Agar (MRS) utsäde med Lactobacillus sp. Källa: Foto donerat för denna artikel av författarna: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under utredningen med titeln: Utvärdering av mjölksyrabakterier och Bifidobacteria med probiotisk potential i bröstmjölk och barnpallar .

Denna komposition möjliggör korrekt utveckling av mjölksyrabakterier från kliniska prover, såsom avföring, vaginal urladdning, orala prover och bröstmjölk, såväl som mejeri- och köttmat.

Det används inte rutinmässigt i kliniska laboratorier, eftersom mjölksyrabakterier sällan är involverade i sjukdomsprocesser. Men inom området för mikrobiologi av mat är användningen av MRS-agar oftare.

Å andra sidan används detta medium av vissa forskningscentra vars mål är studien av mjölksyrabakterier.

Grund

Man, Rogosa och Sharpe agar har en ganska komplex sammansättning. Genom att bryta ned funktionen för var och en av dess komponenter kan dess grund förklaras.

Proteospepton, köttekstrakt, jästextrakt och glukos är näringsämnen som ger källan till kol, kväve, vitaminer och mineraler som är nödvändiga för bakterietillväxt. Vidare är glukos den universella energikällan som används i de flesta kulturmedier.

Å andra sidan, för att gynna tillväxten av mjölksyrabakterier, är närvaron av kofaktorer (katjoner) nödvändiga i metabolismen av Lactobacillus och relaterade bakterier nödvändig; Dessa föreningar är natrium-, magnesium- och mangansalterna.

På samma sätt är sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en viktig källa till fettsyror eftersom de absorberas som näringsämnen.

Dessutom verkar sorbitanmonoleat och ammoniumcitrat genom att hämma utvecklingen av den åtföljande floraen, särskilt gramnegativa bakterier, vilket ger den agarens selektiva karaktär.

Slutligen är agar-agaren den som ger mediet den fasta konsistensen.

Det finns andra varianter av Man Rogosa Sharpe agar; en av dem kompletteras med cystein (MRSc), mycket användbar för isolering av bifidobakterier, bland andra mikroorganismer. Å andra sidan finns MRS-mediet kompletterat med neomycin, paromomycin, nalidixinsyra och litiumklorid, speciellt för selektiv räkning av bifidobakterier i mejeriprodukter.

Förberedelse

Väg ut 68,25 gram av det uttorkade mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter. För att lösa upp helt, vänd dig till en värmekälla, skaka ofta och koka i 1 till 2 minuter. Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Låt stå i några minuter när du lämnar autoklaven och fördela medan den fortfarande är varm i sterila petriskålar.

Låt stelna och invertera plattorna, beställ i tallrikar och kyl i kylskåp tills användning. Låt plattorna värmas till rumstemperatur före användning.

PH för mediet bör vara 6,4 ± 0,2. Vissa kommersiella hus rekommenderar pH mellan 5,5 och 5,9.

Det dehydratiserade mediet är beigefärgat och framställt är mörkt bärnsten.

Både det dehydratiserade mediet och de beredda plattorna bör förvaras vid 2-8 ° C.

tillämpningar

MRS agarplattor kan ytsädes (utmattning eller Drigalski-spatel). Det kan också sås med djup. Plattor bör inkuberas vid 37 ° C i microaerophilicity (4% O ₂ och 5-10% CO ₂ ) för 24 till 72 timmar.

Såningsmetoden väljs enligt det syfte som eftersträvas (isolering eller räkning).

Egenskaper hos kolonierna

De presumtiva kolonierna av Lactobacillus växer vitaktiga färger och har ett mucoid eller krämigt utseende på denna agar. De måste därefter identifieras.

Isolering av mjölksyrabakterier

För detta används ympning. Proverna som sås kräver en tidigare procedur.

För bröstmjölkprover rekommenderas att centrifugera 1 ml av provet vid 14 000 rpm i 10 minuter för att avlägsna fettlagret. 900 pl kastas och i de återstående 100 pl slängs sedimentet och hälls på ytan av MRS-agaren. Det ska sedan fördelas jämnt med en Drigalski-spatel.

