Rose Bengal är ett laboratorietest baserat på en antigen-antikroppsreaktion för diagnos av brucellos. Tekniken möjliggör detektion av specifika antikroppar mot Brucella abortusbakterien i humana serumprover. Resultatet kan rapporteras kvalitativt eller semikvantitativt.
Den kvalitativa formen uttrycker om patienten är positiv eller negativ för testet, det vill säga om det finns antikroppar eller inte. Under tiden rapporteras den semikvantitativa rapporten i IU / ml och indikerar ungefärlig mängd närvarande antikroppar. Det bör noteras att antikroppar endast produceras om patienten har varit i kontakt med mikroorganismen.
Rose Bengal-reaktion i en agglutineringsplatta. Källa: hämtad från videon https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
På grund av dess stora enkelhet, höga känslighet och specificitet är det en av de seroagglutinationstekniker som mest används inom medicinen som ett första test för diagnos av denna sjukdom.
Vissa forskare har jämfört effekten av Rose Bengal-testet med andra tekniker, såsom seroagglutination (feberantigen) och har observerat att även om det finns god korrelation såg de isolerade fall där det febila antigenprovet var negativt och Rose de Positiv flare.
Skillnaden som erhölls berodde på det faktum att dessa patienter hade en underklass av IgG-antikroppar mot Brucella abortus med bättre bindningskapacitet vid surt pH, därför kunde de reagera med Rose Bengal-reagenset men inte med det med feberliga antigener.
I detta avseende har de föreslagit att reagensen enligt den febila antigentekniken modifieras till ett surt pH så att de kan upptäcka denna typ av fall.
Grund
Rose Bengal Reagent består av en antigen suspension. Den består av S99-stammen av Brucella abortus, utspädd i en sur laktatbuffert (pH 3,6), plus fenol och Rose Bengal-färgämnet.
Därför är det i provet som söks anti-Brucella-antikroppar, om dessa är närvarande kommer de att reagera med reagensantigenet och en makroskopiskt synlig agglutineringsreaktion kommer att observeras. Testet detekterar antingen IgM-antikroppar eller IgG-antikroppar.
Detta innebär att den kan upptäcka sjukdomen både i dess akuta stadium där IgM-antikroppar råder eller i dess kroniska stadium där IgG-antikroppar dominerar.
Detta representerar en fördel eftersom det ökar känsligheten hos testet, men samtidigt är det en nackdel eftersom det inte skiljer mellan ett steg och ett annat, eftersom reaktionen med IgM- och IgG-antikroppar är identiska.
Testet måste alltid utföras tillsammans med en negativ kontroll och en positiv kontroll. Den negativa kontrollen innehåller djurserum utan antikroppar och den positiva kontrollen innehåller serum av animaliskt ursprung med 50 IE / ml anti-Brucella antikroppar.
Använda sig av
Brucellos är en allvarlig sjukdom som tenderar att vara kronisk och farlig, så det är mycket viktigt att den diagnostiseras tidigt. Det är en zoonos och människor kan smittas genom direktkontakt med förorenat material, varav de mest utsatta människorna är veterinärer och djurskötare.
Infektion kan också uppstå genom att äta infekterat rått kött, bland andra infektionsformer.
Denna sjukdom attackerar lokalt eller systemiskt. Den systemiska formen är den allvarligaste, eftersom olika organ kan påverkas, inklusive retikulum endotelialsystem (lever, mjälte, benmärg), hud (cellulit och lymfadenopati), andningsorgan (lunginflammation), muskel- och skeletsystem (artrit, sacroiliitis och spondylitis), bland andra.
Rose Bengal-testet är en mycket användbar teknik för att utföra en initial screening, eftersom den är mycket billig, enkel att använda och har stor specificitet och känslighet.
Fall av falska negativa och falska positiva effekter är mycket sällsynta och kan förekomma hos personer med mycket låga antikroppstitrar (<25 IE / ml) eller extremt höga (> 1000 IE / ml).
Bearbeta
material
-Rose Bengal Kit
-Agglutination platt vit bakgrund
-50 ul pipett
-Rotator (valfritt)
-Virvel
Teknik (kvalitativ metod)
Kommersiella Rose Bengal-kit levereras med reagens som är färdiga att använda.
