XANTHOPROTEIN-REAKTION: SKÄL, FÖRFARANDE, ANVÄNDNING - KEMI - 2026

Den xanthoprotein reaktion är en kemisk procedur som används för att bestämma närvaron eller frånvaron av aromatiska aminosyror, såsom tyrosin och tryptofan, som kan vara i fri form eller utgör lösliga proteiner, peptider eller polypeptider.

Det har också använts för att upptäcka giftiga ämnen i blodet som innehåller en bensengrupp i deras struktur. Detta test är också känt som xantoprotein Becher-reaktionen.

Positiv xantoproteinreaktion Källa: Hämtad från videon: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Xantoproteinreaktionen använder koncentrerad salpetersyra, värme och ett neutraliserande alkali. Om lösningen förvandlas från gul till orange efter neutralisering av reaktionen, anses testet vara positivt. Den observerade färgningen beror på bildningen av kvävehaltiga föreningar härrörande från nitrifikationen av bensengrupper.

Om mängden totalt protein behöver kvantifieras, är det nödvändigt att använda andra proteinbestämningsmetoder, såsom Biuret.

Xantoproteinreaktionen används främst när ämnen analyseras vars kemiska sammansättning inte är känd. Denna reaktion är vanligtvis en del av en uppsättning tester som hjälper till att bestämma den kemiska sammansättningen av en viss substans eller extrakt. Det är därför det används allmänt av forskare.

Å andra sidan används Becher xantoproteinreaktion för att detektera fenoliska och indoliska ämnen i blodet, vilket gör det möjligt att förutsäga uppkomsten av nefropati, innan andra senare parametrar ökas.

Grund

Reaktionen detekterar i princip närvaron av bensen-gruppen, både i aminosyror, såväl som i proteiner och peptider. Salpetersyra verkar på bensenringen av aminosyror som har den och bildar fenoliska nitroföreningar.

Reaktionen behöver värme för att utföras, i allmänhet bildas en fällning som fördunklar mediet och gör det mjölkigt. Fällningen kan vara vit eller gul. Slutligen kräver det ett alkaliseringssteg som accentuerar färgen. För detta används en bas såsom 40% natriumhydroxid eller ammoniak.

Reaktionen kommer att tolkas som positiv om en stark gul färg observeras under uppvärmningsprocessen eller mörk orange när reaktionen alkaliseras. Aminosyrorna som det detekterar är främst tyrosin och tryptofan.

Xanthoprotein-reaktion. Källa: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

När det gäller fenylalanin, även om det är en aromatisk aminosyra, är bensenkärnan i denna aminosyra svårt att nitreras i en enkel reaktion, därför kommer den att avge antingen en negativ eller svag positiv reaktion.

I allmänhet kan xantoproteintestet kompletteras med Hopkins-Cole-testet, som används för att specifikt identifiera tryptofan. Om xantoproteintestet är positivt och Hopkins-Cole-testet är negativt utesluts närvaron av tryptofan i den lösningen, vilket pekar på närvaron främst av tyrosin. På samma sätt kan den också kompletteras med Millon-reaktionen för bland annat detektering av tyrosin.

Denna reaktion kan också användas på prover av blod, plasma eller desalbuminerat serum för diagnos av uremi eller njursvikt. I detta fall är det som eftersträvas detektering av toxiska ämnen (fenol och indol) som framställs från tarmens nedbrytning.

Dessa ämnen har bensengruppen och ger därför en positiv xantoproteinreaktion, även om den reagerande substansen varken är en aminosyra eller ett protein.

Bearbeta

- Xanthoprotein-reaktion för detektion av aminosyror med aromatiska grupper

Placera 1 ml av provet i ett rent, torrt provrör.

- Tillsätt 0,5 ml koncentrerad salpetersyra.

-Inkuber blandningen i ett vattenbad vid 70 ° C i 2 minuter. Tidigare förbereda vattenbadet vid den nämnda temperaturen.

- När du tar bort röret från vattenbadet är det möjligt att observera att lösningen har blivit mjölkaktig och har fått en viss gulaktig färg.

-Lösningen kyls genom att tappa kallt vatten vid botten av röret.

-Preparatet görs alkaliskt genom att långsamt tillsätta (droppe för droppe) en 40% -ig natriumhydroxidlösning tills det förändras färg.

-Om testet är positivt bildas en mörkorange ring vid vätskans gränssnitt.

-Om reaktionen är negativ kommer det inte att bildas någon färg.

- Xanthoprotein-reaktion för att upptäcka fenol- och indolämnen i blodet

-Dispensera 5 cc 20% triklorättiksyra på 5 cc venöst blod, plasma eller serum, varvid det senare är det mest angivna. Blanda väl och filtrera.

