NEUBAUER KAMMARE: HISTORIA, EGENSKAPER, ANVÄNDNINGSOMRÅDEN - BIOLOGI - 2025

Den Neubauer Kammaren , hematometer eller hemocytometer, är ett laboratorieinstrument som består av en speciell tjock glasplatta. Denna kamera används för att räkna vissa celltyper som röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar, även om den kan användas för att räkna sporer, spermier, parasiter, etc.

Den har några mycket speciella egenskaper, eftersom den består av 3 zoner, en central för räkning och två stödzoner. Varje kammare har två räknezoner eller korsstolar, en längst upp och en längst ner.

Neubauer kammare. Källa: SantiBadia. Redigerad bild.

Dessa har flera uppdelningar i rutnätform. Räkneområdena är de medelhöga rutorna som finns vid de fyra hörnen på båda gratulerna, plus det centrala torget.

Kamerans montering måste göras med stor omsorg, eftersom alla detaljer påverkar cellantalet. Det finns många misstag som kan göras, men om något av dem inträffar måste kameran demonteras, rengöras och monteras igen. De viktigaste felen inkluderar följande:

Överflödande kammaren eller underfyllning, låt kammaren torka, försöka avlägsna överskottsvätska med gasväv, luta kammaren vid transport, fylla en smutsig eller våt kammare, blanda inte utspädningen eller provet väl, bland andra. Alla dessa fel kommer att leda till ett overkligt värde.

Historia

Neubauer-kammaren är ett precisionsinstrument och tillverkningsprocessen genomgår strikt kvalitetskontroll. Det skapades för exakt räkning av partiklar eller formade element per mm ³ , såsom celler i olika vätskor. Dess delikata grafik är snidad med en diamantblyertspenna.

Neubauer kammaregenskaper

Hela kammaren har storleken på en normal glidbana så att den kan placeras på mikroskopet.

Kammaren består av tre centrala rektangulära ytor (a, b, c). I zon “b” är R-zonen eller räknezonen, även kallad en retikulum. En på varje sida av kameran, åtskild med zon "d".

Grafiskt diagram över Neubauer Chamber. Källa: Praktisk guide till hematologi. School of Bioanalysis vid University of Carabobo, Venezuela.

Varje graticule är ett polerat område som innehåller det räknade området. Den består av en kvadrat med en ytarea på 9 mm ² och är internt uppdelad i 9 rutor med en ytarea på 1 mm ² vardera. De fyra hörnrutorna är uppdelade i 16 mindre rutor (0,0625 mm ² i yta).

Dessa rutnät bildas av en serie millimeterlinjer som korsar varandra och utgör perfekt graferade rutnät avgränsade till de angivna mätningarna. Dessa linjer har graverats med en diamantspets.

Förbättrad Neubauer-retikulum. Källa: Praktisk guide för hematologi vid School of Bioanalysis vid University of Carabobo, Venezuela.

De fyra sidorna motsvarar räkneområdet. Det är på dessa sidor eller hörn som majoriteten av cellerna (röda blodkroppar och leukocyter) räknas, medan blodplättar räknas i det centrala området.

Den centrala zonen har fler uppdelningar, den består av en kvadrat på 1 mm ² uppdelad i 25 kvadrater som har en ytarea på 0,04 mm ² vardera. Dessa är i sin tur indelade i 16 rutnät med en yta på 0,0025 mm ² .

Beskrivning av det förbättrade Neubauer-retikulumet. a) Hörnens kvadrat, b) centrala kvadrat, c) median kvadrat för det centrala torget Källa: Praktisk guide för hematologi vid School of Bioanalysis vid University of Carabobo, Venezuela.

Zon “a” och “c” fungerar som stöd för att placera ett speciellt täckningsföremål som kallas en hematometrisk glid eller hematimeteröverdrag.

Höjden mellan folien och räkningsytan är 0,1 mm. Mätningar av räknehållets yta, såväl som kammarhöjd och provutspädning, är data som krävs för slutberäkningar.

tillämpningar

Det används för cellräkning. Det är särskilt användbart inom hematologiområdet, eftersom det möjliggör räkning av de tre blodcellserierna; dvs. röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar.

