SABOURAUD AGAR: GRUND, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den Sabouraudagar , även känd som Sabouraud dextros agar, är ett fast medium, särskilt anrikad för isolering och utvecklingen av svamp, såsom jäst, mögel och dermatofyter.

Därför kan detta medium inte saknas i ett mikrobiologiskt laboratorium för att undersöka förekomsten av patogena eller opportunistiska svampar, varken från kliniska eller icke-kliniska prover. På samma sätt är den också idealisk för tillväxt av filamentösa bakterier som Streptomyces och Nocardias. Dess användning är mycket bred, eftersom den kan användas inom mykologi hos människor, djur, växter och industrier.

A. Osärad Sabouraud-agar. B. Sabouraud agar frönad med en jäst. Källa: Foton tagna av författaren MSc. Marielsa gil

Detta medium skapades 1896 av den framstående hudläkaren Raimond Sabouraud, som blev en världsberömd specialist i hårbotten, främst orsakad av dermatofyter.

Skapandet var så viktigt att det har använts sedan dess och förblir idag, även om det med vissa ändringar.

Även om det är speciellt för svampar, kan bakterier växa i detta medium, därför för prov med blandad flora krävs införande av antibiotika i deras beredning för att hämma tillväxten av bakteriefloraen som kan finnas närvarande.

Valet av antibiotikum måste göras noggrant och med hänsyn till typen av svamp som ska återvinnas, eftersom vissa hämmas i närvaro av vissa ämnen.

Grund

Sabouraud dextrosagar är ett medium som i sin ursprungliga formulering är svagt selektivt på grund av dess sura pH på 5,6 ± 0,2, men bakterier kan fortfarande utvecklas, främst i långvariga inkubationer.

Mediet innehåller kaseinpepton och bukspottkörtelnsmältning av djurvävnad, som ger källan till kol och kväve för tillväxt av mikroorganismer.

Den innehåller också en hög koncentration av glukos, som fungerar som en energikälla och främjar tillväxten av svampar över bakterier. Allt detta blandat med agar-agar, en komponent som ger den rätt konsistens.

Å andra sidan kan Sabouraud dextrosagar vara selektiv om antibiotika tillsätts.

Med antibiotika är det särskilt användbart i sårprover, öppna magsår eller i ett prov där man misstänker stor bakteriekontaminering.

De vanligaste kombinationerna av Sabouraud dextrosagar med antibiotika

-Saburaud-agar med kloramfenikol: perfekt för utvinning av jästar och filamentösa svampar.

- Sabouraud-agar med gentamicin och kloramfenikol: nästan alla filamentösa svampar och jäst växer i detta medium, och det hämmar ett stort antal bakterier, inklusive Enterobacteriaceae, Pseudomonas och Staphylococcus.

- Sabouraud agar med cykloheximid: det är särskilt användbart för prover från huden eller andningsorganen, så länge misstanken är dimorf svamp.

Cykloheximid bör användas med försiktighet; Även om det används för att hämma tillväxten av icke-patogena svampar eller jästsvampar som kan vara närvarande som föroreningar i ett prov, hämmar det också tillväxten av vissa svampar såsom Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp och andra opportunistiska svampar.

- Sabouraud agar med kloramfenikol plus cykloheximid: den används främst för att isolera dermatofyter och dimorfiska svampar. Det har nackdelen att det hämmar vissa arter av opportunistiska svampar såsom Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes eller C. neoformans.

- Sabouraud agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G och cykloheximid: det är idealiskt för prover som är extremt förorenade med bakterier och saprofytiska svampar, men har nackdelen att det hämmar tillväxten av Actinomyces och Nocardias, utöver de ovan nämnda opportunistiska svamparna.

Förberedelse

Om du har ingredienserna separat kan de beredas på följande sätt:

Sabouraud dextrosagar

Att väga:

- 40 gr dextros

- 10 g pepton

- 15 g agar-agar

- Mät 1000 ml destillerat vatten

Alla ingredienser blandas, pH justeras till 5,6. Lösta ämnen upplöses genom kokning, 20 ml av mediet fördelas i rör om 25 x 150 mm, utan fälg och företrädesvis med en bomullsskydd.

Rör med bomullslock. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa gil

Andra rörstorlekar kan också användas beroende på tillgänglighet.

De autoklaveras under 10 minuter vid en tryckatmosfär (121 ° C). Autoklaveringstiden bör inte överskridas. När du lämnar autoklaven lutar rören med hjälp av ett stöd tills de stelnar i en flöjt näbb.

