MALONATBULJONG: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den malonat buljong är det flytande odlingsmedium som används för det diagnostiska testet (malonat), används för att skilja några släkten av familjen Enterobacteriaceae. Det skapades av Leifson 1933 och modifierades senare av Ewing, som lade till en liten mängd dextros och jästextrakt till den ursprungliga formeln.

Mediet består för närvarande av jästextrakt, ammoniumsulfat, dipotassiumfosfat, monopotassiumfosfat, natriumklorid, natriummalonat, dextros och bromotymolblått. Detta test ingår generellt i det biokemiska identifieringsbatteriet för Enterobacteriaceae, vilket hjälper till att differentiera vissa släkter och arter.

Grafisk representation av malonatestet. A. Negativt test, B. (Försurning) Negativt test, C. (Medium alkalisering) Positivt test. Källa: Color tubes publicdomainpictures.net

Malonatprovet baseras huvudsakligen på förmågan hos vissa mikroorganismer att använda natriummalonat som deras enda kolkälla och ammoniumsulfat som kvävekälla.

Malonat-testet är vanligtvis positivt i vissa arter av Enterobacter-, Klebsiella- och Citrobacter-släkten. Medan de flesta arter av släkten Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus och Providencia ger en negativ reaktion.

Grund

Malonat-testet består av att visa de bakterier som kan använda natriummalonat som den enda kolkällan och ammoniumsulfat som kvävekälla.

De flesta Enterobacteriaceae som inte använder malonat kan växa i detta medium och tar dextros och jästextrakt som näringsämnen.

I detta fall motverkas varje försök att alkalisera genom användning av peptoner genom produktion av syror som alstras genom fermentering av dextros. Likaledes fungerar dipotassium och monopotassium-fosfater som en buffert och håller pH vid 6,7.

Därför förblir buljongen samma originalfärg (grön) när testet är negativt. I sällsynta fall kan mediet bli surt på grund av jäsningen av dextros; utan användning av peptonerna och pH-indikatorn skulle det vända mediets färg till gult. För att detta ska ske måste pH sjunka till 6.

När detta test är positivt sägs det att mikroorganismen använde malonat och ammoniumsulfat som kol- och kvävekällor, utan att använda de andra komponenterna.

I detta fall blir mediet alkaliskt på grund av frisättningen av natrium och den resulterande bildningen av NaOH. I detta avseende förvandlar pH-indikatorn (bromotymolblått) mediets färg från grönt till blått när pH är lika med eller högre än 7,6. Blått kan vara lätt eller intensivt (preussiskt blått).

Slutligen bibehåller natriumklorid osmolariteten hos mediet och vatten är utspädningsmedlet för alla komponenter.

tolkning

Samma buljong (grön) - negativt test

Gul buljong: negativt test

Ljus eller djupblå buljong: testa positivt

Det finns en variant som kallas fenylalaninmalonatbuljong, även kallad Shaw och Clarkes medium. I detta fall kan två test analyseras, användningen av malonat som kolkälla och produktionen av pyruvinsyra från fenylalanin.

Förberedelse

Malonatbuljong

Antalet gram som anges av insatsen till det valda kommersiella företaget vägs (det kan variera från en till en annan). De vägda gram suspenderas i en liter destillerat vatten. Värm något tills det är helt upplöst. Distribuera 3 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullshättar.

Sterilisera i autoklav vid 121 ° C under 15 till 20 minuter.

Kyl före användning. Om de inte ska användas omedelbart, förvara i kylen tills de används. Ta buljongen till rumstemperatur innan ympningen.

PH för mediet bör vara 6,7 ​​± 0,2. Färgen på det beredda mediet är flaskgrönt.

Fenylalaninmalonatbuljong

Väg ut 11 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i 1 liter destillerat vatten. Resten av beredningen är densamma som tidigare beskrivits.

Det kan också framställas genom att tillsätta 2 g / L fenylalanin till malonatbuljongmediet innan det steriliseras.

Använda sig av

Det används som en del av batteriet i biokemiska tester som är sammansatta för identifiering av bakterier från Enterobacteriaceae-familjen.

Hjälper till att skilja mellan:

-Släktet Klebsiella och Enterobacter (+) till släktet Escherichia och Serratia (-).

-Sorten Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame och Salmonella enterica ssp diarizonae (+), av arten Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Fra släktet Klebsiella generellt (+) från släktet Actinobacillus (-).

-Tillfälligt kan det hjälpa till att differentiera släkt och arter av bakterier som inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen, som bland de icke-jäsande Gram-negativa bacillerna Alcaligenes faecalis (+) och Acinetobacter sp (-).

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

Bearbeta

Under en tändare tas en del av en ren köln med ett korrekt steriliserat och kylt platinahandtag. Provet som tagits (lätt inokulum) upplöses i malonatbuljongen. Inkubera med locket löst i aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.

Malonatbuljong kan också inokuleras från en 18-24 timmars kultur i tryptikas sojabuljong. I detta fall tas 0,01 ml med en steril pipett och malonatbuljongen ympas. Inkubera med locket löst i aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.

I slutet av tiden tolkas resultaten. Alla spår av blå färg efter 48 timmars inkubation bör betraktas som positiva. Testet ska inte tolkas som negativt förrän 48 timmars inkubationstid har gått.

I fallet med användning av fenylalaninmalonatbuljongvarianten tolkas först malonatet och sedan tillsätts 5 droppar IN HCl och 3-5 droppar 8% järnklorid. En mörkgrön färg tolkas som ett positivt test för fenylalanin. Om mediet å andra sidan blir ljusblått är testet negativt för fenylalanin.

QA

För att utföra sterilitetskontrollen av mediet bör en eller två buljonger inkuberas vid 35 ° C ± 0,2 under 24 timmars inkubation. Efter denna tid bör det inte bli någon molnighet eller färgförändring.

För kvalitetskontroll kan kända eller certifierade stammar användas, såsom: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 och Escherichia coli ATCC 25922.

De förväntade resultaten är:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae och Salmonella enterica ssp arizonae ger en positiv reaktion (medelblå färg).
• För Escherichia coli bör resultatet vara negativt, det vill säga att det förväntas att det inte kommer att bli någon färgförändring (grön) eller att det blir gult på grund av jäsningen av glukos.

begränsningar

Använd inte buljong som visar grumlighet, fällningar, färgförändringar eller några tecken på försämring.

referenser

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolering av Salmonella spp. och molekylära verktyg för detektering. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Finns på: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Broth, Ewing modifierad. 2007. Finns på: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonato buljong. Finns på: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato buljong. 2013. Finns på: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostics. Malonato buljong. Finns på: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenylalaninmalonatbuljong. Finns på: condalab.com