Det kan emellertid användas i andra områden, till exempel för att räkna spermier, sporer, bakterier eller andra föremål av betydelse beroende på typ av prov.

Hur man använder?

Provberedning

För att utföra cellantalet startas det vanligtvis från en tidigare utspädning. Exempel: för att räkna vita blodkroppar, bered en 1:20 utspädning med Turk's vätska. Utspädningen blandas väl innan du laddar pipetten och monterar Neubauer-kammaren.

Det finns tillfällen då en utspädning på 1:20 inte räcker för att räkna. Till exempel hos patienter som lider av vissa typer av kroniska leukemier. I dessa fall bör högre utspädningar såsom 1: 100 göras.

Om å andra sidan räkningen är mycket låg, som vid allvarliga leukopenier, kan mindre spädningar göras för att koncentrera provet. Exempel: du kan göra en 1:10 utspädning.

De ändringar som görs påverkar beräkningarna.

Neubauer kammarmontering

Neubauer-kammaren monteras genom att placera den hematometriska bilden i det centrala området. Båda måste vara mycket rena och torra. För att placera lamellen tas den i kanterna och släpps försiktigt ner på kameran.

Detta fylls genom att placera spetsen på en Thoma automatisk pipett eller pipett i en vinkel på 35 ° vid kanten av lastzonen. Vätskan släpps ut smidigt och lastningsområdet fylls av kapillaritet. Detta görs från båda sidor för att ladda de två tvärstolarna.

Retiklarna bör inte överbelastas och de får inte heller vägras. Lasten måste vara exakt. Det är viktigt att fyllningen sker homogent, det vill säga att det inte bör finnas några bubblor.

När kammaren är monterad får den vila i 2 minuter så att cellerna fälls ut till botten och deras visualisering och räkning blir lättare.

Efter vilotiden är den monterad på ljusmikroskopet för observation. Först är det fokuserat med ett 10X-mål och vid behov går det till 40X.

För att förbättra dess visualisering reduceras ljuspassagen från mikroskopet. För att göra detta sänks kondensorn och membranet är lätt stängt.

Räkning

För att räkna de vita blodkropparna eller leukocyterna måste hela ytan på de fyra medianhörnfyrorna och det centrala torget i varje retikulum räknas.

Räkningen börjar på torget i det övre vänstra hörnet. Du börjar från den första fyrkanten på den första raden, det vill säga från vänster till höger tills du når motsatt ände.

Där går du ner och tittar tillbaka från höger till vänster tills du når den andra änden, och så vidare räknas cellerna i varje rutnät sicksackmässigt. De 16 rutorna för varje median kvadrat räknas.

För att undvika att räkna en cell två gånger finns det regler om cellerna som finns på gränslinjerna för varje rutnät. Celler på vänster och översta rader räknas och celler på höger och nedre linjer ignoreras.

En manuell cellräknare måste finnas tillgänglig så att operatören trycker på enhetsknappen så många gånger som det observeras celler. Med hjälp av räknaren kan operatören räkna utan att behöva slå upp från det mikroskopiska fältet. I slutet av räkningen ser du det totala antalet celler som räknas.

beräkningar

För beräkningarna kan du fortsätta på flera sätt. En enda graticule kan räknas eller båda kan räknas och båda är i genomsnitt. I dessa två situationer måste de räknade cellerna multipliceras med en faktor, som i detta fall skulle vara 40. Och därmed ^erhålls det totala antalet per mm ³ .

Men om de två rutorna räknas och genomsnittet inte tas, måste det multipliceras med en annan faktor, i detta fall med 20.

-Multiplikationsfaktor

Så här beräknas multiplikationsfaktorn.

Olika data beaktas för beräkningarna, inklusive spädningstiter, kammarens höjd och det räknade området.

Utspädning

Standardutspädningen som används är 1:20 för leukocytantalet.

Kammarhöjd

Höjden mellan kammaren och blodcellsarket är 0,1 mm.

