TIOGLYKOLLATBULJONG: SKÄL, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den tioglykolat buljong är ett medium berikat flytande konsistens. Det är känt av förkortningen FTM för dess förkortning på engelska Fluid Thioglycollate Medium. Det skapades av Brewer och modifierades 1944 av Vera, som lade kaseinpepton till det.

Detta medium har en låg oxidationsreduktionspotential, därför rekommenderas det inte för utveckling av strikta aeroba bakterier, men det är idealiskt för att återvinna fakultativa aeroba, strikta anaeroba och krävande mikroaerofila bakterier.

Tioglykollatbuljong utan indikator. Visar vaginal urladdning. Källa: Bobjgalindo

Den höga prestanda som observerats med detta medium i isolering och återhämtning av en mängd olika mikroorganismer har gjort det accepterat av USA: s Pharmacopeia (USP), av den officiella föreningen för jordbrukskemister (AOAC) och av den europeiska farmakopén ( EP).

Dessa organisationer rekommenderar det för sterilitetskontroll av farmaceutiska produkter och för anrikning av olika typer av prover.

Cado-tioglykolatet består av jästextrakt, könsbrittssmältning av kasein, vattenfri dextros, L-cystin, natriumklorid, natriumtioglykolat, resazurin och agar i liten mängd.

Det finns flera versioner av detta medium, bland dem är: tioglykollatbuljong med indikator, tioglykollatbuljong utan indikator, tioglykollatbuljong med indikator berikad med hemin och vitamin K _1, och tioglykollatbuljong med kalciumkarbonat.

Speciellt tjänar tioglykollatbuljongvarianan berikad med hemin och K-vitamin för att förbättra tillväxten av snäva anaerober, och tioglykollatbuljongvarianten innehållande kalciumkarbonat är användbar för att motverka syrorna som produceras under mikrobiell tillväxt.

Grund

Tioglykollatbuljong anses vara ett icke-selektivt anrikningsmedium eftersom det möjliggör tillväxt av de flesta icke-fastidiska bakterier. Näringsbehovet tillhandahålls av jästextraktet, bukspottkörteln och glukos.

Å andra sidan innehåller detta medium, trots att det är en buljong, en liten mängd agar; Detta innebär att den har en låg oxidationsreduktionspotential, på grund av att det bromsar inträde av syre på ett sådant sätt att syret minskar när det går djupare in i röret.

Det är därför detta medium är idealiskt för utveckling av fakultativa aeroba, mikroaerofila och strikta anaeroba bakterier, de senare 2 utan behov av att inkubera under dessa förhållanden. Samma medium reglerar mängden syre i mediet, då det saknas i rörets botten och i tillräcklig mängd på ytan.

På samma sätt fungerar tioglykollat ​​och L-cystin som reduktionsmedel, vilket hjälper till att förhindra ansamling av ämnen som är skadliga för bakterieutvecklingen, såsom peroxid. Dessutom innehåller dessa föreningar sulfhydrylgrupper (-SH-), vilket neutraliserar de hämmande effekterna av kvicksilverderivat, arsenikaler, bland andra tungmetaller.

Resazurin är för sin del en indikator på oxidreduktion. Detta ämne är färglöst när det reduceras och rosa när det oxideras. Det finns indikator- och icke-indikator-tioglykollatbuljongvarianter. Användningen kommer att bero på typ av prov och laboratoriets preferens.

Under tiden upprätthåller natriumklorid den osmotiska balansen i tioglykollatbuljongen och användningen av glukos i vattenfri form förhindrar överskott av fukt i det dehydratiserade mediet.

Förberedelse

Thioglycollate buljong med indikator

Väg ut 29,75 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i 1 liter destillerat vatten. Blandningen får stå i cirka 5 minuter. Ta till en värmekälla och rör om ofta tills den är helt upplöst.

Häll mediet i provrör och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Låt svalna före användning. Kontrollera det inbyggda huset för att bevara det. Vissa rekommenderar att de förvaras vid rumstemperatur på ett mörkt ställe, och andra i kylskåp som är skyddat mot ljus.

PH-värdet för det beredda mediet är 7,1 ± 0,2.

Färgen på det dehydratiserade mediet är ljust beige och det beredda mediet är ljusbärnstens med viss opalescens.

Tioglykollatbuljong med indikator berikad med hemin och K-vitamin

Det finns kommersiella medier som redan innehåller hemin och vitamin K ₁ , särskilt för odling av anaerober.

