LAKTOSERAD BULJONG: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2024

Den laktos-buljong är ett medel av icke - selektiva flytande odlingsmedium som används främst som en pre-anrikning vid isolering av Salmonella-stammar från mikrobiologisk analys för att bearbetade livsmedel, mejeriprodukter eller vatten. Detta rekommenderas av Internationella kommissionen för mikrobiologiska specifikationer för livsmedel (ICMPF).

Mediet innehåller enzymatisk smälta av gelatin, köttekstrakt och laktos, ämnen som är nödvändiga för bakterietillväxt. Dessutom är laktos ett jäsbart kolhydrat, därför kan vissa koliformer bryta ner det med produktion av gas.

Lakterade buljonger med grumlighet. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa gil

Av denna anledning rekommenderas laktosbuljong av American Public Health Association (APHA) för den presumtiva studien av totala och fekala koliforma bakterier, vilket kvalificerar det som ett utmärkt alternativ att ersätta tryptoslaurylsulfatbuljong i standardtekniken för det mest troliga antalet (MPN). ), används för mikrobiologisk analys av mat, mjölk och ytvatten, underjordiska, fritids-, hushålls- och industriavfallsprover.

Grund

För den mikrobiologiska analysen av vissa prover är förberikningssteget viktigt för att kunna återvinna en specifik mikroorganism som kan vara i mycket låg mängd eller under ogynnsamma förhållanden som bryter mot eller minimerar dess livskraft.

Detta är fallet med torkade och bearbetade livsmedel, eventuellt förorenade med Salmonellas sp. I dessa fall, om bakterierna finns, har de drabbats av fysiskt och kemiskt missbruk under produktionsprocessen.

På ett sådant sätt att mikroorganismer utsätts för ogynnsamma faktorer såsom uttorkning, exponering för hämmande eller toxiska produkter och överlappningen som genereras av närvaron av andra bakterier i större mängd, bland andra.

I detta avseende har laktosbuljongen en reparationseffekt på de skadade strukturerna i mikroorganismen, vilket får den att återhämta sig och reproducera sig på ett sådant sätt att den kan upptäckas.

På samma sätt har laktosbuljongen förmågan att späda ut de hämmande substanserna som kan påverka dess livskraft, vilket tillåter dess utveckling. Dessutom är näringssammansättningen för laktosbuljongen strategisk för att gynna tillväxten av Salmonella sp jämfört med andra mikroorganismer.

För slutlig identifiering måste den underkultureras till andra definitiva kulturmedier.

Å andra sidan gör mediets sammansättning det också möjligt att detektera laktosfermenterande mikroorganismer som producerar gas.

Förberedelse

För att framställa en liter laktosbuljong måste 13 gram av det dehydratiserade mediet vägas och löstas i 1000 ml destillerat vatten.

För att lösa upp mediet i vattnet kan lösningen upphettas lite, men inte för mycket.

När den väl är homogen bereds lösningen enligt följande: om buljongen ska användas för att söka efter koliformer, bereds ett rack med provrör, i vilka ett Durham-fermenteringsrör sätts upp och ner.

Durham-röret är en mycket viktig detalj, eftersom det gör det möjligt att upptäcka gasbildning, en data av stort värde i sökandet efter koliformer.

När rören är färdiga utdelas 10 ml av laktosbuljongen i dem, en mängd som måste vara tillräcklig för att täcka hela Durham-röret.

Om laktosbuljongen ska användas som en anrikningsbuljong är det inte nödvändigt att placera ett Durham-fermenteringsrör. I detta fall krävs en större mängd medium (225 ml), som serveras i 500 ml flaskor, bred mun och med ett värmebeständigt skruvlock.

Därefter autoklaveras rören eller kolvarna vid 121 ° C under 15 minuter.

Mediet måste förbli vid ett slutligt pH på 6,9 ± 0,2 vid 25 ° C.

Buljonger förvaras i kylen tills de används.

Före användning måste buljongen bringas till rumstemperatur.

Å andra sidan kan laktosbuljongen också framställas i dubbel koncentration.

