THAYER MARTIN AGAR: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar Thayer Martin det är en mycket näringsrik och fast selektivt medium för isoleringen av Neisseria meningitidis och Neisseria gonorrhoeae; både kända som patogena eller kliniskt viktiga Neisserias.

En av de viktigaste speciella egenskaperna hos Thayer Martin Agar är dess höga innehåll av kosttillskott. Den här egenskapen är väsentlig, eftersom Neisserias är mycket krävande mikroorganismer ur näringssynpunkt och därför inte växer i vanliga media.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin affärsmedium. Källbild 1: Tagen av författaren MSc. Marielsa Gil, bild 2. Pixinio.com bakteriacoloniserad, modifierad, Thayer, Martin, agar.

Å andra sidan, eftersom dessa mikroorganismer normalt finns i icke-sterila områden, är tillsatsen av hämmare nödvändig för att förhindra tillväxten av den åtföljande floraen utan att påverka utvecklingen av Neisseria-släktet.

Denna agar består av GC-basagar, hemoglobin, ytterligare kosttillskott och ett komplex av hämmande ämnen (antibiotika och svampdämpande medel). De kommersiella husen säljer var och en av tillskotten separat.

Provet som sås i detta medium beror på den mikroorganism som söks. För Neisseria gonorrhoeae är de perfekta exemplen vaginala och uretrala sekretioner. För Neisseria meningitidis är de mest använda proverna CSF, svalg och nasofaryngeal exsudater.

Grund

Neisserias är mikroorganismer klassificerade som irriterande och därför är deras isolering svår. Därför är Thayer Martín ett komplext medium och var och en av dess komponenter uppfyller en funktion som förklaras nedan:

GC-basagar

GC-agar innehåller proteospepton, majsstärkelse, natriumklorid, dipotassium-fosfat, monopotassium-fosfat och agar-agar. Dess komponenter tillhandahåller de grundläggande näringsämnena för mikrobiell utveckling, neutraliserar giftiga fettsyror, hjälper till att upprätthålla osmotisk balans, definiera pH och ger en stabil konsistens till mediet.

Hemoglobin

Hemoglobin tillhandahåller faktorerna V respektive X (nikotinamid adenindinukleotid NAD respektive hemin). Av denna anledning växer Haemophilus-arter också i detta medium. Hemoglobin kan erhållas kommersiellt i en dehydratiserad form eller färskt defibrinerat bovint blod kan sättas till mediet.

Anrikningstillägg

Å andra sidan måste ett anrikningstillskott också läggas till Thayer-Martin-mediet, eftersom näringsämnena i basagaren inte är tillräckliga för kraven i Neisseria-släktet.

Det mest använda anrikningstillskottet kallas isovitalex. Det innehåller glutamin, adenin, NAD, kokarboxylas, guanin, järnnitrat, p-amino-bensoesyra, vitamin B12, tiamin och glukos. Alla dessa föreningar är nödvändiga för korrekt utveckling av patogena neisserier.

hämmare

Eftersom det är ett mycket näringsrikt medium måste hämmare användas som förhindrar tillväxten av mikroorganismer från den vanliga floran i området och därigenom gynnar isoleringen av Neisseria-släktet.

Inhibitorkomplexet består av vankomycin, colistin och nystatin. Vancouveromycin hämmar tillväxten av Gram-positiva bakterier, colistin förhindrar tillväxten av Gram-negativa bakterier såsom Pseudomonas och vissa saprofytiska Neisserias, och nystatin verkar på jästar såsom Candida albicans.

Emellertid ändrades Thayer Martin Agar senare; förändringarna bestod av tillsats av trimetoprim, ökningen i mängden agar och tillsats av extra glukos. Dessa förändringar förbättrade återvinningen av Neisseria gonorrhoeae-arter betydligt.

Det bör noteras att trimetoprim hämmar tillväxten av släktet Proteus och dess följdvärmande bildning. I den meningen är det antibiotika som ger selektiv karaktär till Thayer Martin-mediet.

