POTATIS DEXTROSAGAR: SKÄL, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den potatisdextrosagar är ett medium, fast icke - selektiva odlingsnärings. Bakterie- och svamparter kan växa i den, men dess användning är särskilt indikerad för isolering av filamentösa svampar och jästar. Det är också känt som PDA-medium för det engelska uttrycket Potato Dextrose Agar.

Det är särskilt användbart för isolering av fytopatogena svampar, det vill säga de som påverkar växter. För att såga proverna från infekterade grönsaker kan andra medel såsom Sabouraud-agar eller malta-agar användas, men för rutinmässigt bruk föredrages potatisdextrosagar på grund av att man får större sporulering.

Aspergillus niger respektive Sinemas på potatis dextrosagar. Källa: Alextrevelian 006 på engelska Wikipedia / Joselrojas

Det används också för räkning av svampkolonier i prover av kosmetika, farmaceutiska produkter och vissa mejerimat. På samma sätt är det lämpligt att såga prover av hudskrotningar på jakt efter dermatofyter, som växer mycket bra i detta medium och utvecklar sina karakteristiska pigment.

Potatisdextrosmedium är ett mycket enkelt och enkelt medium att förbereda på laboratoriet. Den innehåller, som namnet antyder, infusion av potatis, dextros och agar-agar. Dessutom kan hämmande substanser tillsättas för att förhindra bakterietillväxt och öka selektiviteten för svamparter.

Grund

Potatis dextrosagar är ett odlingsmedium som tillhandahåller de näringsämnen som är nödvändiga för utveckling av filamentösa svampar och jäst.

Kombinationen av infusion av potatis med glukos ger den perfekta energikällan för en tillfredsställande tillväxt av svampar. Medan agaren är den som ger mediet konsistens.

Enbart mediet hämmar inte tillväxten av bakterier, därför är det ett icke-selektivt medium. För att göra det selektivt behöver det tillsättas hämmande ämnen som vinsyra eller antibiotika.

Förberedelse

-Hemmagjord (icke-kommersiell) beredning av potatisdextrosagar

Petriskålar

Det bereds på följande sätt:

För det första tvättas potatisen mycket bra och tar bort marken de besitter. De skärs i tunna skivor med allt och skal. 200 gram potatis vägs och kokas i en liter destillerat vatten i en halvtimme.

I slutet av tiden, filtrera eller sil hela preparatet genom en ostduk.

Den erhållna vätskan avslutas med destillerat vatten upp till en liter. Tillsätt 20 g agar-agar och 20 g dextros till infusionen, blanda väl och autoklav vid 121 ° C, vid 15 kilo tryck i 15 minuter.

Låt svalna till 50 ° C och servera i sterila petriskålar. De förberedda plattorna förvaras i kylskåp.

kilar

Potatis dextrosagarkilar kan också framställas.

I detta fall, innan sterilisering i autoklaven, placeras 12 till 15 ml av mediet i rör, senare autoklaveras de och när de lämnar de ligger på speciella stöd tills det stelnar. Förvara i kylskåp.

Mediet förblir vid ett pH av 5,6 ± 0,2, men vissa laboratorier tillsätter 10% vinsyra för att sänka pH till 3,1 ± 0,1 för att hämma bakterietillväxt.

I samma mening föredrar andra laboratorier att lägga till antibiotika för att göra det selektivt för odling av svamp och förhindra bakterietillväxt.

-Kommersiell beredning av potatis dextrosagar

Väg ut 39 g av det kommersiellt tillgängliga dehydratiserade mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Låt den vila i 5 minuter.

Blandningen upphettas med ofta omrörning tills den är helt upplöst. Därefter steriliseras den i en autoklav vid 121 ° C under 15 minuter.

Tallrikar eller kilar kan förberedas. Fortsätt enligt ovan.

PH förblir vid 5,6 ± 0,2. Om ett pH av 3,1 önskas bör 14 ml steril 20% vinsyra tillsättas innan servering till plattorna.

Det råa mediet är beige och det beredda mediet är ljus bärnsten med något grumligt eller opalescent utseende.

tillämpningar

Process för sådd av växtprover på potatis dextrosagar

-För färgade löv

Bladen skärs i bitar.

I ett 50 cm glas med 50% alkohol, placera bladen (färgade och friska bitar) för att desinficera ytan i 20 till 30 sekunder. Kasta bort alkoholen och tillsätt 20% natriumhypoklorit i 40 till 50 sekunder om de är tunna blad och öka tiden till 80 sekunder om det är bark och stockar.

Kassera natriumhypoklorit och ta de desinficerade bitarna med en steril pincett och placera dem på mediets yta (högst 10 stycken). Ställ in datumet och inkubera på 20-30 ° C.

