MACCONKEY AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den MacConkey agar är ett fast medium som tillåter den exklusiva isolering av gramnegativa bakterier. Av detta skäl är det ett selektivt medium och gör det också möjligt att skilja mellan laktosfermentering och icke-jäsande baciller, vilket gör det till ett differentiellt medium. Det är ett av de mest använda kulturmedierna i ett mikrobiologilaboratorium.

Detta medium används främst för isolering av Gram-negativa baciller som tillhör familjen Enterobacteriaceae, inklusive opportunistiska och enteropatogena arter.

MacConkey agar fröat med två typer av bakterier. Laktosjäsande kolonier på vänster sida, icke-laktosfermenteringskolonier på höger sida.

Det kan också användas för att isolera andra enteriska baciller som lever i mag-tarmkanalen, men tillhör inte Enterobacteriaceae, såsom Aeromonas sp, Plesiomonas sp, bland andra.

Slutligen kan den isolera andra icke-glukosfermenterande gramnegativa baciller som finns i miljön, vatten eller jord, men som ibland kan vara opportunistiska patogener som Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, bland andra.

Grund

MacConkey agar

Grunden för detta medium kan förklaras genom beskrivningen av dess komponenter, eftersom var och en har ett syfte som bestämmer en egenskap hos det.

Galltsalter och kristallfiolett

I detta avseende har MacConkey agar en komplex sammansättning. Först och främst innehåller den gallsalter och kristallviolett.

Dessa element är ansvariga för att hämma tillväxten av Gram-positiva bakterier och några snåla Gram-negativa baciller. I sin tur gynnar det utvecklingen av Gram-negativa baciller som inte påverkas av dessa ämnen. Därför är det ett selektivt medium.

Det sägs vara något selektivt jämfört med andra media som också hämmar tillväxten av Gram-positiva bakterier och även de flesta Gram-negativa bakterier.

Peptoner, polypektoner och laktos

Den innehåller ämnen som ger de nödvändiga näringsämnena till de mikroorganismer som utvecklas i denna miljö, såsom peptoner, polypektoner och laktos.

Laktos är nyckelpunkten för att mediet ska vara ett differentiellt medium, eftersom mikroorganismer som har förmågan att jäsa laktos kommer att utveckla starka rosa kolonier.

Vissa bakterier kan fermentera laktos långsamt eller svagt, utveckla ljusrosa kolonier och förblir laktospositiva.

De som inte fermenterar laktos använder peptoner som energikälla, som producerar ammoniak och alkaliserar mediet. Av denna anledning är kolonierna som har sitt ursprung färglösa eller transparenta.

PH-indikator

Färgförändringen uppnås genom en annan väsentlig förening som MacConkey agar har. Denna förening är pH-indikatorn, som i detta fall är neutral röd.

Jäsningen av laktos genererar produktion av blandade syror. De surgör mediet till ett pH under 6,8.

Detta gör att pH-indikatorn vänder mot en djup rosa nyans. Färgens intensitet kan variera beroende på det slutliga pH-värdet.

Destillerat vatten, natriumklorid och agar

Å andra sidan innehåller det destillerat vatten och natriumklorid som ger medium hydrering och osmotisk balans. Slutligen innehåller mediet agar, vilket är basen som ger konsistensen av fast medium.

Det beredda MacConkey-agarmediet bör ha ett slutligt pH justerat till 7,1 ± 0,2.

Förberedelse

För en liter MacConkey-agar måste 50 g av det dehydratiserade mediet vägas, sedan placeras i en kolv och upplöses i en liter destillerat vatten. Efter 10 minuters uppvärmning upphettas den, blandas konstant tills den kokar i 1 minut.

Kolven placeras sedan i autoklaven och steriliseras vid 121 ° C under 20 minuter. I slutet av tiden avlägsnas den från autoklaven och får svalna tills den når en temperatur på 45 ° C, för att senare serveras i sterila petriskålar i en laminär flödeshuva eller framför Bunsen-brännaren.

