EC BULJONG: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den EG-buljong eller buljong Escherichia coli är en selektiv flytande odlingsmedium. Detta medium rekommenderas av standardmetoderna för att räkna totala och fekala koliformer, med den mest sannolika siffertekniken (MPN) i vatten- och livsmedelsprover, där huvudmedlet involverat är Escherichia coli.

EC-buljong består av triptein, laktos, gallsalter, dipotassium-fosfat, monopotassium-fosfat, natriumklorid och vatten. Dess formel är strategiskt utformad för att gynna tillväxten av totala och fekala koliformer och förhindra utveckling av andra åtföljande mikroorganismer.

Figurativ bild av beredningen av EG-buljongen. Källa: Pixabay.com

Escherichia coli-bakterien är den viktigaste fekala coliformen som är förorenad i vatten- och livsmedelskällor och är orsaken till viktiga gastrointestinala störningar.

Det bör noteras att det finns många serotyper av Escherchia coli; Bland dem kan vi nämna enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) och enteroaggregative (EAEC)).

Detta medium har förmågan att tillåta utveckling av dem alla, men utan att kunna skilja dem från varandra. Detta kräver ytterligare test.

Den mikrobiologiska studien av vatten och mat med det mest sannolika antalet (MPN) för att söka efter totala och fekala koliformer är ett protokoll som består av flera faser; presumptiv fas, bekräftande fas och färdigställande fas. EC-buljongen används i bekräftelsefasen.

Grund

EG-buljong

EG-mediet är baserat på att tillhandahålla de näringsämnen som är nödvändiga för optimal utveckling av totala och fekala koliformer, där Escherichia coli-bakterierna ingår.

Dessa näringsämnen tillhandahålls av triptein, som är en utmärkt källa för peptider och aminosyror. Dessutom innehåller den också laktos, ett jäsbart kolhydrat som ger energi och gör det möjligt att visa om bakterierna producerar gas.

Å andra sidan innehåller mediet gallsalter som ger den selektiva karaktären, eftersom det hämmar tillväxten av Gram-positiva mikroorganismer som kan finnas i provet.

Likaledes fungerar dipotassium-fosfat och monopotassium-fosfat som ett pH-balanseringssystem. Detta system är nödvändigt eftersom laktosen i buljongen tenderar att surgöra mediet när det fermenteras av mikroorganismer, men detta kompenseras av fosfatsalterna.

Därför är dessa element väsentliga, eftersom okontrollerad surhet kan påverka korrekt utveckling av de sökta mikroorganismerna.

För sin del stabiliserar natriumklorid mediet osmotiskt, medan vatten är lösningsmedlet för de närvarande lösta ämnena och ger vätskekonsistensen till mediet.

Novobiocin-modifierad EC-buljong

Okrend och Rose skapade en mängd EG-buljong, kallad novobiocinmodifierad EC-buljong. Modifieringen bestod av att minska koncentrationen av gallsalter och tillsätta 20 mg / dl novobiocin.

Denna modifiering gynnar återhämtningen av enterohemorragiska Escherichia coli-stammar (O157: H7).

Denna bakterieserotyp orsakar svår hemorragisk kolit som kan leda till hemolytiskt uremiskt syndrom (HUS); vilket i sin tur kan generera akut njursvikt, med en hög dödlighet som kan uppgå till 50% hos äldre.

På grund av sjuklighet och dödlighet som orsakas årligen av denna bakterie på grund av konsumtionen av förorenad mat, rekommenderar USA: s jordbruksdepartement (USA) starkt detta medium.

Förberedelse

EG-buljong

Väg 37,4 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i 1 liter destillerat vatten. Blandningen ska få stå i 5 minuter. Därefter, i en värmekälla, är den färdig att lösa upp genom omrörning ofta.

När den är upplöst distribueras den i förkonditionerade provrör med ett Durham-rör inuti. Sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

PH för mediet bör vara 6,9 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och det beredda mediet är ljus bärnsten.

Buljonger förvaras i kylen tills de används. Vid användning måste buljongen ha rumstemperatur.

Å andra sidan kan EG-buljongen också framställas i dubbel koncentration.

Novobiocin-modifierad EC-buljong

Väg ut 36,7 g dehydratiserat medium och upplöst i 1 liter vatten. Resten av beredningen är densamma som beskrivits ovan.

Använda sig av

Total och fekal coliform analys

EC-buljong är idealisk för den bekräftande fasen av studien av koliformer med NMP-metoden, både i vattenprover, liksom i farmaceutiska produkter och livsmedel.

Grumma, gasproducerande laktosbuljonger som erhållits i den presumtiva fasen bör återinföras i 2% ljusgröna buljonger och EG-buljong.

För totala koliformer inkuberas EG-buljonger aerobt i 24 till 48 timmar vid 37 ° C, och för fekala koliformer inkuberas de aerobt i 24 till 48 timmar vid 44 ° C.

I båda fallen tolkas det på följande sätt: grumliga rör med gasproduktion anses vara positiva. Om det inte sker någon gasproduktion på 24 timmar fortsätter inkubationen i upp till 48 timmar.

EC-positiva buljonger går till den fullständiga bekräftelsesfasen, som består av återinträngning på selektiva media som Mac Conkey-agar, EMB-agar eller Endo-agar.

Om buljongen som används är novobiocinmodifierad EC rekommenderas positiva rör att återföras på Mac Conkey-agar med sorbitol.

QA

Varje parti berett medium måste vara kvalitetskontrollerat. Först måste mediets sterilitet utvärderas. I detta avseende inkuberas en eller två buljonger utan ympning i aerobios under 24 timmar vid 37 ° C. Det förväntade resultatet är en transparent buljong utan grumlighet eller färgförändring.

För det andra måste tillväxten av kända stammar utvärderas, för detta kan följande bakterier användas: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alla fall förväntas en tillfredsställande mikrobiell utveckling, iakttagande av en molnig buljong med gasproduktion för E. coli och ingen gas för Salmonella.

Andra stammar som kan inkluderas i kontrollen är: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Dessa stammar måste inhiberas totalt.

rekommendationer

-Placeringen av Durham-rören är avgörande för studier av koliformer.

-Distribuera mediet i provrören innan sterilisering, aldrig efter.

- Använd inte om mediet är mer än 3 månader gammalt.

- Använd inte om någon förändring av mediets vanliga egenskaper observeras.

referenser

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015. Finns på: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Centrum för livsmedelssäkerhet och folkhälsa. 2010. Finns på: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC-medium. Finns på: foodafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin-modifierat EC-medium. Finns på: foodafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Upptäckt, isolering och karakterisering av Escherichia coli som producerar Shiga-toxin från färskt kött från slaktare i Concepción, provinsen från Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Finns på: www.scielo.org.