TRYPTICASEIN SOJAAGAR: SKÄL, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den sojaagar trypton eller Trypticase Soy Agar är en fast odlingsmedium, och näringsmässiga icke-selektiv. Det betecknas av bokstäverna TSA för dess förkortning på engelska Trypticase Soy Agar. Den består av triptein, sojapepton, natriumklorid och agar-agar.

På grund av sin höga näringsstyrka är den idealisk för odling av måttligt krävande och icke krävande mikroorganismer. Medium utan ytterligare tillskott rekommenderas inte för primära kulturer, men det är mycket användbart för att odla rena stammar och hålla dem livskraftiga, bland andra användningar.

Trypticasein sojaagar kilar i rör med bakelitlock. Källa: Fotografi taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

Dessutom tjänar denna agar som en bas för framställning av anrikade medier, såsom blodagar, särskilt när det är nödvändigt att observera hemolysmönstren och att montera optoquin- och bacitracin taxa, som krävs vid diagnosen Streptococcus pneumoniae respektive Streptococcus pyogenes.

Å andra sidan, när det kombineras med antibiotika är det användbart att isolera kliniskt viktiga fakultativa och strikta anaeroba mikroorganismer från prover med blandad flora.

Slutligen uppfyller sammansättningen av trypticasein sojaagar och dess prestanda de krav som fastställts av de olika farmakopéerna (europeiska, japanska och nordamerikanska).

Grund

För att bakterier ska kunna utvecklas korrekt är närvaron av energiförsörjning nödvändig, såsom aminosyror, vitaminer, puriska och pyrimidiska baser.

I detta avseende tillhandahåller triptein och sojapepton dessa näringsämnen till mikroorganismer, vilket tillåter deras fulla utveckling. För snäva bakterier är det emellertid nödvändigt att komplettera denna agar med defibrinerat blod eller värmt blod för att öka dess anrikning.

Å andra sidan, om antibiotika tillsätts till mediet, blir det ett selektivt medium. 0,6% jästextrakt kan också tillsättas för att gynna isoleringen av arter av släktet Listeria, medan tillsats av cystintelurit och lammblod är perfekt för Corynebacterium diphteriae.

Slutligen tillhandahåller natriumkloriden den osmotiska balansen till mediet och agaren ger den fasta konsistensen.

Förberedelse

Trypticasein Soy Agar-tallrikar

För att framställa trypticasein sojaagar bör 40 g av det dehydratiserade kommersiella mediet vägas i digital skala. Det upplöses i en liter destillerat vatten i en kolv.

Blandningen får vila i 5 minuter och sedan tas den till en värmekälla för att lösa mediet. Det bör omröras ofta och kokas i 1 till 2 minuter. Därefter steriliseras mediet i autoklaven vid 121 ° C under 15 minuter.

Låt svalna till 50 ° C och fördela i sterila petriskålar. Låt stelna, vänd, beställ i plaqueros och förvara i kylen.

Mediets slutliga pH bör vara 7,3 ± 0,2.

Det bör noteras att färgen på det dehydratiserade odlingsmediet är lättbeige och bör förvaras mellan 10 och 35 ° C, på ett torrt ställe.

Den beredda agaren är för sin del ljusbärnstensfärgad. Förberedda tallrikar ska förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills de används.

Plattor måste nå rumstemperatur före användning.

Trypticasein sojaagarplattor kompletterade med blod

Blodagar framställs genom tillsats av 5% defibrinerat blod vid tidpunkten för kylning av trypticasein sojaagaren till 50 ° C. Blandningen homogeniseras genom att rotera med försiktiga rörelser.

Servera i sterila petriskålar. Mittfärgen ska vara körsbärsröd.

Trypticasein sojaagarplattor kompletterat med värmt blod

För att bereda den TSA-baserade blodagaren, fortsätt på samma sätt som redan beskrivits, men när du lämnar autoklaven, låt den vila tills temperaturen på mediet är cirka 56 till 70 ° C. Vid den tiden placeras blodet och blandas tills mediet blir brunt.

Servera i sterila petriskålar. Mediets färg är chokladbrun.

Trypticasein Soy Agar-kilar

Agarberedningsförfarandet är detsamma som det som beskrivs för plattor, med skillnaden att istället för att servera mediet på Petri-skålar fördelas det mellan 10 till 12 ml i rör med Bakelit-lock innan sterilisering.

Därefter autoklaveras rören vid 121 ° C under 15 minuter. När de lämnar lutar de sig med hjälp av ett stöd och får stelna.

De förberedda kilarna sås av ytan och tjänar till att hålla vissa icke-krävande mikroorganismer livskraftiga under en viss tid.

tillämpningar

Trypticasein Soy Agar används i följande fall:

-Som en bas för att förbereda den klassiska blodagaren som används rutinmässigt i de flesta laboratorier.

-Isolationen av krävande bakterier.

-Observation av hemolysmönstret.

-Utförande av diagnostiska test.

-Som en bas för att förbereda speciell blodagar för Corynebacterium diphteriae, med cystintelurit och lammblod.

-Som en bas för att framställa lammblodagar, plus kanamycin-vankomycin för tillväxt av anaerober, särskilt Bacteroides sp.

- För underhåll av icke-krävande stammar (Bacterioteca).

- Aerobt mikrobiellt antal i studien av mikrobiell gräns för vatten, miljö, livsmedel och kosmetiska prover.

sås

Prover kan sås direkt på ytan av Trypticasein Soy Agar kompletterat med blod eller andra tillsatser. Det sås av utmattning.

Medan trypticasein sojaagarplattor utan tillsatser används vanligtvis för att odla mikrobiella stammar (bakterier eller jäst).

QA

Sterilitetskontroll

För att kontrollera steriliteten hos de olika medierna som framställts med Trypticasein Soy Agar, rekommenderas det att göra följande: från varje beredd sats måste 1 eller 2 oinokulerade plattor eller rör inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar för att visa deras sterilitet. I alla fall måste det förbli utan tillväxt.

Om kontaminering hittas måste hela partiet kasseras.

Tillväxtkontroll

Följande bakteriestammar kan användas för att studera korrekt funktion av trypticasein sojaagar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 och Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammarna ympas och inkuberas aerobt vid 37 ° C under 24 timmar.

I alla fall måste tillväxten vara tillfredsställande.

Svampar som Candida albicans Complex ATCC 10231 och Aspergillus niger ATCC 16404 kan också användas. God tillväxt förväntas för båda stammarna.

Tillväxtkontroll och hemolysmönster för trypticasein sojaagar kompletterat med blod

För att verifiera korrekt funktion av blodagaren framställd med denna bas kan följande stammar användas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 och Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De ympas och inkuberas vid 37 ° C i mikroaerofilicitet under 24 timmar.

I alla fall bör tillväxten vara tillfredsställande, med hänsyn tagen till att beta-hemolys (lätt halo runt kolonin) bör observeras i S. pyogenes och alfa-hemolys (grönlig halo runt kolonin) bör observeras i båda stammarna av S. pneumoniae. kolonier).

referenser

1. Wikipedia-bidragsgivare. Trypticase Jag är agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 17 december 2018, 15:47 UTC. Finns på: https://sv.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Triptein soja agar. 2015. Finns på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptisk sojaagar. Finns på: foodafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
5. BD-laboratorier. Trypticase Jag är Agar. 2014. Finns på: .bd.com