-Ta 2 ml av filtratet och blanda det med 0,5 ml salpetersyra. Sedan värms den till kokning, för detta placeras röret direkt över den ljusare lågan i 30 sekunder. Den kyls med vatten och 1,5 av 33% natriumklorid tillsättes.

Det tolkas på följande sätt:

-Negativt resultat: gulaktig färg.

-Positivt (+) citrongult resultat.

- (++) gyllengul.

- (+++) mörkgul till brun

Det kan också tolkas med hjälp av en referens Autenrieth kolorimetrisk skala, bestående av olika koncentrationer av kaliumdikromat. Detta framställs i 10 i 10 utspädningar från en 0,03874% stamlösning. Varje rör representerar en procentandel.

Tolkningsskalor

Det finns två tolkningsskalor som kallas forntida och moderna. De normala värdena är:

Gammalt bord: mellan 75 till 85%

Modernt bord: mellan 15 till 25%

Om provrörets färg är i mitten av två standardrör görs ett genomsnitt mellan de två mätningarna.

Kaliumdikromatstandardlösningen framställs enligt följande: 7,9 ml 10 N kaliumdikromat mäts och kompenseras till 100 ml i en volymkolv. Utspädningarna följs såsom visas i Autenrieth kolorimetriska tabellen.

Autenrieth kolorimetriskt bord. Källa: Vásquez A. Xanthoprotein-reaktion. Spansk klinisk tidskrift. 1949; 35 (5): 326-327. Finns på: Elsevier

Använda sig av

Användningen av xantoproteinreaktionen är en del av en uppsättning biokemiska tester som hjälper till att känna till den kemiska sammansättningen av någon okänd substans. Detta test bidrar till den kemiska analysen att detektera proteiner som innehåller bensengrupper i deras struktur.

Denna reaktion används ofta av forskare i olika studier av ämnen av intresse.

I detta avseende använde Vásquez-Jorge och kollaboratörer denna och andra reaktioner för att undersöka proteininnehållet i vätskor extraherade från mangroveströn (Crassostrea rhizophorae).

På samma sätt använde Rojas et al. (2009) en serie tester, inklusive xantoproteinreaktionen, för att analysera glykomakropeptider i ricotta vassleutfall.

Å andra sidan modifierades Becher xantoproteinreaktionen av Volhard för att användas för andra ändamål. I det här fallet för detektion av fenol- och indolämnen som kan stiga mycket tidigare (veckor eller månader) innan nivåerna av urea och restkväve i blodet ökar.

Detta giftiga avfall bildas av matens tarmförbränning.

Dessa ämnen ackumuleras i blodet när de inte elimineras korrekt, därför kan ett positivt xantoproteintest förutsäga det tidiga början av nedsatt njursvikt eller ett tillstånd av uremi.

Beroende på färgens intensitet kan du bestämma hur avancerad den är. I detta fall är testet kvantitativt.

Hos friska människor ger detta test en svag gul färg, vilket motsvarar de normala nivåerna av tryptofan och tyrosin som kan finnas i blodet.

Även hos njurpatienter är xantoproteinreaktionen starkt positiv på grund av förekomsten av följande ämnen: fenol, indol, paracresol, aromatiska oxysyror, bland andra.

Försiktighetsåtgärder

Detta test måste utföras av utbildade proffs. Alla biosäkerhetsföreskrifter måste beaktas, eftersom de reagenser som används är frätande syror och baser.

Om några droppar salpetersyra faller på huden eller på naglarna, blir de gula, eftersom båda strukturerna innehåller proteiner. Dessutom orsakar det hud och slemhinnor allvarliga brännskador.

Om hudkontakt uppstår bör protokollet som följer vara att tvätta området omedelbart med tvål och vatten i cirka 20 minuter.

Om det stänk i ögonen ska det tvättas med mycket färskt vatten för att försöka hålla ögonen öppna.

referenser

1. "Xanthoprotein-reaktion" Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2 september 2019, 17:49 UTC. 21 okt 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Fysikokemisk karaktärisering och proteininnehåll i vätskeextrakt av mangrove-ostron (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Finns i Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Isolering och prestanda av GMP genom utfällning av vassle med triklorättiksyra. Ligt. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Finns på: ve.scielo.
4. Vásquez A. Xanthoprotein-reaktion. Spansk klinisk tidskrift. 1949; 35 (5): 326-327. Finns på: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Becher och Andrewes reaktioner på urinoperationer. Urologiservice på det spanska sjukhuset. Argentinsk tidskrift för urologi 395-404