När det gäller avföringsprov vägs ett (1) gram avföring och homogeniseras i 9 ml 0,1% sterilt peptonvatten, motsvarande en 1/10 utspädning. Sedan görs serieutspädningar tills en slutlig utspädning av ^{10-4 erhålls} .

Slutligen, 100 ul av 10 ^-2 , 10 ^-3 och 10 ^-4 utspädningar tas och varje utspädning ympas på MRS-agar, fördela jämnt med en Drigalski spatel.

Melkesyrabakterier räknas

I detta fall sker såddet på djupet.

För bröstmjölkprover tas 1 ml och placeras i ett sterilt koniskt plaströr. MRS-agar tillsätts vid en ungefärlig temperatur av 40 ° C till en slutlig volym av 25 ml, vilket ger en homogen blandning. Därefter hälls den i sterila petriskålar på ett enhetligt sätt och får stå tills polymerisation.

För avföringsprover görs utspädningar, såsom tidigare beskrivits. Ta 1 ml av varje utspädning och placera den i sterila koniska plaströr. Smält MRS-agar tillsätts till en volym av 25 ml.

Blandningen av varje utspädning hälls jämnt i sterila petriskålar. Slutligen får den vila tills polymerisation.

Kolonin räknar med Man Rogosa och Sharpe (MRS) agar. Källa: Foto donerat för denna artikel. Författare: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under forskningen med titeln: Utvärdering av mjölksyrabakterier och Bifidobacteria med probiotisk potential i bröstmjölk och spädbarnsfeces.

Forskningsnivå

Studien av mjölksyrabakterier ökar varje dag; Forskare försöker särskilt lära sig om nya stammar och deras potential som startfärjor för standardisering vid tillverkning av mejeriprodukter, bland annat.

I detta avseende har Alvarado et al. (2007) använde MRS-agar för att genomföra en studie där de isolerade, identifierade och karakteriserade mjölksyrabakterier närvarande i en hantverkare Andean rökt Venezuelansk ost.

I osten fann de närvaron av bakterier från Lactococcus- och Lactobacillus-släkten och drog slutsatsen att blandningarna av isolerade stammar är lämpliga som startstammar vid tillverkning av ostar från pastöriserad mjölk.

Å andra sidan Sánchez et al. (2017) använde MRS-agar för att undersöka förekomsten av mjölksyrabakterier i matsmältningskanalen hos smågrisar, för att använda dem som naturliga probiotika som ökar produktiviteten hos friska smågrisar.

Med detta medium lyckades de isolera fyra arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae och Pediococcus pentosaceus.

Likaså Báez et al. (2019) använde MRS-agar för att utvärdera mjölksyrabakterier (LAB) och bifidobakterier med probiotisk potential i bröstmjölk och avföring till spädbarn.

De lyckades isolera 11 BAL och 3 Bifidobacteria sp i bröstmjölk och 8 BAL och 2 Bifidobacteria sp. i avföring. Alla uppfyllde vissa parametrar som bevisar dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Författarna drog slutsatsen att både bröstmjölk och avföring från enbart ammande spädbarn fungerar som naturliga källor till probiotiska bakterier.

QA

För att utvärdera kvaliteten på MRS-agar kontrollerar du stammar som:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichus coli.

De förväntade resultaten är tillfredsställande tillväxt för de första 6 bakterierna, medan E. coli och Bacillus cereus måste hämmas fullständigt.

referenser

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolering, identifiering och karaktärisering av mjölksyrabakterier av en venezuelansk rökt andisk artisanost. Dess användning som en startkultur. Ligt. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Finns på: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering av mjölksyrabakterier från matsmältningskanalen hos smågris. Rev. investiga. veterinär. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Finns på: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Utvärdering av mjölksyrabakterier och Bifidobacteria med probiotisk potential i bröstmjölk och avföring av spädbarn i Acevedo kommun, Miranda 2017. Grundutbildning för att kvalificera sig till kandidatexamen i bioanalys. University of Carabobo, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. MRS agar. 2015. Finns på: britanialab.com
5. Wikipedia-bidragsgivare. MRS agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 10 januari 2018, 19:44 UTC. Tillgängligt på: wikipedia.org Åtkomst till 17 februari 2019.
6. Roy D. Media för isolering och uppräkning av bifidobakterier i mejeriprodukter. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.