Vissa laboratorier lägger bromokresol purpur till laktosbuljongen som en pH-indikator för att visa rören där laktosen har jästts på grund av färgförändringen. I det här fallet tar buljongen en lila färg och om det är jäsning blir det gult.

tillämpningar

I mikrobiologilaboratorier används laktosbuljong ofta eftersom det är ett relativt billigt medium som ger tillförlitliga och snabba resultat (24-48 timmar).

Det kan användas för analys av totala och fekala koliformer i mat och vatten eller som en förberikningsbuljong för Salmonella.

Pre-anrikning

Förberikning är ett steg före provberikning, vilket kraftigt förbättrar återvinningen av bakterier i släktet Salmonella i bearbetade livsmedel.

För att göra detta ympas det fasta livsmedelsprovet (25 gram) eller vätska (25 ml) i 225 ml laktosbuljong och inkuberas under 24 till 48 timmar. Därefter kommer den att odlas i ett anrikat medium såsom selenitcystintillösning eller tetratjonatbuljong. Gå sedan vidare till selektiva medier från XLD och SS.

Total och fekal coliform analys

Det är ett utmärkt medium som en indikator på fekal kontaminering.

Av denna anledning är laktosbuljong idealisk för den presumtiva fasen i koliformstudien med metoden Most Probable Number.

För prover där man misstänker en stor mängd coliforms kommer en mindre mängd av det att inokuleras (1 ml), medan för prover där en mindre mängd coliforms misstänks kommer en större volym av prov (10 ml) inokuleras.

För analysen görs 10- ^-1 , 10- ^-2 , ^10-3- utspädningar , vilket bildar ett batteri av 3-5 rör för varje koncentration som används.

Från varje utspädning ympas samma volym i laktosbuljongen.

Rören inkuberas i 24 timmar. Negativa buljonger inkuberas under ytterligare 24 timmar.

Tolkningen av resultaten görs genom att observera två egenskaper: den första är närvaron eller frånvaron av grumlighet och eftersom detta medium inte innehåller en pH-indikator kommer ingen färgförändring att ske.

Den andra är produktion eller inte av gas. Gas bevisas lätt i Durham-röret genom utseendet på en eller flera luftbubblor inuti det.

Det anses positivt om båda kännetecknen observeras, det vill säga turbiditet vid gasproduktion. Positiva rör bör sättas in i bekräftande media (2% Brilliant Green Bile buljong och EC buljong).

Kvalitetskontroll av mediet

- När man förbereder mediet är det viktigt att man inte glömmer att placera Durhams-rören om syftet med detsamma är att studera coliforms.

- Överhett inte mediet innan du steriliserar.

- Distribuera i provrör före sterilisering, aldrig efter.

- Använd inte om mediet är mer än 3 månader gammalt.

- Använd inte om du observerar någon förändring av mediets vanliga egenskaper.

- Testa dess kvalitet genom att såga kända stammar som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii och Klebsiella pneumoniae vid beredning av en mängd laktosbuljong. De växer mycket bra med gasproduktion (positiv kontroll).

- Det kan också innehålla Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som växer bra, men utan gasproduktion (Negativ kontroll).

- Det bör noteras att den ursprungliga färgen på det dehydratiserade mediet är beige och att det förberedda mediet är mycket ljus och transparent gul. Om en färgförändring eller utseende observeras kan det försämras.

referenser

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Miljöbiologi och mikrobiologi. (2013) 1: a upplagan. University of Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B och Velázquez O. (2009). Tekniker för mikrobiologisk analys av livsmedel. 2: a upplagan Fakulteten för kemi, UNAM. Mexico.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktosbuljong dubbel koncentration (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Jämförelse av tekniker för extraktion av koliforma bakterier från sedimentet i sjön Xochimilco, Mexiko. Rev. argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Finns på: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bestämning av den mikrobiologiska kvaliteten på artesiska brunnvatten i distrikten i Central-, Cordillera- och Capital kommunavdelningarna. Mem. Inst. Investig. Vetenskap. Hälsa 2013; 11 (1): 5-14. Tillgängligt från: scielo.iics.