TRYPTICASEIN SOJA BULJONG: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den sojabuljong trypton är ett flytande odlingsmedium, mycket näringsrikt, icke-selektiva. På grund av dess stora mångsidighet är det ett av de mest använda flytande odlingsmedierna i mikrobiologilaboratoriet.

Det är också känt med namnet tryptisk sojabuljong eller digererad kasein-soja, vars förkortning är TSB för dess akronym på engelska Tryptic Soy Broth eller CST för dess akronym på spanska. Dess användning är mycket varierande på grund av dess sammansättning. Den består av triptein, sojapepton, natriumklorid, dipotassiumfosfat och glukos.

Trypticasein sojakron sådd med en stam av Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 där pigmentproduktionen observeras. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

Den kan reproducera kliniskt viktiga patogena bakterier, inklusive de som är näringsmässigt krävande och anaeroba bakterier. Vissa opportunistiska och förorenande svampar kan också utvecklas i denna miljö.

På grund av sin höga näringsförmåga har den hög känslighet för att upptäcka mikrobiell kontaminering, av denna anledning valdes den av USDA Animal and Plant Health Inspection Service för den mikrobiologiska analysen av vacciner.

Likaså uppfyller trypticasein sojabuljong kraven i de olika farmakopéerna (europeisk EP, japansk JP och nordamerikansk USP) för mikrobiologisk studie av produkter på industriell nivå, såsom kosmetika och livsmedel.

Å andra sidan är det värt att nämna att detta medium, trots dess stora användbarhet, är relativt billigt, vilket gör det prisvärt för de flesta mikrobiologiska laboratorier. Det är också mycket lätt att förbereda.

Grund

Triptein, pepton och glukos ger det viktiga näringsegenskaper för att göra det till ett idealiskt medium för snabb mikrobiell tillväxt.

På ungefär 6 till 8 timmars inkubation kan tillväxt redan ses i de flesta mikroorganismer. Men det finns långsamt växande stammar som kan ta dagar att växa.

Natriumklorid och dipotassiumfosfat fungerar som osmotisk balans respektive pH-regulator. Närvaron av tillväxt framgår av utseendet på grumlighet i mediet; om det inte finns någon tillväxt förblir mediet genomskinligt.

På grund av dess ljusa färg är det möjligt att observera produktionen av pigment, såsom den som visas på bilden i början av artikeln, vilket motsvarar det pigment som produceras av Pseudomonas aeruginosa.

Förberedelse

-Triptysein soja buljong

För att framställa tryptisk sojamjöl måste 30 g av det dehydratiserade kommersiella mediet vägas i digital skala. Sedan löses det i en liter destillerat vatten som finns i en kolv.

Blandningen får vila i 5 minuter och sedan tas den till en värmekälla för att lösa mediet. Det bör omröras ofta under kokning i 1 minut.

När den har lösts fördelas den i rör med lämplig storlek efter behov. Rör med bomullsproppar eller med Bakelite-lock kan användas. Därefter steriliseras rören med mediet i autoklaven vid 121 ° C under 15 minuter.

Mediets pH måste förbli vid 7,3 ± 0,2

Det bör noteras att färgen på det dehydratiserade odlingsmediet är lättbeige och bör förvaras mellan 10 och 35 ° C, på ett torrt ställe. Medan den beredda buljongen är ljus bärnstensfärgad och bör förvaras i kylskåp (2 till 8 ° C).

-Varianter av trypticasein sojabuljong

Modifierad trypticasein soja buljong kan framställas genom tillsats av gallsalter och novobiocin för att göra det selektivt för isolering av E. coli. Ett annat alternativ för samma ändamål är att framställa tryptikas soyabuljong kompletterat med vankomycin, cefixim och tellurit (2,5 ug / ml).

Å andra sidan kan mer glukos (0,25%) läggas till tryptisk sojabuljong när målet är att stimulera bildandet av biofilmer.

