TETRATHIONATE BULJONG: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den tetrationat buljong eller buljong TT är en selektiv flytande odlingsmedium för anrikning och återvinning av släktet Salmonella-stammar. Det skapades av Müeller och modifierades senare av Kauffmann, varför det finns de som kallar det Müeller-Kauffmann buljong.

Det ursprungliga mediet innehöll proteospeptoner, kalciumkarbonat och natriumtiosulfat. Kauffmann lade till sig gallsalter och skapade en annan modalitet med ljusgrönt. Dessa ämnen hämmar tillväxten av koliformer, vilket lämnar mediet fritt för utveckling av patogena bakterier, i detta fall Salmonella.

Tillsätt jodjodlösningen till tetratjonatbuljongen. Källa: Manuel Almagro Rivas

Modifieringen var mycket framgångsrik eftersom den avsevärt ökade mediets känslighet. Av denna anledning är det för närvarande användbart för att leta efter Salmonellas i alla typer av prov, men särskilt för fast eller flytande avföring och mat.

Dess förberedelse består av två faser; Det kommersiella mediet är en bas för att framställa tetratjonatbuljongen, och därefter tillsätts todratjonatet en joderad jodlösning för att komplettera mediet.

American Public Health Association (APHA) rekommenderar användning av Tetrathionate-buljong kompletterat med ljusgrönt för anrikning av prover för Salmonella, eftersom det är mer selektivt än Tetrathionate-buljong och Selenite-buljong.

I allmänhet är tetratjonatbuljong idealisk när förekomst av bakterier av släktet Salmonella misstänks i små mängder eller när de missbrukas av exponering för hämmande ämnen eller genom industriella processer som minimerar deras livskraft.

Grund

De närvarande peptonerna motsvarar pankreasdjäsningen av kasein och peptisk uppslutning av djurvävnad. Dessa ger källan till kol, kväve och allmänna näringsämnen för bakterietillväxt.

Natriumtiosulfat reagerar för sin del med den joderade lösningen för att bilda tetrationionat. Detta hämmar tillväxten av koliformer och gynnar utvecklingen av bakterier som innehåller enzymet tetrationionatreduktas, bland dem är släktet Salmonella, men också Proteus.

Galgesalter fungerar också som ett hämmande ämne för de flesta Gram-positiva och vissa Gram-negativa bakterier (coliforms).

Kalciumkarbonat absorberar de giftiga ämnena som genereras genom sönderdelningen av tetrationat, som bildar svavelsyra. I detta avseende neutraliserar kalciumkarbonat surhet och håller mediets pH stabilt.

När det gäller den ljusgröna modaliteten, ökar detta ämne den selektiva kraften hos tetrationatbuljong genom att hämma andra mikroorganismer än Salmonella-släktet.

Förberedelse

-Tetrationerad buljong

Jodjodlösning

Att väga:

• 6 gram jod.
• 5 g kaliumjodid.

Kaliumjodiden upplöses i ungefär 5 ml sterilt destillerat vatten, varefter joden tillsätts lite för lite medan blandningen upphettas. Efter det att det är helt löst fyller du upp till märket med sterilt destillerat vatten tills det når en slutlig volym på 20 ml.

Basmedium för tetrationat buljong

Väg 46 gram av det dehydratiserade mediet och suspendera i 1 liter sterilt destillerat vatten. Blanda och värm tills den är helt upplöst, det kan koka bara i några minuter. Autoklavera inte. Mediets bas får svalna till ungefär 45 ° C och vid den tiden tillsätts 20 ml av den joderade lösningen.

Efter tillsats av den joderade lösningen till mediet bör den användas omedelbart. Gör så här om du inte vill använda hela blandningen:

10 ml av basmediet fördelas i rör, och endast till de som ska ympas med prover tillsätts 0,2 ml av den joderade lösningen.

De som inte kommer att användas kan fortfarande förvaras i kylen, men eftersom mediet inte är steriliserat är idealet att förbereda den exakta mängden som behövs.

Färgen på mediet innan tillsats av den joderade jodlösningen är mjölkvit med en vit fällning och efter tillsats är den brun med en tät fällning. Den observerade fällningen är normal och motsvarar kalciumkarbonat som inte upplöses. Mediets slutliga pH är 8,4 ± 0,2.

-Tetrationerad buljongvariant med ljusgrönt

För att framställa den ljusgröna tetrationjonatbuljongen, utförs alla stegen ovan beskrivna, men dessutom tillsätts 10 ml av den ljusgröna lösningen framställd med 0,1% till blandningen.

Lysande grönt

Denna lösning bereds på följande sätt:

Väg ut 0,1 g ljusgrönt och häng i 100 ml destillerat vatten. Värm till kokning för att uppnå total upplösning. Förvara i bärnsten flaska.

Använda sig av

För avföringsprover (avföringskultur) är protokollet enligt följande:

Inokulera 1 g fast avföring eller 1 ml flytande avföring i ett rör med 10 ml färdig att använda tetratjonatbuljong. Skaka kraftigt och inkubera aerobt vid 43 ° C i 6-24 timmar.

Därefter, ta en alikvot på 10 till 20 pl av buljongen och subkulturen i ett selektivt medium för Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, ljusgrön agar, Hektoen enterisk agar, bland andra.

Parallellt bör selektiva medier för Salmonella inokuleras med direktprovet (avföring) utan anrikning. För prov i rektalvattpinnar, töm det insamlade materialet i röret och fortsätt enligt ovan.

För livsmedelsprover, väga 10 g fast mat eller 10 ml flytande mat och ympa en flaska med 100 ml färdig att använda tetratjonatbuljong. Fortsätt på samma sätt som beskrivits ovan, men inkubera vid 37 ° C.

Som framgår kommer förhållandet mellan provet och buljongen alltid att vara 1:10.

QA

Kända kontrollstammar kan användas för att testa odlingsmediet. De mest använda är ATCC-certifierade stammar.

Stammarna som ska användas är Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Utmärkt tillväxt förväntas för Salmonella-stammar, medan Escherichia coli kan ha svag eller regelbunden tillväxt, och Gram-positiva stammar (Enterococcus och Staphylococcus) hämmas helt eller delvis.

rekommendationer

-Eftersom detta medium inte hämmar tillväxten av Proteus, använder vissa laboratorier 40 mg / L novobiocin för att förhindra utvecklingen av denna mikrobiella stam. Antibiotikumet måste tillsättas innan jodlösningen.

-Efter beredning av mediet inklusive jodjodlösningen bör det inte ta mer än 2 timmar innan det ympats.

-Ved fördelning av mediet i rören måste blandningen kontinuerligt homogeniseras för att resuspendera den bildade fällningen.

-I mindre kontaminerade prover inkuberas tetratjonatbuljongen vid 35-37 ° C, och i starkt kontaminerade prover rekommenderas inkubering vid 43 ° C.

referenser

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionate buljongbas enligt Müeller-Kauffmann. Tillgänglig i:
2. BD-laboratorier. 2003. Tetrathionate Broth Base. Tillgänglig i:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate basbuljong. Tillgänglig i:
4. BBL Media. 2005. Beredda i rör för kulturen av Salmonella-arten.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Jämförelse mellan odlingsmedier av natriumselenit och natriumtetrionionat, båda inkuberade vid 37 ° C och 42 ° C under isolering av Salmonella spp från avföring hos bärare. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220