Den mannitol-salt-agar eller mannitol saltet är ett fast medium selektiv och differentierad kultur. Det skapades av Chapman för isolering av patogena grampositiva kockar, särskilt Staphylococcus aureus.
Det är emellertid också användbart att isolera Staphylococus epidermidis, som ibland kan vara närvarande som en opportunistisk patogen, och Staphylococcus saprophyticus, en erkänd urinpatogen, bland andra arter.
A. Fiola med framställt salt mannitolagarmedium. B. Saltade mannitolagarplattor utsäde med jäsande och icke-jäsande mannitolbakteriestammar. Källa: A och B: Foton tagna av författaren MSc. Marielsa Gil.
Vissa Enterococcus kan växa på detta medium, liksom vissa Gram-positiva spordannande stavar.
Detta medium är mycket användbart vid analys av kliniska prover, men det används också i mikrobiologisk studie av livsmedel och i kvalitetskontroll av industriprodukter, såsom kosmetika, mediciner, bland andra.
Salt Mannitol Agar består av extrakt och peptoner från nötkött, triptein, mannitol, natriumklorid, fenolröd och agar.
Grund
Mannitol-agar är selektiv tack vare sin höga saltkoncentration. Salthalt fungerar som ett hämmande ämne och förhindrar tillväxt av Gram-negativa bakterier.
Det är också differentiellt beroende på närvaron av kolhydratmannitol och den fenolröda pH-indikatorn. Från detta producerar bakterier som kan fermentera mannitol syror, surgöra mediet, förvandla kolonierna och mediet gula.
Å andra sidan växer kolonier som inte fermenterar mannitol i mediet och tar näringsämnen som tillhandahålls av extrakt och peptoner av kött och triptein. Därifrån extraherar bakterierna kol, kväve, vitaminer och mineraler som är nödvändiga för deras tillväxt.
Kolonierna i detta fall kan vara svaga eller starka rosa, och mediet förblir samma färg eller förändras till fuchsia.
Agar är det ämne som ger konsistensen till mediet.
Förberedelse
För att framställa en liter salt mannitol-agar vägs 111 g av det dehydratiserade mediet från det föredragna kommersiella företaget och löses i 1000 ml destillerat vatten med användning av en kolv.
Värme appliceras med ofta omrörning av mediet för att förbättra upplösningsprocessen. Koka i en minut.
Kolven placeras i autoklaven vid 121 ° C under 15 minuter.
I slutet av tiden, ta bort injektionsflaskan från autoklaven, låt den vila och servera mellan 15 till 20 ml på sterila petriskålar när temperaturen är ungefär 50 till 55 ° C.
Det får stivna, beställas på ett inverterat sätt i plaqueros och förvaras i kylen tills det används. Innan du sätter ett prov, vänta på att plattan når rumstemperatur.
Plattorna ympas genom strimling eller genom ympning med en drigalski-spatel. Det slutliga pH för det beredda mediet måste vara 7,4 ± 0,2
Färgen på det dehydratiserade mediet är ljusbeige och färgen på det beredda mediet är orange röd.
tillämpningar
På grund av dess höga selektivitet är detta medium idealiskt för att såga prover med blandad flora där du vill leta efter närvaron av Staphylococus aureus, som den huvudsakliga patogenen i denna släkt.
I detta avseende är en av dess vanligaste användningsområden i den mikrobiologiska analysen av svalg exudater och nasal urladdningsprover, särskilt för att detektera asymptomatiska S. aureus-bärare.
Vissa länder har implementerat denna analys som ett obligatoriskt krav för människor som vill arbeta som livsmedelsförsäljare.
Denna kontroll förhindrar sammandragning av personer som är bärare av S. aureus, och därmed undviker massiv matförgiftning, på grund av konsumtion av mat förorenad med stafylokock enterotoxin.
Det kan också inkluderas i sådd av sårinfektioner, blodkulturer, CSF, bronkoalveolärt sköljning, bland andra.
Saltad mannitolagar är användbar för att återisolera kolonier från urinkulturer från CLED-agar eller blodagar vars Gram har avslöjat Gram-positiva cocci i kluster.
Det är också giltigt i mikrobiologisk analys av mat, dricksvatten, jord, bland andra tillämpningar.
QA
När en portion plattor med salt mannitolagar har framställts rekommenderas det att utföra en kvalitetskontroll. Kontrollstammar sås för att visa om det finns tillväxt eller inte.
Kända Staphylococcus aureus-stammar kan användas som en positiv kontroll. Det bör växa tillfredsställande och utveckla gula kolonier, och mediet får också samma färg.
På liknande sätt är det bekvämt att inkludera en känd stam av Staphylococcus epidermidis. Det borde växa tillfredsställande utveckla rosa kolonier, och mediet förblir i samma färg eller mörknar till en starkare rosa.
Som negativ kontroll används stammar som inte bör växa på detta medium. Till exempel kan en känd stam av Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae odlas. Det förväntade resultatet är fullständig hämning, det vill säga ingen tillväxt.
Dessutom måste en okulerad platta inkuberas. I den borde det inte finnas någon tillväxt eller färgförändring.
Det är viktigt att plattan inte används om det finns tecken på försämring, såsom kontaminering, dehydrering, missfärgning, bland andra.
Slutgiltiga tankar
När du använder salt mannitol-agarmedium finns det några viktiga aspekter att tänka på:
- Att få en tillväxt av gula kolonier indikerar inte att det är Staphylococcus aureus. Det bör komma ihåg att vissa Enterococcus-stammar kan växa i detta medium och fermentera mannitol, såväl som i vissa sporformande Gram-positiva stavar.
Därför är det viktigt att utföra en Gram på kolonin och ett test för katalas.
Å andra sidan måste det beaktas att andra Staphylococcus-arter än aureus också kan fermentera mannitol. Därför är det viktigt att subkulturera kolonin till en näringsbuljong för att ta därifrån och utföra koagulasetestet.
Bland Staphylococcus-arter av klinisk betydelse för människan som fermenterar mannitol är: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, bland andra.
Andra kan ge en variabel reaktion, det vill säga ibland positiv och ibland negativ. Några är S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, bland andra.
-Det rekommenderas inte att ta kolonier direkt från mannitolagar för att utföra koagulas-testet, eftersom den höga koncentrationen av salt i mediet kan störa resultatet.
-Slutligen rekommenderas det att inkubera plattorna ympade med salt mannitol i upp till 48 timmar, eftersom vissa stammar av S. aureus långsamt kan jäsna mannitol, även om detta inte är så ofta.
referenser
- Britannia Laboratories. Salt mannitol-agar. 2015. Finns på: britanialab.com
- "Salt mannitolagar". Wikipedia, den fria encyklopedin. 31 okt 2018, 19:08 UTC. 17 jan 2019, 20:55, tillgänglig på: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
- BD-laboratorier. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Finns på: bd.com.