Använda sig av

Det är tillräckligt näringsrikt för att tillåta tillväxt av snäva eller snäva bakterier som Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp och Brucella sp, utan att behöva komplettera med blod eller serum.

På samma sätt kan vissa svampar utvecklas i denna buljong, såsom Candida albicans Complex, Aspergillus sp och Histoplasma capsulatum.

Vidare är detta medium under anaeroba förhållanden idealiskt för att utvinna bakterier som tillhör släktet Clostridium, såväl som icke-sporulerade anaeroba bakterier av klinisk betydelse.

Om 6,5% natriumklorid tillsätts kan den användas för tillväxt av Enterococcus och annan grupp D Streptococcus.

På forskningsnivå har det varit mycket användbart i olika protokoll, särskilt i studien av biofilm eller biofilmbildande bakterier. Det används också för att bereda den 0,5% Mac Farland-bakteriesuspension som är nödvändig för att utföra antibiogrammet med Kirby och Bauer-metoden.

I detta fall tas 3 till 5 kolonier med liknande utseende och emulgeras i 4-5 ml trypticasein sojabuljong. Den inkuberas sedan under 2 till 6 timmar vid 35-37 ° C och justeras därefter till den önskade koncentrationen med användning av steril saltlösning. Trypticasein sojakroppar bör inte användas från 18 till 24 timmars inkubation.

sås

Provet kan ympas direkt eller rena kolonier tagna från selektiva medier kan subkultureras. Inokulatet ska vara litet för att inte molna mediet innan inkubation.

Normalt inkuberas den vid 37 ° C i aerobios i 24 timmar, men dessa förhållanden kan variera beroende på vilken mikroorganism som söks. Det kan också inkuberas under anaeroba förhållanden vid 37 ° C under flera dagar om det behövs. Till exempel kan snabbväxande eller snäva mikroorganismer inkuberas i upp till sju dagar.

I den mikrobiologiska analysen av farmaceutiska ämnen - såsom vacciner - är protokollen strängare. I dessa fall kastas inte buljongen utan tillväxt förrän den når 14 dagar av kontinuerlig inkubation.

QA

Från varje framställd batch bör 1 eller 2 oinokulerade rör inkuberas för att visa deras sterilitet. Det måste förbli oförändrat.

Kända stammar kan också planteras för att bedöma deras beteende. Bland de stammar som kan användas är:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcascia Ps.

I alla fall måste tillväxten vara tillfredsställande under lämpliga atmosfär- och temperaturförhållanden för varje mikroorganism.

begränsningar

-Fermenteringen av glukos orsakar en sänkning av pH-värdet för mediet på grund av syraproduktionen. Detta kan vara ogynnsamt för överlevnaden av vissa mikroorganismer som är känsliga för surhet.

-Det rekommenderas inte för upprätthållande av stammar, eftersom bakterier utöver surhet tappar näringsämnen efter några dagar med den påföljande ansamlingen av giftiga ämnen som gör miljön omöjlig.

-Du måste arbeta med att ta hand om alla sterilitetsprotokoll, eftersom buljonerna lätt förorenas.

-Efter beredning av trypticasein sojakronor bör du inte försöka överföra buljong till ett annat sterilt rör, eftersom denna typ av manöver är mycket sårbar för kontaminering.

referenser

1. Cona E. Villkor för en bra känslighetsstudie med agar-diffusionstest. Rev Chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Finns på: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Triptein soja buljong. 2015. Finns på: britanialab.com
3. MCD-laboratorium. Trypticasein Soy buljong. Finns på: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Triptyk Soy buljong. Finns på: foodafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Utvärdering av den magnetiska immunoseparationstekniken för utvinning av Escherichia coli O157: H7 i mjölkkrämer. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Finns på: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmbildning i Staphylococcus aureus isolat enligt antimikrobiell känslighet och kliniskt ursprung. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Finns på: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolering av Escherichia coli O157: H7 i dubbel syfte Bovine faeces Prover från Miranda kommun, Zulia State, Venezuela. Pastor Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Finns på: scielo.org