-Frukter och knölar

Om frukten är köttig, öppna den frukt som drabbats av svampen och ta bitar med en steril skalpell från både de sjuka och friska delarna och placera dem på ytan av agaren.

Om frukten är citrus, som en citron eller en apelsin, måste den öppnas och frön sås.

När fruktens yta påverkas och sporer observeras är idealet att använda gittermetoden på plattan; Detta består av att röra sporerna med en steriliserad och kyld "L" -formad spatel, och sedan göra en sicksack sådd 2 till 3 gånger på agaren.

-För korn

De desinficeras som beskrivs i bladen och placeras senare på agaren.

-För grenar och stjälkar

Barken skrapas av och senare tas bitar av den friska och sjuka delen och sås direkt på agaren.

De ympade plattorna inkuberas aerobt vid 20-30 ° C under 72 timmar.

Process för sådd av hud-, hår- eller spikskalprover på potatisdextrosagar

Provtagningen bör göras med hjälp av ett skalpellblad nr 11, antingen för att klippa påverkat hår, hudvåg eller naglar på jakt efter dermatofyter. Innan provet tas ska området desinficeras med 70% alkohol.

-Skinprov

I skaliga skador ska skadorna kasseras, eftersom svampen är mer benägna att finnas där.

Vid exsudativa skador tas provet med en torr eller våt pinne. Såg omedelbart på potatis dextrosagar eller Sabouraud agar. Undvik transportmedel.

En annan metod för provtagning är genom Mariat och Adan Campos teknik för mattor. I detta fall gnuggas det drabbade området 5 gånger med en bit steril ull för efterföljande odling.

Provet kan placeras direkt i odlingsmediet.

-Hårprov

Beroende på patologin kan den drabbade delen avskuras eller utrotas. Placera provet i odlingsmediet.

-Nagelprov

En specifik del av den drabbade nageln kan skrapas eller skäras. Det beror på typen av skada.

Skär provet i bitar av 1 mm före sådd för att öka sannolikheten för att svampen kommer i kontakt med odlingsmediet.

Identifieringsförfarande

Kolonierna erhållna i plattan isoleras i rör innehållande potatisdextrosagar för att utföra den makroskopiska studien av kolonierna (utseende, färg, konsistens, utvecklingsgrad.

Den mikroskopiska studien (observation av strukturer och deras formationer) kan göras genom mikrokulturer eller direkt observation under mikroskopet mellan bild och bild.

Koloniträkning

Detta medium kan också användas för att bestämma svamp- och jästbelastningen i växt-, livsmedels-, kosmetik- eller läkemedelsprover. För detta ändamål används potatisdextrosagar kompletterad med antibiotika, såsom: (kloramfenikol, klorotetracyklin eller båda).

Häll 1 ml av provet - helst utspädd - i en steril och tom petriskål, smält sedan en dyna med potatisdextrosagar och låt svalna till 45 ° C. Häll på petriskålen och rotera tills den är homogeniserad. Låt den vila tills den stelnar.

Inkubera aerobt vid 20-25 ° C (formar) eller 30-32 ° C (jäst) i 5 till 7 dagar eller mer, beroende på typen av svamp som söks och typ av prov. Två plattor kan användas för att inkubera i båda temperaturintervallen.

Räkning av svampkolonier i ett livsmedelsprov. Potatis dextrosagar kompletterad med antibiotika. Källa: Pxhere.com foto / 777267

Underhåll av svampstammar

Potato Dextrose Agar kan användas för att upprätthålla livskraftiga svampstammar under flera år.

För detta odlas svampen på kilar av potatisdextrosagar och när svampen har vuxit täcks den med mineralolja. Oljan ska steriliseras i en autoklav i 45 minuter och ha en viskositet av cirka 300 till 330 Saybolt. Oljan ska ligga 1 till 2 cm över spetsens spets.

QA

Från varje beredd sats, ta 1 eller 2 plattor och inkubera dem vid 25 ° C i 48 timmar eller vid 20 ° C i 96 timmar. En bra sterilitetskontroll är en där koloninutvecklingen inte observeras.

Kända eller certifierade kontrollstammar kan också användas såsom:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. God tillväxt förväntas i alla fall.

referenser

1. Britannia Laboratories. Glukosagarpotatis. 2015. Finns på: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Potatis dextrosagar. Finns på: foodafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratory. Potatis dextrosagar. Finns på: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Allmän mykologi. 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Utvärdering av den mikrobiologiska kvaliteten i ögonskugga, kompakt pulver typ av ett nationellt produktionslaboratorium, enligt referensmetoden Pharmacopea Usp 2005. Examensarbete för att kvalificera sig för titeln Pharmaceutical Chemist. San Carlos universitet i Guatemala.
7. Cuétara M. Bearbetning av ytprover. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; pp. 1-12