Ett annat sätt är att lösa upp ingredienserna genom att värma tills det kokar. Autoklavera i 10 minuter i samma injektionsflaska och fördela sedan 20 ml i petriskålar.

Om du har ett Sabouraud dextrosagarmedium som redan innehåller alla ingredienserna, fortsätt med att väga den mängd som det kommersiella företaget har angett för en liter vatten. Resten av stegen är desamma som beskrivits ovan.

Sabouraud dextrosagar (Emmons modifiering)

Att väga:

- 20 g dextros

- 10 g pepton

- 17 gram agar-agar

- Mät 1000 ml destillerat vatten

Alla ingredienser blandas, pH justeras till 6,9. Fortsätt på samma sätt som i föregående fall.

Det finns kommersiella hus som erbjuder mediet med alla ingredienser. I det här fallet, väg och förbered enligt beskrivningen på skäret.

Sabouraud dextrosagar (Emmons modifiering) med kloramfenikol

Kloramfenikol-lagerlösning

- Väg 500 mg kloramfenikolbas

- Mät 100 ml 95% etanol

- Blanda

Sabouraud dextrosagarmedium (Emmons) framställs som tidigare beskrivits och tillsätt 10 ml kloramfenikol-stamlösning för varje liter medium innan autoklavering.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar med Cycloheximide

Cycloheximide lagerlösning

- Väg 5 gram cykloheximid

- Mät 100 ml aceton

- Blanda

Sabouraud dextrosagarmedium (Emmons) framställs som redan beskrivits och tillsätt dessutom 10 ml cykloheximid-stamlösning för varje liter medium innan autoklavering.

Sabouraud dextrosagar (Emmons) med kloramfenikol och cykloheximid

Sabouraud dextrosagarmedium (Emmons) framställs som tidigare beskrivits och tillsätt dessutom för varje liter medium 10 ml kloramfenikol stamlösning och 10 ml cykloheximid stamlösning innan autoklavering.

Andra antibiotika som kan tillsättas

20 000 till 60 000 enheter penicillin per liter medium.

30 mg streptomycin per liter medium.

Båda måste införlivas efter att mediet har autoklaverats, lätt kylts (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter medium.

0,04 g gentamicin per liter medium.

Särskilda överväganden

För säkerhet är det att föredra att såga Sabouraud dextrosagar i kilformade rör (lutade i flöjt näbb) snarare än i Petriskålar, för att undvika spridning och inandning av sporerna.

Det är viktigt att Sabouraud-agarrör täcks med bomull och inte med ett skruvlock, eftersom det har visats att semi-anaeroba förhållanden hämmar sporbildning i vissa stammar, till exempel Coccidioides immitis. De flesta svampar är också aeroba.

Vid användning av skruvlock, stäng inte hermetiskt.

QA

Det beredda mediet måste genomgå kvalitetskontroll för att verifiera att det fungerar korrekt. För detta sås vissa kontrollstammar.

För Sabouraud dextrosagar med kloramfenikol kan ATCC-stammar av Candida albicans användas, som måste ha utmärkt tillväxt. En annan platta ympas med stammar från Escherichia coli, som måste hämmas fullständigt.

En okulerad platta inkuberas också i vilken inga mikroorganismer ska växa.

För Sabouraud dextrosagar med kloramfenikol och cykloheximid kan stammar av Trichophyton mentagrophytes användas och de bör utvecklas väl. En annan platta ympas med en stam av Aspergillus flavus, i vilken det måste vara liten eller ingen tillväxt. Dessutom inkuberas en oinokulerad platta för att demonstrera dess sterilitet.

För Sabouraud används dextrosagar med cykloheximid, stammar av Candida albicans, Trichophyton rubrum eller Microsporum canis, som måste visa god tillväxt.

På samma sätt inkluderas en stam av Aspergillus flavus som visar liten eller ingen tillväxt. Slutligen, inkubera en oinokulerad platta för att kontrollera steriliteten.

tillämpningar

Primär kultur

Klassisk Sabouraud dextrosagar innehåller 4 gram dextros och är utmärkt som ett primärt isoleringsmedium, eftersom det visar den karakteristiska morfologin för varje svamp.

Det är också utmärkt för att demonstrera pigmentproduktion. Men det är inte det bästa sättet att observera sporulation.

Det rekommenderas inte för odling av Blastomyces dermatitidis, vilket hämmas av den höga glukoskoncentrationen som finns.

