Den vismut sulfit agar är ett fast medium selektiv och differentierad kultur, speciellt formulerad för isolering av Salmonella enterica underart enterica serotyp Typhi, bland andra arter av Salmonella. Mediet är känt som BSA-agar för dess förkortning på engelska Bismuth Sulfite Agar.
Den ursprungliga formeln för vismutsulfitagar skapades 1927 av Wilson och Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); den innehöll natriumsulfit, glukos, vismutlösning, ammoniumcitrat, järnhaltig sulfat och agar-agar.
Tillväxt av 48 timmars inkubation av Salmonella sp på vismutsulfitagar. Källa: Pixnio.com Författare: Dr. WR Erving, USCDCP
Idag sker en modifiering av det ursprungliga mediet, som består av köttekstrakt, kött- och kaseinpeptoner, vismutsulfitindikator, glukos, dinatriumfosfat, järnhaltig sulfat, ljusgrön och agar-agar.
Det finns många sätt att isolera Salmonella-arter, men när det gäller utvinning av Typhi-serotypen har vismutsulfit-agar en anmärkningsvärd fördel över dem, eftersom det i de flesta faller en mycket låg eller ingen återhämtning av denna mikroorganism. .
Det är dock nödvändigt att använda mer än en typ av medium när man försöker isolera enteropatogener, eftersom vismutsulfitagar är mindre effektiv för andra arter av Salmonella och för släktet Shigella, som hämmas eller utvecklas mycket dåligt. i denna agar.
Det bör noteras att av alla Salmonella-arter är Typhi-serotypen en av de viktigaste enteropatogenerna hos människor, detta är dess enda behållare. Denna serovar orsakar tyfoidfeber, gastroenterit, bakteremi och septikemi.
Av denna anledning är det relevant att inkludera denna agar när man analyserar vatten, avföring eller livsmedelsprover där det finns misstänkt närvaro.
Grund
Liksom de flesta kulturmedier innehåller Bismuth Sulfite Agar näringsämnen för att främja bakterietillväxt, såsom peptoner och köttekstrakt. Likaså fungerar glukos som en källa till energi och kol.
Men inte alla bakterier kommer att växa på detta medium, eftersom Bismuth Sulfite Agar är ett selektivt medium. Den innehåller föreningar som hämmar tillväxten av Gram-positiva mikroorganismer och vissa Gram-negativa bakterier. Dessa föreningar är: indikatorn vismutsulfit och ljusgrönt.
För sin del upprätthåller dinatriumfosfat mediets osmolaritet och pH.
Dessutom, vismut sulfit agar är en differentialmedel tack vare närvaron av ferrosulfat, som visar bildningen av H 2 S. H 2 S bildas av bakterier reagerar med järnsulfat och bildar ett klart synligt olösligt svart fällning.
Slutligen tillhandahåller agar-agaren den fasta konsistensen till mediet.
Förberedelse
Väg ut 52,3 g av det uttorkade mediet och upplöst i en liter vatten. Värm blandningen till koka under 1 minut med ofta omrörning tills den är helt upplöst. Överhett inte för mycket. Detta medium är inte autoklaverbart, eftersom extrem värme skadar odlingsmediet.
Låt svalna till 45 ° C och skaka innan servering i sterila petriskålar. Det rekommenderas att man tillverkar plattor med god tjocklek. För att göra detta måste 25 ml hällas i varje platta. Låt stelna. Eftersom det är ett medium som inte är steriliserat, är det normalt att dess omedelbara användning föreslås.
En studie som utfördes av D'aoust 1977 visade emellertid att det finns en bättre återhämtning av Salmonella typhimurium och Salmonella enteritidis som vismutsulfit-agar medeltiden, vilket inte påverkar prestandan för serovarna Typhi och Paratyphi B.
D'aoust rekommenderar att du använder plattorna på kyldag 4, även om han konstaterar att när medelåldern minskar selektiviteten, och Proteus vulgaris-stammar utvecklas lättare.
Av detta skäl är det för mycket kontaminerade prover, såsom avföring, att föredra att använda färskt preparerat medium. Använd annars på dag 4 för beredningen. Andra författare rekommenderar att du använder plattorna dagen efter förberedelsen, lagrade i kylen.
Kylda plattor måste härdas före användning. PH för mediet bör vara 7,5 ± 0,2. Det råa mediet är beige och det beredda mediet är gröngrå opaliserande.
tillämpningar
Bland de prover som kan planteras i detta medium finns prover av avföring, dricksvatten och avloppsvatten och mat.
För att förbättra isolaten rekommenderas att man gör en förberikningsbehandling med laktosbuljong och efter berikning med tetrationatbuljong eller cystinselenitbuljong innan man sätter på vismutsulfitagar.
Plattorna inkuberas vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar i aerobios.
Egenskaper hos kolonierna på vismutsulfitagar
Salmonella Typhi-kolonier ses normalt på denna agar inom 24 timmar med ett svart centrum och omgiven av en ljusgrön gloria. Medan 48 timmar blir de helt svarta på grund av bildandet av vätesulfid.
-Detta medium hämmar de flesta arter av släktet Shigella.
- S. Typhi och S. arizonae kan ge mycket liknande kolonier.
-De koliformer som producerar H 2 S, såsom Proteus och Citrobacter producerar kolonier liknande de hos salmonella, så det är nödvändigt att utföra biokemiska identifieringstest.
-En god striation måste utföras för att erhålla isolerade kolonier; Det är det enda sättet att observera de typiska kännetecknen för kolonier i släktet Salmonella.
QA
För sterilitetskontrollen inkuberas en oinokulerad platta vid 37 ° C, det förväntas att ingen tillväxt eller färgförändring kommer att ske.
För kvalitetskontroll, kända stammar som:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli och Shigella flexneri förväntas hämmas delvis genom att utveckla grönbruna respektive bruna kolonier. Båda salmonellorna måste ha en utmärkt utveckling med svarta kolonier med metalliskt glans och slutligen måste Enterococcus faecalis hämmas totalt.
referenser
- Wilson, W., & EM McV. Blair. Användning av ett glukosbismut sulfit järnmedium för isolering av B. typhosus och B. proteus. Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Hämtad från .jstor.org
- D'aoust JY. Effekt av lagringsförhållanden på prestanda hos vismutsulfitagar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Finns i: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD-laboratorier. Vismut-sulfit-agar enligt WILSON-BLAIR. 2009. Finns på: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Vismut sulfit Agar. 2017. Finns på: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G och Ybarra M. Bakteriologisk kvalitet på rå getmjölk producerad i Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54