Förberedelse

Original Thayer Martin agar

-GC-agar

Väg ut 8,2 g dehydratiserat GC-medium och suspenderas i 100 ml. Blanda och koka i 1 minut med ofta omrörning för att lösa upp fullständigt. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

- 2% hemoglobin

Suspendera 2 g dehydratiserat hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillerat vatten tills en enhetlig blandning bildas. Tillsätt lite efter lite mer vatten för att slutföra en volym på 100 ml. Suspensionen måste vara homogen innan den steriliseras.

Sterilisera i autoklav i 15 minuter.

-Berikningstillägg

Beräkna det kommersiella injektionsflaskan med det utspädningsmedel som tillhandahålls av samma kommersiella företag. Blanda väl. Mängden utspädningsmedel som ska användas anges i kitinstruktionerna.

-VCN-hämmartillskott (vankomycin, colistin, nystatin)

Rekonstituera injektionsflaskan med det utspädningsmedel som tillhandahålls av det kommersiella företaget. Blanda väl. Mängden utspädningsmedel som ska användas anges i kitinstruktionerna.

-Beredd

För varje 100 ml GC-agar fortsätt enligt följande:

När GC-agaren kommer ut ur autoklaven, låt den svalna till en temperatur av cirka 50 ° C och tillsätt 2 ml av den beredda hemoglobinlösningen, 2 ml anrikningstillskottet (isobitalex eller britalex) och 2 ml av hämningstillskottet. Blanda och servera i sterila petriskålar.

Låt stelna och förvara i kylen tills den används.

Färgen på det beredda mediet är körsbärsrött. Mediets slutliga pH är 7,2 ± 0,2

Modifierad Thayer Martin agar

Väg ut 8,2 g dehydratiserat GC-medium och suspenderas i 100 ml. Tillsätt 1 g agar-agar och tillsätt 0,3 g glukos. Blanda och koka i 1 minut med ofta omrörning för att lösa upp fullständigt. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Förbered hemoglobin och anrikningstillskottet som tidigare beskrivits.

Det använda suppressionstillskottet är VCNT (vankomycin, colistin, nystatin, trimetoprim).

-Beredd

Fortsätt enligt beskrivningen för den ursprungliga Thayer Martin-agaren.

Använda sig av

Thayer Martin Agar bör tillåtas värmas innan prover strimmas. Vanligtvis använda prover är svalgpinnar, nässtoppar, vaginal, uretral och / eller rektal urladdning och CSF.

Använd färska prover och gör starka ympningar på agaren. Proverna ympas direkt genom materialutmatning och ströms sedan utmattning på ytan.

Plattorna inkuberas vid 35-37 ° C under 24 till 48 timmar i en mikroaerofil burk (5% CO ₂ ). I slutet av inkubationstiden undersöks plattorna med avseende på små, gråa och ibland mucoidliknande kolonier.

Utför Gram och bekräftande biokemiska tester på misstänkta kolonier.

QA

Följande mikrobiella stammar kan användas för kvalitetskontroll av Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 och Neisseria meningitidis ATCC 13090; en tillfredsställande utveckling förväntas i båda stammarna.

Följande stammar bör också inkluderas: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 och Candida albicans ATCC 10231. I alla dessa förväntas en total eller partiell hämning i detta medium.

begränsningar

-Vi måste komma ihåg att bakterier som är resistenta mot de hämmare som används kan växa i mediet.

-Det finns stammar av Neisseria gonorrhoeae som kan vara känsliga för koncentrationen av vankomycin som används. Av detta skäl rekommenderas det att använda chokladagar kompletterat med isovitalex, men utan hämmare.

-Det finns stammar av jäst som är resistenta mot nystatin som kan växa i detta medium och påverka isoleringen av patogena Neisserias, särskilt gonokocker.

referenser

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar 2016. Finns på: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium Modifierad. 2010. Finns på: britanialab.com
3. Wikipedia-bidragsgivare. Thayer-Martin agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 26 oktober 2017, 16:33 UTC. Finns på: wikipedia.org 4. Öppnade 28 februari 2019.
4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010. Finns på: britanialab.com.
5. Laboratorier BBL ™ Medium anrikning för snabba mikroorganismer. 1999. Finns på: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.