Å andra sidan måste vissa överväganden för odling beaktas.

Vissa svampar växer bäst vid rumstemperatur, såsom mögel, andra växer framgångsrikt vid 37 ° C, som vissa jästar, och andra kan växa vid båda temperaturerna (dimorfa svampar).

Av detta skäl är det ibland nödvändigt att använda flera Sabouraud-agarplattor för samma prov, eftersom dubbla sådd ofta görs för att inkubera en platta vid rumstemperatur och en annan vid 37 ° C.

Till exempel sås Sporothrix schenckii i två plattor; en inkuberas vid rumstemperatur för att erhålla formfasen och den andra inkuberas vid 37 ° C för att erhålla jästfasen, men i den senare är det nödvändigt att tillsätta 5% blod till mediet.

I andra fall, såsom mycetomprov, ympas två Sabouraud-agarplattor, en med kloramfenikol och den andra med cykloheximid. Den första tillåter tillväxten av mykotom-orsakande ämnen av svampursprung (Eumycetom) och de andra orsakande medlen för mycetom av bakteriellt ursprung, såsom aktinomycetom.

sporulering

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar innehåller 2 gram dextros och används inte bara för isolering utan också för sporulering och konservering av svampar.

I detta medium kan stammar av Blastomyces dermatitidis utvinnas.

Bevarande

För att bevara svampkulturer kan de förvaras i kylskåp (2-8 ° C). Konserveringstiden kan variera mellan 2 till 8 veckor. Efter denna tid måste de underkultureras för att upprepa processen.

Vissa svampar håller sig bäst vid rumstemperatur, såsom Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum och Microsporum audounii.

Underhållet av stammen kan förlängas för att undvika pleomorfism om dextroset avlägsnas helt från agaren och om mängden agar i mediet reduceras för att undvika torrhet.

mikro

För identifiering av vissa filamentösa svampar är det nödvändigt att utföra mikrokulturer med Sabouraud-agar eller andra speciella medel för att observera strukturerna för sexuell och asexuell reproduktion.

I mänsklig mykologi

Det används främst för att diagnostisera svampsjukdomar, särskilt de som påverkar huden och dess infästningar (hår och naglar).

Proverna kan vara utsöndringar, utsöndringar, hud, hår, naglar, sputum, CSF eller urin. Vanligtvis isolerade patogener är dermatofyter, svampar som orsakar subkutana och systemiska mykoser.

Djurmykologi

Djur påverkas ofta av svampinfektioner, därför är Sabouraud agar lika användbar i djurmykologi som hos människor.

Exempelvis kan dermatofyter påverka djur. Så är fallet med Microsporum canis var distortum, som ofta infekterar hundar, katter, hästar, grisar och apor. Likaså infekterar Microsporum gips hundar, katter och boskap.

Fåglar som kycklingar, tuppar och kycklingar påverkas av Microsporum gallinae.

Andra svampar, såsom Zymonema farciminosum, är också orsaken till sjukdom hos djur, främst hos hästar, mödrar och åsnor, vilket ger betydande inflammation i lymfkärlen.

Sporothrix schenkii och Histoplasma capsulatum påverkar husdjur och människor.

Miljömykologi

Många patogena eller opportunistiska svampar kan koncentrera sig vid en given tidpunkt i en given miljö, speciellt i operationssalen och intensivvårdsenheter (ICUs) på kliniker och sjukhus. Därför är det nödvändigt att utföra en kontroll av dem.

Andra känsliga utrymmen är bibliotek och gamla byggnader, som kan påverkas av koncentrationen av miljösvampar.

I miljöstudier används Sabouraud dextrosagar för isolering av svampar.

Industriell mykologi

Sabouraud dextrosagar kan inte vara frånvarande för studier av kontaminerande svampar vid tillverkning av kosmetika, livsmedel, drycker, läder, textilier, bland andra.

Växtmykologi

Växter lider också av sjukdomar orsakade av svampar, som påverkar olika delar av växten, som till och med kan avsluta skörden, vilket orsakar stora förluster i jordbruket.

referenser

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiologisk diagnos av mykoser och svampdödande känslighetsstudier. Rekommendationer från den spanska föreningen för infektionssjukdomar och klinisk mikrobiologi. Finns på: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratory. (2009). Sabouraud dextrosagar med cykloheximid. Finns på: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinärmykologi. National Agrarian University. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Allmän mykologi. 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.