LJUSGRÖN AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den lysande gröna agaren är ett fast odlingsmedium med hög grad av selektivitet. Det används uteslutande för isolering av stammar av släktet Salmonella, men det finns vissa undantag, till exempel typhi och paratyphi-arter som inte växer på detta medium.

Sökningen efter släktet Salmonella förekommer ofta i avföring, vatten eller matprover. I detta avseende kan detta medium vara mycket användbart. Denna agar skapades 1925 av Kristensen, Lester och Jurgens, senare modifierades den av Kauffmann.

Ljusgrön agar. Fermenterande respektive icke-jäsande kolonier. Källa: MJ Richardson / Invisible Worlds-utställningen - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Det är sammansatt av pluripeptoner från peptisk smälta av djurvävnad och pankreasdjäsning av kasein, det innehåller också jästextrakt, natriumklorid, laktos, sackaros, fenolröd, ljusgrön och agar-agar.

Det kännetecknas av att det är en ganska ogästvänlig miljö för de flesta bakterier, gynnar tillväxten av Salmonella, men vissa coliforms kan förbli i den och utvecklas svagt.

Det är viktigt att notera att släkten Shigella inte växer på detta medium och inte heller Salmonella typhimurium eller Salmonella paratyphi. Därför, om du vill isolera dessa mikroorganismer, bör andra media användas, t.ex. XLD-agar, bland andra.

Grund

Ljusgrön agar

Var och en av komponenterna som utgör mediet uppfyller en specifik funktion som bestämmer agarens egenskaper och egenskaper.

Pluripeptoner och jästextrakt är källan till näringsämnen från vilka mikroorganismer tar kväve och mineraler som är nödvändiga för deras utveckling. Laktos och sackaros är energikällor för mikroorganismer som kan fermentera dem.

Ljusgrönt är den hämmande substansen som förhindrar tillväxt av Gram-positiva bakterier och ett stort antal Gram-negativa mikroorganismer.

Natriumklorid ger mediet osmotisk stabilitet. Medan fenolröd är pH-indikatorn, blir den färg när detekterar syraproduktion från kolhydratfermentering.

Icke-jäsande kolonier av laktos och sackaros växer på detta medium i en rosa eller transparent vit färg, på en röd bakgrund. Till exempel bakterier av släktet Salmonella.

Medan laktos eller sackarosfermenterande bakterier som kan växa på detta medium utvecklar gulgrön eller gulgrön kolonier på en gröngul bakgrund. Till exempel Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae.

Ljusgröna agar (BGA) varianter

Det finns andra varianter av ljusgrön agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar och Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar

Innehåller Trypticase Soygargar, järnhaltig ammoniumcitrat, natriumtiosulfat Pentahydrat, fenolrött, glukos, ljusgrönt, Novobiocin och destillerat vatten.

Det används för isolering av Salmonella-kolonier från avföringsprover.

I detta fall är ljusgrönt och novobiocin de hämmande substanserna som förhindrar tillväxt av Gram-positiva bakterier och vissa Gram-negativa mikroorganismer.

Natriumtiosulfat är källan till sulfid och järncitrat är källan till järn, båda nödvändiga för att avslöja väte-sulfidproduktion genom bildning av en svart järn-sulfidutfällning.

Glukos är det jäsbara kolhydratet och fenolrött är pH-indikatorn.

På detta medium utvecklas Salmonella-kolonier stora med en svart mitt omgiven av en rödaktig gloria och följt av ett tydligt synligt område. Vissa stammar av Citrobacter freundii producerar kolonier identiska med Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Detta medium innehåller tryptikas sojaagar, järn-ammoniumcitrat, natriumtiosulfat, laktos, glycerol, ljusgrönt, novobiocin och destillerat vatten.

Skillnaden mellan detta medium och det föregående är att glukos är substituerad med laktos och glycerol och fenolrött används inte.

Mediet används också för att isolera Salmonella-arter, kolonierna utvecklas svart på grund av produktion av vätesulfid.

Endast kolonier som inte producerar syra från glycerol eller laktos uppnå tillräcklig H ₂ S produktion , eftersom låga pH stör H ₂ S bildning . Detta resulterar i färglösa kolonier för de flesta arter av Proteus och Citrobacter.

Förberedelse

-Väg 58 gram av det kommersiellt erhållna dehydratiserade mediet. Tillsätt den till en liter återdestillerat vatten. Blanda, låt stå några minuter och placera blandningen på en värmekälla tills den är helt upplöst.

-Autoklav vid 121 ° C i 15 minuter, överskrid inte steriliseringstiden.

-Låt den vila och servera medan den är varm i sterila petriskålar. Det slutliga pH-värdet bör vara 6,9 ± 0,2.

-Låt stelna och förvara i kylen tills den används. Innan sådd bör plattorna ta rumstemperatur.

-Pulvermediet är grönt i färgen och beredd tar en orange-brun eller rödgrön färg, beroende på pH och det kommersiella företaget. En mycket brun färg tyder på att agaren var överhettad.

-När agar har stelnat rekommenderas inte att omarbetas, eftersom mediet försämras.

Användningar / applikationer

Detta medium används för att söka efter stammar av släktet Salmonella från avföringsprover och mejerimat.

Eftersom det är en ganska ogästvänlig miljö, är det tillrådligt att så ett rikligt inokulum om det direkta provet används. Annars bör en förberikning och anrikning av proverna göras innan man sådd i detta medium.

Eftersom vissa stammar av Salmonella hämmas eller växer med svårigheter, är det tillrådligt att följa detta medium med andra selektiva agar för Salmonella.

Varje koloni med en typisk Salmonella-egenskap måste underkastas biokemiska tester för att den ska kunna identifieras definitivt.

QA

För att testa det ljusa gröna agarmediets goda prestanda kan ATCC-stammar användas för att observera deras utveckling på det.

De vanligaste stammarna som används för kvalitetskontroll är: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus 65.

De första 3 bör ge rosa eller genomskinliga vita kolonier på en röd bakgrund. Salmonella med god utveckling och Proteus med liten eller regelbunden tillväxt.

För Klebsiella och Escherichia förväntas gulgröna kolonier med gul bakgrund och i fallet med Shigella och Staphylococcus bör de hämmas.

Det dehydratiserade mediet måste förvaras vid rumstemperatur, på en torr plats, eftersom mediet är mycket hygroskopiskt.

referenser

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Ljusgrön agar. 2015.
3. BD-laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA