PEPTONVATTEN: SKÄL, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den peptonvatten är ett vätskemedium anrikning, icke-selektiva, används huvudsakligen som utspädande livsmedelsprover eller andra material. Detta medium från kemisk synvinkel är mycket enkelt, det innehåller köttpepton, natriumklorid och vatten.

Det har ett visst näringsvärde, vilket gör det möjligt att berika provet. Om det finns misshandlade bakterier har detta medium kraften att reparera livskraften. Det är särskilt användbart vid utvinning av bakterier som tillhör Enterobacteriaceae-familjen.

Peptonvatten i flaskor. Källa: MSc. Marielsa gil

Vid återvinning av Salmonellas rekommenderas användning av den buffrade peptonvattenvarianten; Detta fungerar som ett förberikningsmedium för provet, i det här fallet innehåller det andra element såsom dinatriumfosfat och dipotassiumfosfat.

Normalt framställs peptonvatten vid neutralt pH, men det finns andra varianter där det är nödvändigt att pH är 8,5 ± 0,2 (alkaliskt), eftersom bakterierna som ska isoleras är alkalifila, såsom Vibrio cholerae.

Vidare kan detta medium användas som ett basmedium för kolhydratfermenteringstester.

Grund

Peptoner tillhandahåller de näringsämnen som krävs för bakterietillväxt, särskilt kväve och kortkedjiga aminosyror, medan natriumklorid upprätthåller den osmotiska balansen.

Vidare gör mediet det möjligt att sprida, homogenisera och reparera bakterieceller som har skadats av industriella processer.

Som utspädningsmedel är det idealiskt, effektivt att ersätta fysiologisk lösning (SSF) eller fosfatbuffertlösning (PBS).

Bakterietillväxt syns tydligt genom att observera dess grumlighet.

Förberedelse

Hemlagad beredning (inte kommersiell)

Väg ut 1 g pepton och 8,5 g natriumklorid, upplöst i 1 liter destillerat vatten. PH bör justeras till 7,0. För detta kan 1N natriumklorid användas.

Beredning med kommersiellt medium

Väg 15 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Homogenisera blandningen. Om det behövs kokas blandningen i 1 minut för att hjälpa den totala upplösningen. Servera i 100 ml flaskor eller 10 ml rör efter behov. Autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Kyl och använd eller förvara i kylskåp. Mediets slutliga pH är 7,2 ± 0,2.

Färgen på det dehydratiserade mediet är lättbeige och det framställda mediet är ljusbärnsten.

Förberedelse för jäsningstester

Till den föregående beredningen - före sterilisering - måste kolhydratet sättas till en slutkoncentration på 1%, plus Andrade-indikatorn (sur fuchsin) eller fenolröd (0,018 g / L). Rören ska vara försedda med en Durham-klocka för att observera gasbildning.

Andra varianter av peptonvatten

Buffrat eller buffrat peptonvatten

Den innehåller enzymatisk hydrolysat av kasein, natriumklorid, dihydrogenkaliumfosfat och natriumvätefosfatdodekahydrat. Det slutliga pH är 7,0 ± 0,2.

Vägg 20 g av det dehydratiserade mediet och löst i 1 liter destillerat vatten för framställningen. Låt den vila i cirka 5 minuter. Värm i 1 minut tills den är helt upplöst.

Häll i lämpliga burkar efter behov. Sterilisera med hjälp av autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

-Alkaliskt peptonvatten

Väg 25 g av det dehydratiserade mediet och upplös i 1 liter vatten. Fortsätt enligt ovan. PH varierar från 8,3 till 8,7.

Använda sig av

Inokulumet görs genom att placera provet direkt.

Det används för att späda ut prover, särskilt när det misstänks att det kan vara skadade bakterier. Vanligtvis är utspädningarna 1:10 och 1: 100.

Inkubera i 24 timmar i aerobios vid 35-37 ° C.

Avföringsprover

För avföringsprover för Salmonella rekommenderas användning av buffrat eller buffrat vatten som ett förberikningsmedium.

Gör så här:

Om avföringen bildas, ta 1 g prov. Om de är flytande, ta 1 ml avföring och häng i ett rör med 10 ml buffrat peptonvatten. När det gäller rektal vattpinnar, släpp ut materialet i vattpinnen i röret med buffrat peptonvatten.

Blanda och homogenisera provet i alla fall mycket bra.

Inkubera vid 37 ° C under 18 till 24 timmar. Därefter subkultur i en anrikningsbuljong såsom selenit cystinbuljong eller tetrathionatbuljong vid 37 ° C i 18-24 timmar mer. Slutligen odla i selektiva medier för Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, bland andra.

Matprover

Peptonvatten används som ett anrikningsmedium eller som ett enkelt utspädningsmedel, men om man söker Salmonella-arter används det som ett förberikningsmedium, som redan beskrivits.

I mat fortsätt enligt följande:

För fast mat väger 25 g av provet och för flytande livsmedel mäter 25 ml av det. Placera nämnda del i kolvar som innehåller 225 ml peptonvatten. Blanda och homogenisera provet.

Om den mikrobiella belastningen misstänks vara hög, kan serie- eller decimalutspädningar göras för att underlätta räkningen av kolonidannande enheter (CFU).

Antalet utspädningar kommer att bero på typ av prov och analytikerns erfarenhet.

Om man tvärtom misstänker att den mikrobiella belastningen är mycket låg är det inte nödvändigt att utföra utspädningar. Därefter subkultur på selektiva medier.

När det gäller mat från havet, som skaldjur, fisk, bland andra, på jakt efter Vibrio cholerae eller andra arter av Vibrio, bör peptonvatten justerat till pH 8,5 (alkaliskt peptonvatten) användas.

QA

Från varje framställd batch bör ett till två rör inkuberas utan ympning under 24 timmar i aerobios vid 37 ° C. I slutet av tiden bör ingen grumlighet eller färgförändring observeras.

Kända kontrollstammar kan också användas för att utvärdera deras effektivitet:

Följande bakteriestammar kan användas för detta: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I samtliga fall förväntas en tillfredsställande mikrobiell utveckling som observeras av medvetet grumlighet.

begränsningar

-Dehydratiserade mediet är mycket hygroskopiskt, så det måste hållas borta från fukt.

-Mediet bör inte användas om någon typ av försämring observeras.

-Dehydratiserat odlingsmedium ska förvaras mellan 10 - 35 ° C

-Det beredda mediet måste förvaras i kyl (2-8 ° C).

referenser

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B och Velázquez O. Tekniker för mikrobiologisk analys av livsmedel. 2009, 2: a upplagan Fakulteten för kemi, UNAM. Mexico. Version för manualer och dokumentadministratör (AMyD) vid fakulteten för kemi, UNAM 1. Finns på: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Buffeterat peptonvatten. 2015. Finns på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptonvatten. Finns på: foodafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptonvatten. 2015. Finns på: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Buffrat peptonvatten. Finns på: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkaliskt peptonvatten. Finns på: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.