Låt stelna och förvara i en omvänd plattahållare och kyl i kylskåp vid 2-8 ° C tills användning.

För att få en MacConkey-agar som hämmar den svärande effekten som produceras av släktet Proteus, används en låg-salt MacConkey-agar.

Användning av konventionell MacConkey-agar

MacConkey Agar ingår i alla kulturmediauppsättningar arrangerade för sådd av kliniska prover som tagits emot i laboratoriet. Det är också användbart inom matmikrobiologi och miljömikrobiologi.

Olika Gram-negativa stavar som växer i detta medium uttrycker fenotypiska egenskaper som hjälper till att göra en presumtiv diagnos av arten i fråga. Till exempel är koloniernas storlek, färg, konsistens och lukt några av de egenskaper som kan vägleda.

I detta medium producerar Escherichia coli, Klebsiella sp och Enterobacter sp arter starka rosa kolonier, omgiven av en zon med utfälld gall.

Medan bakterier som Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp och Hafnia sp kan verka färglösa efter 24 timmar eller blekrosa på 24-48 timmar.

På samma sätt producerar släkten Proteus, Edwadsiella, Salmonella och Shigella färglösa eller transparenta kolonier.

Andra varianter av MacConkey agar

Det finns andra varianter av MacConkey Agar som har specifika syften. De nämns nedan:

MacConkey agar med sorbitol

Detta medium utformades för att skilja den enteropatogena stammen (enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7) från resten av stammarna Escherichia coli.

Detta medium byter kolhydratlaktos mot sorbitol. De enterohemorrhagiska E. coli-stammarna O157: H7 skiljer sig från resten eftersom de inte jäsar sorbitol och därför erhålls transparenta kolonier, medan resten av E. coli-stammarna fermenterar sorbitol och kolonierna är starka rosa.

MacConkey agar utan kristallviolett eller salt

Denna agar skiljer sig mycket från den klassiska MacConkey-agaren, eftersom den inte har en violett kristall och Gram-positiva bakterier kan växa.

Å andra sidan hindrar frånvaron av salt uppkomsten av att svärma på agaren som produceras av vissa enteriska baciller, såsom de från Proteus-släktet, och underlättar därmed isoleringen av alla närvarande bakterier, inklusive Gram-positiva bakterier.

MacConkey agar med cefoperazon

Denna variant av MacConkey-agar designades för att initialt isolera Laribacter hongkongensis och visade sig senare vara användbar för isolering av Arcobacter butzleri. Båda är lätt böjda Gram-negativa stavar resistenta mot cefoperazon.

Dessa bakterier har nyligen kopplats till orsaka gastroenterit och förvärvad diarré hos asiatiska och europeiska individer, och framstår som två kraftfulla nya patogener.

Antibiotikum gör det möjligt att hämma den medföljande floran i mag-tarmkanalen, vilket gynnar utvecklingen av dessa bakterier, vilket förhindrar dem från att gå obemärkt, eftersom de kräver 72 timmar att växa.

MacConkey agar framställd med havsvatten vid 10% v / v

Denna variant är användbar för utvärdering av bakteriella sanitetsindikatorer för fekal kontaminering, inklusive totala coliforms och fecal coliforms i fritids saltvatten (stränder och vikar).

Cortez et al 2013 visade att mediet som framställts på detta sätt avsevärt ökar utvinningen av dessa mikroorganismer i saltvattenmiljön, jämfört med användningen av MacConkey agar framställd med destillerat vatten.

Detta beror på det faktum att det modifierade mediet stimulerar tillväxten av bakterier som är fysiologiskt i ett latent tillstånd "livskraftigt men icke-odlingsbart", därför kan de inte återvinnas i konventionella media.

referenser

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Användning av cefoperazon MacConkey agar för selektiv isolering av Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 4 april 2018, 18:16 UTC. 29 dec 2018, 15:22 sv.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt av kulturmedier beredd med havsvatten på hälsoindikatorer i marina vatten i spa i Chichiriviche, delstaten Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.