Den TCBS agar är ett sätt att mycket selektivt och differentiell fast kultur, som används för isolering och odling av bakterier av släktet Vibrio, särskilt Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus och V. vulnificus som viktiga patogener av detta slag.
Förkortningen TCBS står för Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Denna agar är också känd som ett selektivt medium för Vibrios. Den ursprungliga formeln skapades av Nakanishi och modifierades senare av Kobayashi.
Kommersiell TCBS-medium och TCBS-agarplatta ympad med Vibrio cholerae. Källa: foto 1: taget av författaren MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Indien
Det består av jästextrakt, köttpepton, triptein, natriumcitrat, natriumtiosulfat, oxgall, sackaros, natriumklorid, järncitrat, bromotymolblått, tymolblått och agar.
Denna sammansättning möjliggör en adekvat utveckling av Vibrio-arter från vatten-, mat- och avföringsprover; med undantag av Vibrio hollisae, som inte växer på detta medium. Vidare kan TCBS-medium hämma tillväxten av andra medföljande bakterier, särskilt koliformer.
På grund av de allvarliga gastrointestinala och extra-tarmproblem som produceras av vissa arter av Vibrio-släktet, är dess diagnos mycket viktig. Människor infekteras huvudsakligen genom att äta råa eller underkokta livsmedel från havet eller förorenade vatten, men också genom sårinfektion.
På grund av detta måste kliniska laboratorier inkludera TCBS-agar i avföringskulturstudien av flytande avföringsprover, särskilt med utseendet på risvatten. Speciellt om patienten rapporterar att han varit i kontakt med havsvatten eller har konsumerat skaldjur eller fisk.
Grund
Jästextrakt, köttpeptoner och triptein är näringskällan för detta medium. TCBS-agar är emellertid ett ogästvänligt medium för de flesta bakterier.
Dess höga selektivitet ges genom tillsats av natriumcitrat och oxgall; båda är hämmande medel som också ger ett alkaliskt pH för mediet, vilket begränsar tillväxten av den åtföljande floraen och gynnar tillväxten av V. cholerae bland andra arter. Det bör noteras att Vibrio cholerae är mycket känslig för surhet.
För sin del balanserar natriumklorid osmotiskt mediet. Eftersom dess koncentration är hög, fungerar den också som ett hämmande medel, vilket gynnar tillväxten av halofila bakterier.
Sackaros är det jäsbara sockret som, tillsammans med bromotymolblått och tymolblått pH-indikatorer, ger mediet dess differentiella karaktär. Av detta skäl är det med detta medium möjligt att skilja sackarosfermenteringsstammar från icke-jäsande sådana.
Kolonier av sackarosfermenteringsstammar utvecklar gul färg och kommer att göra mediet från grönt till gult på grund av syraproduktion. De icke-fermentatorerna växer genomskinliga och mediet förblir originalfärgen (grön).
På samma sätt innehåller detta medium natriumtiosulfat som en källa till svavel och järncitrat som ett utvecklingsmedel. Båda visar bakterier som kan producera vätesulfid (färglös gas). H 2 S är bildad av tiosulfat och därefter vid reaktion med ferri-citrat en synlig svart fällning bildas.
Slutligen är agaren det som ger mediet den fasta konsistensen.
Förberedelse
Väg 89 g av det dehydratiserade mediet och löst i en liter destillerat vatten. Hjälp upplösning genom uppvärmning och ofta omrörning. Blandningen kan kokas i upp till 2 minuter.
Detta medium är inte autoklaverat. Efter upplösning serveras det direkt på sterila plattor. När de stelnar ordnas de på ett inverterat sätt på trombocyter och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills användning.
Mediet efter beredning måste förbli vid pH 8,6 ± 0,2.
Färgen på det dehydratiserade mediet är ljusbeige eller grönaktig-beige, och färget på mediet är skoggrönt eller blågrönt.
Det är viktigt att låta plattorna värmas upp innan man sätter in proverna.
Använda sig av
Det vanligaste exemplet för Vibrios-isolering är diarrépall.
Avföringsprover, om de inte omedelbart kan utsädes på det selektiva mediet, bör transporteras på Cary Blair-mediet.
För att öka kulturens känslighet kan avföringen ledas genom peptonvatten vid pH 8,4 som ett anrikningsmedium under högst 8 timmar, varifrån det subkultureras till TCBS-mediet.
Det måste också beaktas att vissa stammar av Vibrios kan orsaka septikemi hos immunsupprimerade patienter, därför kan de isoleras från blodkulturer. På samma sätt kan prover av vatten och mat från havet analyseras när det finns epidemiska utbrott av kolera sjukdom.
sås
Studiens provets inokulum måste vara framträdande, såddningen utförs med avrivningsmetoden genom utmattning. Plattorna inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar i aerobios.
De presumtiva kolonierna av Vibrio cholerae är medelstora, släta, ogenomskinliga, med tunna gränser och gula i färg på grund av jäsning av sackaros.
Arterna av V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii och vissa V. vulnificus växer på liknande sätt. Andra kliniskt viktiga Vibrios-arter som V. parahaemolyticus jäsar inte sackaros och utvecklas som olivgröna kolonier.
TCBS agarplatta ympad med Vibrio parahaemolyticus. Källa: isis325 Flickr
Å andra sidan måste man komma ihåg att vissa stammar av Aeromonas och Plesiomonas som är oxidas (+) kan växa i detta medium och utveckla gula kolonier som kan förvirra kliniker. Medan vissa stammar av Pseudomonas också oxidas (+) växer som gröna kolonier som V. parahaemolyticus.
Begränsning
Oxidastestet som är positivt för Vibrio-släkten bör aldrig utföras från kolonier erhållna från TCBS-agar, eftersom det erhållna resultatet kommer att vara falskt negativt. Föreningar i mitten stör starkt detta test. Därför måste det tillverkas av subkulturer på blodagar.
QA
För att bevisa att mediet är i gott skick är det tillrådligt att så kända eller certifierade kontrollstammar och observera om tillväxten uppfyller de förväntade egenskaperna.
För detta kan du använda stammar av:
-Vibrio cholerae - tillfredsställande tillväxt (gula kolonier, genomskinlig gräns).
-Vibrio parahaemolyticus - - tillfredsställande tillväxt (koloni med grönt centrum och genomskinlig gräns).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tillfredsställande tillväxt (gula kolonier med glorier av samma färg runt kolonin).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller partiell hämning (små gula eller genomskinliga kolonier).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- - partiell eller total hämning (blå kolonier).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Hämmas helt.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Total eller partiell hämning. (Små kolonier grön genomskinlig gräns).
Inkubation av oinokulerat medium bör vara oförändrat.
referenser
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS-agar. 2009. Finns på: f-soria.es
- BD-laboratorium. BD. TCBS Agar 2003. Finns på: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS Medium. 2015. Finns på: britanialab.com
- Acumedia Laboratories. TCBS Agar. 2016. Finns på: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.