Om du inte har det anrikade mediet för anaerober kan du förbereda den grundläggande tioglykollatbuljongen. För detta _tillsätts 10 mg heminhydroklorid och 1 mg vitamin K ₁ för varje liter medium. Men om blod eller serum tillsätts till tioglykollatbuljongen är tillsats av hemin eller vitamin K inte nödvändigt.

Tioglykollatbuljong med kalciumkarbonat

Det kommer kommersiellt och förbereds enligt instruktionerna på skäret.

Tioglykollatbuljong utan indikator

Detta har samma sammansättning av det basiska tioglykollatet, men innehåller inte resazurin.

Väg 30 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Resten av beredningen är densamma som beskrivs i tioglykollatbuljongen med indikator.

Använda sig av

Tioglykollatbuljong är användbart för anrikning av kliniska prover, särskilt de från sterila ställen. Det är också användbart för icke-kliniska prover, såsom kosmetika, läkemedel etc.

För inokulering av vätskeprover (såsom CSF, synovialvätska, bland andra), centrifugeras proverna först och sedan tas två droppar av sedimentet och placeras i tioglykollatbuljongen. Inkubera vid 35 ° C i 24 timmar. Om det inte finns någon tillväxt (grumlighet) i denna tid, inkuberas den upp till högst sju dagar.

Om provet tas med en vattpinne, inokuleras odlingsmediet först i plattor och slutligen införs vattpinnen i buljongen, den utskjutande delen delas och röret täcks, vilket lämnar vattpinnen inuti. Inkubera vid 35 ° C i 24 timmar, maximalt 7 dagar.

För fasta prover homogeniseras i fysiologisk saltlösning (SSF) och inokuleras sedan tioglykollatbuljongen med 2 droppar av suspensionen.

Det kan ibland användas som transportmedium för prover där man misstänker strikta anaerober eller som en anrikningsbuljong.

Tioglykolatbuljongvarianten med kalciumkarbonat används för att upprätthålla kontrollstammar under längre tid, eftersom den har förmågan att neutralisera syrorna som produceras genom användning av glukos; Dessa syror är giftiga för vissa bakterier.

Tillväxten i tioglykollatbuljongen observeras av mediets grumlighet. Det rekommenderas att utföra en Gram-fläck och därefter subkultur i icke-selektiva och selektiva medier, beroende på typ av prov och de misstänkta mikroorganismerna.

QA

För sterilitetskontroll rekommenderas det att inkubera en eller två buljonger utan ympning. Det förväntade resultatet är en klar buljong utan färgförändring, även om det är normalt att se en svag rosa färg på rörets yta.

För kvalitetskontroll bör mellan 10 - 100 CFU certifierade kontrollstammar ympas, såsom Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCCes 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubera vid 30-35 ° C i aerobios i 24 timmar upp till maximalt 3 dagar, eftersom dessa mikroorganismer växer snabbt.

I alla fall förväntas god utveckling, med undantag för Micrococcus luteus och Bacillus subtilis, där det kan vara måttlig utveckling.

För kvalitetskontroll av tioglykollatbuljong berikad med hemin och vitamin K ₁ kan kontrollstammarna Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 och Bacteroides fragilis ATCC 25285 användas. Det förväntade resultatet är tillfredsställande tillväxt.

rekommendationer

-Ved ett tillfälle kan man observera att ytan på tioglykollatbuljongen med indikator blir rosa; Detta beror på oxidation av mediet. Om den rosa färgen täcker 30% eller mer av den totala buljongen, kan den värmas i ett vattenbad i 5 minuter, kylas igen och användas.

Detta kommer att ta bort det absorberade syret och återföra mediet till sin ursprungliga färg. Denna procedur kan endast göras en gång.

-För att förbättra tillväxten av aeroba bakterier, inkubera med locket något löst. Det är emellertid föredraget att använda för detta ändamål en infusionsbuljong för hjärna eller soybuljong med tryptikas för korrekt utveckling av strikta aerober.

-Frysningen av mediet eller överhettning bör undvikas, eftersom båda förhållandena skadar mediet.

-Direkt ljus skadar odlingsmediet, det måste förvaras skyddat från ljus.

referenser

1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP med indikator. 2015. Finns på: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Thioglycollate buljong. Finns på: quios.com.co
3. Laboratorier BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Finns på: bd.com/Europe
4. BBL-media beredda i rör för odling av anaeroba mikroorganismer. Tioglykollat ​​media. 2013. Finns på: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.