VOGEL-JOHNSON AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar Vogel-Johnson är ett fast medium selektiv och differentierad kultur, speciellt formulerad för isoleringen av Staphylococcus aureus. Detta medium skapades av Vogel och Johnson 1960 från modifieringen av tellurglycinagar formulerad 1955 av Zebovitz, Evans och Niven.

Modifieringen bestod i att öka koncentrationen av mannitol närvarande i mediet och i införlivandet av en pH-indikator. Den nuvarande formeln består av triptein, jästextrakt, mannitol, dipotassiumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolröd, agar, 1% kaliumtelluritlösning och vatten.

Källa: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Det bör noteras att det finns andra medier som, liksom Vogel-Johnson-agar, är selektiva för isolering av S. aureus, såsom salt mannitol-agar och Baird Parker-agar. I denna mening kan man säga att grunden till Vogel-Johnson-agar är en blandning mellan salt mannitol-agar och Baird Parker-agar.

I den första kännetecknas S. aureus-kolonierna genom att fermentera mannitolen och vrida pH-indikatorn till gul. Å andra sidan, i den andra, kännetecknas S. aureus av att minska tellurit till tellur och bilda grå till svarta kolonier. Båda egenskaperna observeras i Vogel-Johnson agar.

Detta medium, liksom dess motsvarigheter, är användbart för detektering av Staphylococcus aureus i livsmedelsprover, sanitära kontroller av industriprodukter och i kliniska prover.

Grund

Näringsämne

Vogel-Johnson-medium innehåller triptein- och jästextrakt; Båda substanserna tillhandahåller långkedjiga aminosyror som fungerar som källor till kol och kväve som är nödvändiga för bakterietillväxt. Bakterier som kan växa i detta medium tar näringsämnena från dessa ämnen.

Selektiv kraft

Vogel-Johnson-agar kan hämma tillväxten av Gram-negativa bakterier och till och med vissa Gram-positiva bakterier, vilket gynnar utvecklingen av koagulas-positiva stafylokocker. De hämmande substanserna är kaliumtellurit, litiumklorid och glycin.

Differentialkraft

De ämnen som gör detta differentiella medium är mannitol och kaliumtellurit. Mannitol är ett kolhydrat, och när det fermenterade syror produceras som gör att mediet blir från rött till gult, vilket händer tack vare närvaron av den röda fenolens pH-indikator.

Medan den färglösa telluriten när den reduceras till fritt metalliskt tellur tar en mörkgrå till svart färg.

Staphylococcus aureus fermenterar mannitol och reducerar tellurit till tellur. Av denna anledning är de typiska kolonierna av S. aureus i detta medium grå eller svart omgiven av ett gult medium.

Bakterier som växer i detta medium och inte minskar tellurit eller jäsning mannitol kommer att bilda transparenta kolonier omgiven av ett rött färgat medium, ännu mer intensiv än den ursprungliga färgen, på grund av alkalisering av mediet genom användning av peptoner.

Å andra sidan kommer bakterier som minskar tellurit men inte jäsar mannitol att växa som grå eller svarta kolonier omgiven av ett djupt rött medium.

Om mediet bereddes utan tillsats av kaliumtellurit, skulle S. aureus-kolonier utvecklas som gula kolonier, omgiven av gult medium, som i salt mannitolagar.

Osmotisk balans och stelningsmedel

Dipotassium phosphate upprätthåller mediets osmotiska balans och justerar pH till neutralitet 7.2. Medan agaren ger den fasta konsistensen till odlingsmediet.

Förberedelse

Kaliumtelluritlösning 1% vikt / volym

Denna lösning ingår inte i det dehydratiserade mediet eftersom det inte kan steriliseras i en autoklav. Av denna anledning bereds den separat och tillsätts till det redan steriliserade mediet.

Vissa kommersiella hus säljer den färdiga 1% kaliumtelluritlösningen. Gör så här om du vill förbereda dig i laboratoriet:

Väg ut 1,0 g kaliumtellurit och mät 100 ml destillerat vatten. Lös upp kaliumtelluriten i en del vatten och slutför sedan mängden vatten tills den når 100 ml. Sterilisera lösningen med filtreringsmetod.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Väg ut 60 g av det uttorkade mediet och upplöst i 1 liter destillerat vatten. Blandningen upphettas till koka för att underlätta fullständig upplösning. Under upplösningsprocessen omrörs mediet ofta.

Sterilisera i autoklav vid 15 pund tryck och 121 ° C under 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt den vila tills mediet når en temperatur på cirka 45 till 50 ° C. Tillsätt 20 ml av den tidigare beredda 1% kaliumtelluritlösningen.

Blanda och häll i sterila petriskålar. Låt stelna och beställ inverterade på tallrikshållare för att senare förvara i kylen tills de används.

Det slutliga pH för det beredda mediet bör vara 7,2 ± 0,2.

Innan du syr ett prov, vänta på att plattan når rumstemperatur.

Färgen på det beredda mediet är röd.

Använda sig av

Även om det kan användas för isolering av S. aureus i vilken typ av prov som helst, används den huvudsakligen för mikrobiologisk analys av farmaceutiska produkter, kosmetika och livsmedel.

Det rekommenderas att ympningen är tät. Sådd kan göras genom att skära med ett platinahandtag eller med ytan med en Drigalski-spatel.

Plattor inkuberas vid 35-37 ° C under 24 till 48 timmars aerobios.

QA

Följande kontrollstammar kan användas för att utföra kvalitetskontroll på Vogel-Johnson medium:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det förväntade resultatet är följande: för S. aureus stammar tillväxten tillfredsställande med svarta kolonier omgiven av gult medium. För S. epidermidis regelbunden tillväxt med genomskinliga eller svarta kolonier omgiven av rött medium.

På samma sätt förväntas total hämning för E. coli och partiell eller total hämning för Proteus mirabilis; om den växer kommer den att göra det sparsamt och kolonierna blir svarta omgiven av en röd färg.

referenser

1. BD-laboratorier. VJ (Vogel och Johnson Agar). 2006. Finns på: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kalium tellurit. 2015. Finns på: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Finns på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12: e upplagan, s. 502-503. Finns på: Användare / Team / Nedladdningar
6. Wikipedia bidragsgivare, "Ágar Vogel Johnson", Wikipedia ett gratis encyklopedi, tillgängligt på: wikipedia.org.
7. Venezuelanska Standard Covenin 1292-89. (1989). Livsmedel. Isolering och uppräkning av Staphylococcus aureus. Finns på: sencamer.gob.ve