SALMONELLA-SHIGELLA AGAR: SKÄL, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar Salmonella Shigella även känd som SS-agar är ett selektivt och differentiellt medium måttligt, speciellt för isolering av enteropatogena bakterier av släktena Salmonella och Shigella, såväl miljöprover, såsom kliniska.

SS-agar har en komplex komposition; Det består av köttekstrakt, pepton, laktos, gallsalter, natriumcitrat, natriumtiosulfat, järncitrat, agar, neutralt rött, ljusgrönt och destillerat vatten. Med tanke på dess stora selektivitet kan prover med riklig blandad flora sås.

SS-agar med kolonier av Salmonella sp. Källa: Manurx27, från Wikimedia Commons

I mikrobiologilaboratorier används Salmonella-Shigella-mediet i stor utsträckning för att undersöka närvaron av Salmonella och Shigella i diarrépallprover, avloppsvatten, dricksvatten och mat.

Ibland är det nödvändigt att använda förberikningsbuljonger (laktosbuljong) och anrikningsbuljong (selenitcystinbuljong) för att återvinna stammar av Salmonella.

Dessa steg krävs när man misstänker förekomsten av Salmonella i en mycket liten mängd eller om stammen kan missbrukas av processer som är typiska för industriell produktion, huvudsakligen bearbetade livsmedel. Det är också lämpligt att berika avföringsprover från patienter som har behandlats med antibiotika.

Därefter kan den anrikade buljongen ympas på Salmonella-Shigella-agar och andra liknande media, såsom xylosagar, lysindoxikolat (XLD) och enterisk Hektoen-agar (HE).

Grund

Varje komponent i odlingsmediet Salmonella-Shigella har en specifik funktion, och blandningen som helhet ger den de egenskaper som kännetecknar det.

Närande kraft

Köttekstraktet och peptonet (digererat från kasein och djurvävnad) ger de erforderliga näringsämnena (kväve, kol och vitaminer) för utveckling av mikroorganismer som kan tolerera resten av komponenterna.

Konsistens

Agar-agaren är ansvarig för att tillhandahålla den fasta konsistensen till mediet.

Selektiv

Detta medium är mycket selektivt eftersom det innehåller gallsalter, natriumcitrat och ljusgrönt. Därför hämmar det tillväxten av alla Gram-positiva bakterier och de flesta Gram-negativa baciller, inklusive vissa koliformer.

Medan bakterier av släktet Salmonella och vissa Shigella-stammar stöder dessa föreningar.

I huvudsak är släktet Salmonella väldigt motståndskraftigt mot gallsalter, så mycket att de kan leva i gallblåsan hos vissa bärarpatienter som ständigt kastar bakterierna i avföringen.

Differentiell

Laktos är det jäsbara kolhydratet som hjälper till att skilja laktosfermenteringsstammar från icke-jäsande stammar. Denna egenskap bevisas av närvaron av pH-indikatorn, som i detta medium är fenolröd.

Laktosfermenteringsstammar ger röda kolonier, medan icke-jäsande stammar är färglösa. Denna egenskap är viktig eftersom Salmonella och Shigella inte jäsar laktos.

Å andra sidan innehåller detta medium natriumtiosulfat som sulfidkälla och järncitrat som järnkälla. Båda föreningarna kan differentiera bakterier som kan producera vätesulfid. Dessa reagerar och bildar en synlig, olöslig svart järnsulfidutfällning.

Den här egenskapen finns i vissa stammar av släktet Salmonella. Normalt är deras kolonier platta färglösa med en svart prick i mitten av den. Resten av salmonella inte producerar H ₂ S och utvecklas som färglösa kolonier.

Å andra sidan är kolonier av släktet Shigella plana färglösa utan svärt.

Förberedelse

Detta medium är mycket enkelt att förbereda.

Väg ut 63 g av det dehydratiserade kommersiella mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Värm lösningen och rör om. Blandningen kan koka i upp till minuter.

Detta medium får inte autoklaveras. Efter upplösning serveras den direkt på enstaka eller dubbla sterila plattor.

När de stelnar ordnas de på ett inverterat sätt på trombocyter och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills användning.

Mediet efter beredning bör förbli vid pH 7,2 ± 0,2 och med en orange-röd färg.

Det är viktigt att låta plattorna värmas upp innan man sätter in proverna. Det ursprungliga provet kan sås direkt, avge material på en del av agaren och sedan strimma därifrån.

Om du använder anrikade buljonger, passera en del av selenbuljongen och så med en drigalski-spatel.

Inkubera vid 37 ° C i 24 timmar i aerobios.

Tänk på att antalet gram som ska vägas och det slutliga pH-värdet för mediet kan variera från ett kommersiellt hus till ett annat. Den mellersta basen ger alltid indikationerna för dess förberedelse.

Använda sig av

Det används ofta vid analys av avföringskultur och i den mikrobiologiska studien av avloppsvatten, dricksvatten och livsmedelsprover.

Ofta framställs dubbla plattor, på ena sidan placeras Salmonella-Shigella-agar och på den andra XLD-agaren.

begränsningar

-Vissa Shigella-stammar växer inte i detta medium. Därför rekommenderas det inte för primär isolering av detta släkte.

-Inte varje transparent koloni med svart centrum är en indikation på Salmonella; Biokemiska tester måste utföras för att göra en korrekt identifiering, eftersom kolonierna av vissa Proteus-stammar inte kan skiljas från Salmonellas.

-Dehydratiserade mediet måste ta hand om exponering för miljön, eftersom det är mycket hygroskopiskt. Därför måste den förvaras i en torr och väl stängd miljö. Öppet under mycket korta perioder.

-När tiden kan gallsalter i mediet fällas ut och bilda en bild som liknar en matta i agaren, men detta påverkar inte resultaten.

-Vissa Shigella-stammar kan långsamt jäsa laktos.

QA

För att bevisa att mediet fungerar korrekt rekommenderas att plantera kända eller certifierade kontrollstammar och observera om tillväxten uppfyller de förväntade egenskaperna.

För detta kan stammar av E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis användas.

De förväntade resultaten är:

Enterobacter och Klebsiella ------ stora kolonier och röda eller rosa mucoider.

Shigella flexneri ---------- transparent eller färglösa platta kolonier.

Salmonella typhimurium ------ färglösa kolonier med svarta centra.

Enterococcus faecalis -------- total hämning.

referenser

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Finns på: f-soria.es
2. BD-laboratorium. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Finns på: bd.com
3. Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
4. Valtekdiagnostik. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Finns på: andinamedica.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.