-Temperera reagensen innan du börjar arbeta.
-Agglutinationsplattorna har cirklar ritade, var och en för ett annat prov. Använd 3 cirklar, den första för den negativa kontrollen, den andra för provet och den tredje för den positiva kontrollen.
-Sätt en droppe eller 50 pl av kontrollerna och provet i motsvarande cirkel.
-Blanda Rose Bengal-reagenset med en virvel. Placera en droppe bredvid de tidigare placerade.
-Blanda med tandpetare av trä (använd en för varje prov eller kontroll). Gör cirkulära rörelser och sprida så att du täcker hela cirkeln.
Källa: bilder tagna från Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Redigerad bildlayout.
-Sätt plattan på en automatisk rotator vid 80 till 100 varv / min eller rotera manuellt i 4 minuter. Läs beviset i slutet av denna tid.
-Verifiera att kontrollerna gavs som förväntat. Jämför testprovets reaktion med kontrollerna. Rapportera som positiv om agglutination observeras och som negativ om det inte finns någon agglutination.
Ett positivt test indikerar att patienten har en mängd som är lika med eller större än 25 IE / ml antikroppar mot Brucella.
Tolkning av en positiv (med agglutination) och negativ (utan agglutination) reaktion. Källa: Citrulline. Redigerad bild.
Teknik (semi-kvantitativ)
Om provet i den kvalitativa reaktionen är starkt positivt kan det semi-kvantifieras. För detta görs seriedubbla utspädningar av provet med fysiologisk saltlösning. Proceduren som tidigare beskrivits utförs med varje utspädning.
Det tolkas också genom att observera agglutinationen makroskopiskt. Resultatet blir titer för den högsta utspädningen där ett positivt resultat observerades.
För att beräkna ungefärligt värde på anti-Brucella antikroppar används följande formel:
25 IE / ml x reaktionstiter = IU / ml
Exempel, om en patient i det semikvantitativa testet testar positivt vid utspädningen ½, ¼ och 1/8 och börjar vara negativ från 1/16-utspädningen och framåt, betyder detta att patienten har en titer på 8 .
Tillämpa formeln:
25 IE / ml x 8 = 200 IE / ml
QA
-Satserna har ett utgångsdatum och det måste respekteras. Bör inte användas om reagenset har gått ut.
-Säkerställ att reagenset inte innehåller fasta partiklar under användning, eftersom det är ett tecken på försämring.
- Håll mellan 2 och 8 ° C.
-Fryst inte, denna handling skadar reagenset omedelbart.
- Utför alltid testet tillsammans med de negativa och positiva kontrollerna.
-Tekniken tolererar serumprover med en viss grad av lipemi och hemolys, men det rekommenderas inte att använda överdrivet lipemiskt och hemolyserat sera, båda förhållandena förändrar testresultaten.
-Sätt alltid reagens till rumstemperatur innan analysen påbörjas.
-Tolk inte reaktioner som tar längre tid än den rekommenderade tiden, eftersom detta genererar rapporten om falska positiver, eftersom reagenset efter en viss tid faller ut, vilket simulerar en positiv reaktion.
-Tekniken är 100% känslig och har en specificitet på 98%.
-Efter en semikvantifiering av 1000 IE / ml finns möjligheten att observera en prozoneffekt (falskt negativt på grund av överskott av antikropp jämfört med mängden antigener).
referenser
- Rubio M, Barrio B och Díaz R. Värde av Rosa de Bengala, Coombs och motimmuno-elektrofores test för att diagnostisera fall av mänsklig brucellos där serumagglutination är negativ. Institutionen för mikrobiologi. Clinical Microbiology Service. University Clinic. University of Navarra. 406-407. Finns på: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellos". Wikipedia, den fria encyklopedin. 6 dec 2019, 14:37 UTC. 18 dec 2019, 18:09 sv.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016. Finns på: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Pastor Peru. Med. Exp. Public Health 1997; 14 (1): 63-66. Finns på: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinisk, serologisk och polymeras kedjereaktion uppföljning av en familj med brucellos. Rev Chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Finns på: scielo.conicyt.