Räknat område

Om 5 kvadrater med 1 mm ² område räknas betyder det att den totala räkneytan är 5 mm ² . Dessa data måste multipliceras med kammarens höjd för att få den totala volymen som räknas. Det vill säga 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formler och beräkningar

Med de uppgifter vi har sägs det:

Om i 0,5 mm ³ - finns det --- antal celler räknade

I 1 mm ³ --- kommer det att finnas - X n ° celler

X antal celler = (antal celler räknade x 1) / 0,5 mm ³

Men utspädning måste också beaktas. Därför är formeln följande:

(antal celler räknade x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Slutligen, för att sammanfatta, kan antalet räknade celler multipliceras med 40. Sålunda ^erhålles värdet på leukocyter per ^mm3 .

Om de två retiklarna räknas ändras data för det räknade området, vilket i detta fall skulle vara 10 kvadrater, det vill säga 10 mm ² . Och en total räknat volym på 1 mm3. Formeln skulle vara:

(antal celler räknade x 1) x 20/1 mm ³

Därför skulle multiplikationsfaktorn i detta fall vara 20.

misstag

-Om vid laddning av kameran den överskrids eller överskrids med vätska kommer kamerans höjd att variera. Detta resulterar i att räkningen är högre än den verkliga. Om du försöker ta bort överskottet med gasväv eller bomull är detta ett enormt misstag. Denna åtgärd kommer att få cellerna att koncentrera sig, vilket ökar antalet.

-Om det laddas dåligt kommer räkningen att ligga under den verkliga.

-Om kameran är monterad och får torka är det inte längre möjligt att räkna eftersom det ger fel resultat.

-Om utspädningen av provet inte blandas väl innan kammaren laddas finns det risk för ett fel i avläsningen, eftersom cellerna inte kommer att fördelas homogent. Därför kommer det att finnas en lägre eller högre koncentration av celler, beroende på om provet tas från vätskans yta respektive från botten av röret.

-Utkomsten av bubblor minskar mängden vätska som måste komma in i retikulummet, vilket stör den korrekta visualiseringen och distributionen av cellerna. Allt detta påverkar resultaten väsentligt.

-Räkna inte upp från mikroskopet förrän varje stor fyrkant är klar för att undvika att gå vilse.

-Ett skäl till fel är att luta kameran efter montering. Av detta skäl måste mikroskopets steg höjas noggrant.

Rekommendation

Om du av någon anledning upptäcker en onormalitet i fyllningen av kammaren, rekommenderas att du demonterar beredningen, rengör kammaren och återmonterar från grunden.

Var försiktig när du rengör kameran för att undvika repor i korshåren. Å andra sidan, vara medveten om att den hematometriska bilden är känslig och ömtålig. Felaktig hantering kan bryta den.

Innan du börjar räkna, se till att cellerna är väl fördelade. En ojämn fördelning av celler sker från dålig provblandning eller utspädning. Om detta händer måste enheten upprepas.

Ett sätt att veta om cellerna är väl fördelade är genom att jämföra räkningen för varje stor kvadrat, antalet celler som räknas för varje kvadrat bör inte vara överdrivet olika från det ena till det andra.

- Om antalet vita blodkroppar är över 50 000 mm ^3, är det lämpligt att upprepa antalet och göra en större utspädning.

-Om du ändrar utspädningen måste du beräkna multiplikationsfaktorn, eftersom det påverkar formeln.

referenser

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Jämförelse av spermkoncentrationen med Maklers kammare och Neubauer-kammaren. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Finns i: scielo.
2. Neubauer kammare. (2018, 27 mars). Wikipedia, den fria encyklopedin. Konsultationsdatum: 04:10, 23 juni 2019 från es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Tillämpning av en alternativ räkningsmetod i Neubauer-kammaren för att bestämma koncentrationen av Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Finns på: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analys av spermogrammet. Pastor Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Finns i: ve.scielo
5. Hematologi praktisk guide för School of Bioanalysis vid University of Carabobo. Venezuela 1998