KROMATOGRAM: VAD DET ÄR FÖR OCH TYPER - KEMI - 2025

Den kromatogrammet är en tvådimensionell grafisk post erhållen på ett absorberande medium, som visar separation av ämnen med hjälp av kromatografi. Ett synligt mönster, toppar eller fläckar, bildas på kromatogrammet, vilket återspeglar den fysiska separationen av komponenterna i en blandning.

Den lägre siffran är ett kromatogram med tre toppar, A, B och C, av tre komponenter i provet separerade med kromatografi. Det observeras att var och en av de tre topparna har en annan höjd och plats på kromatogrammets tidsaxel.

Typisk kromatogram. Källa: Heliagon, från Wikimedia Commons

Ordinat- eller Y-axeln registrerar information om signalintensitet (i millivolt mV i detta fall). Representerar registreringen, beroende på detektor, av någon fysisk egenskap hos ämnet eller blandningens separata komponent.

Toppens höjd är proportionell mot koncentrationen av komponenten separerad från provet i ett optimalt system. Således är det till exempel lätt att visualisera att komponent B är i en högre andel än A och C.

På abscissen eller X-axeln representeras retentionstiden för komponenterna i provet eller blandningen. Det är tiden som går från injektionen av provet tills det slutar, eftersom det är annorlunda för varje ren substans.

Vad är ett kromatogram för?

Det är den sista posten för hela kromatografiprocessen. Parametrar som är av analytiskt intresse erhålls från det. Detta kan erhållas som en elektronisk fil, ett tryckt histogram eller på processmediet; på papper, till exempel.

Y-axeln genereras av signal- eller intensitetssvardetektorer, såsom spektrofotometrar. En optimal analys av tiden, egenskaperna hos de erhållna topparna eller fläckarna är väsentlig; storlek, plats, färg, bland andra aspekter.

Analyserna av kromatogrammen kräver i allmänhet kontroller eller standarder, ämnen med känd identitet och koncentration. Analysen av dessa kontroller gör det möjligt att fastställa i jämförelse med de karakteristiska proverna av komponenterna i det undersökta provet.

I kromatogrammet kan du observera och analysera hur separationen av komponenterna i en blandning genomfördes. Dess optimala studie gör det möjligt att identifiera ett ämne, demonstrera dess renhet, kvantifiera mängden ämnen som finns i en blandning, bland andra aspekter.

Informationen som utvinns kan vara av kvalitativ karaktär; till exempel när ämnen identifieras och deras renhet fastställs. Kvantitativ information hänför sig till bestämningen av antalet komponenter i blandningen och koncentrationen av den separerade analyt.

Identifiering av ämnen

Genom att analysera resultaten av kromatogrammet kan olika ämnen identifieras genom att jämföra retentionstiderna med kända ämnen. Det kan observeras om ämnena som studeras rör sig på samma avstånd om de har samma tid som de kända ämnena.

Till exempel kan kromatogrammet detektera och identifiera metaboliter av läkemedel som stimulanter och steroider i idrottsutövare. Det är ett viktigt stöd i studien och forskningen av vissa metaboliter producerade av genetiska störningar hos den nyfödda.

Kromatogrammet underlättar detektering av halogenerade kolväten som finns i dricksvatten, bland andra ämnen. Det är viktigt i laboratorieanalysen för kvalitetskontroll, eftersom det gör det möjligt att upptäcka och identifiera föroreningar som finns i de olika produkterna.

Klassificering av ämnets renhet

I ett kromatogram kan du skilja mellan rena och orena ämnen. En ren substans skulle producera en enda topp på kromatogrammet; En oren substans skulle ge två eller flera toppar.

Genom att korrekt justera förhållandena under vilka kromatografi utförs kan två substanser förhindras från att bilda en enda topp.

Kvantifiering av ämnen

Genom att analysera toppområdet för kromatogrammet kan koncentrationen av provkomponenterna beräknas.

Därför är topparean proportionell mot mängden ämne som finns i provet. Dessa kvantitativa data erhålls i mycket känsliga system, till exempel de som genereras genom gas- eller vätskekromatografi, till exempel.

typer

En av klassificeringarna av kromatogram är nära besläktade med de olika typerna av kromatografi, som genererar motsvarande kromatogram.

Beroende på driftsförhållanden kommer detektorerna, bland andra aspekter, kromatogrammet att variera i dess innehåll och kvalitet.

Kromatogram på papper eller tunt lager

Kromatogrammet kan genereras direkt på papper eller tunt lager, direkt visar fördelningen eller fördelningen av komponenterna i provet.

Det är mycket användbart för att separera och studera färgade ämnen som har naturliga pigment, såsom klorofyll. Det kan underkastas utvecklingsprocesser om ämnena inte har naturlig färg och det är användbart för kvalitativa studier.

Kromatogram genererade av detektorer

Kromatogrammet kan också erhållas med användning av en detektor som registrerar kromatografins svar, utsignal eller slutlig signal. Som nämnts tidigare är denna detektor vanligtvis en spektrofotometer, en masspektrometer, automatiska sequencers, elektrokemikalier, bland andra.

Kromatogram genererade i kolumner, oavsett om det är gaser eller vätskor, liksom de med hög upplösning i tunna lager, använder detektorer.

Beroende på typ av detektor kan kromatogrammet klassificeras som differentiellt eller integrerat, beroende på detektorens svarform.

Differentialkromatogram

En differentiell detektor mäter kontinuerligt svarssignalen från kromatogrammet, medan integrerade detektorer kumulativt mäter motsvarande signal.

Ett differentiellt kromatogram är ett kromatogram erhållet av en differentiell detektor. Dessa detektorer inkluderar till exempel spektrofotometrar och detektorer för förändringar i elektrisk konduktivitet.

Denna typ av kromatogram har visat resultatet av separationen av anjoner från ett prov, detekterat med indirekt fotometri. Samma resultat har också erhållits för studier av joner, till exempel med slutlig detektion med konduktimetri.

Differentialkromatogram. Källa: Pixabay

Den övre grafen visar exemplet på ett differentiellt kromatogram, erhållet med automatisk DNA-sekvens (deoxiribonukleinsyra). Grafen visar tydligt toppar med fyra färger, en färg för varje kvävebas i DNA.

Genom stöd av ett datoriserat program underlättas tolkningen av sekvensen för baserna i det analyserade DNA, liksom för mer komplexa analyser.

Integrerad kromatogram

Det integrerade kromatogrammet motsvarar det som erhålls av en integrerad detektor. Detta kromatogram visar resultatet från en enda komponent som studeras. Flera toppar erhålls inte som i differensen.

I det integrerade kromatogrammet erhålls en post med en form som beskrivs som ett steg. Denna form är den del av kromatogrammet som motsvarar mängden av en enda substans som kommer ut från kolonnen.

referenser

1. Bhanot, D. (2013). Hur man läser ett kromatogram? Återställs från: lab-training.com
2. Carey, FA (2006). Organisk kemi sjätte upplagan. Mc Graw Hill Publishing House
3. Kromatografi idag. (2014). Vad är ett kromatogram? Återställd från: chromatographytoday.com
4. Mathias, J. (2018). En nybörjarguide: Hur man tolkar gaskromatografi kromatografi resultat av massspektrometri. Återställd från: innovatechlabs.com
5. Spanish Society of Chromatography and Related Techniques. (2014). Kromatogrammet. Återställd från: secyta.es
6. Wikipedia. (2019). Papperskromatografi. Återställd från: wikipedia.org