SAFRANIN: EGENSKAPER, ANVÄNDNING, TEKNIKER, TOXICITET - KEMI - 2025

Den safranin är en meriquinoide färgämne, uppkallad efter sin kemiska struktur som har två bensenoida ringar och av 2 quinoid ringar, den senare är de som ger den röda färgen.

Det kallas också dimetylsafranin eller basisk röd 2 i sin korta form, eftersom dess vetenskapliga namn är 3,7-diamino-2,8-dimetyl-5-fenyl-fenaziniumklor-dimetylsafranin och den kemiska formeln är C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Kemisk struktur för safranin som indikerar bensenoid- och kinoidringar / vattenlösning av safranin. Källa: NEUROtiker redigerad av MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Det finns en variant som kallas trimetyl-safranin men det finns ingen signifikant skillnad mellan de två substanserna.

Safranin är ett monokromatiskt färgämne och är beroende på den kemiska formelens egenskaper en positivt laddad substans. Därför har det en affinitet för negativt laddade strukturer. Dessa strukturer är färgade röda.

Denna egenskap ger det användbarhet i många histologiska tekniker att färga olika cellstrukturer, både av eukaryota och prokaryota organismer.

Safranin används som kontrastfärgämne i viktiga och välkända tekniker för rutinmässig användning i bakteriologi. Dessa tekniker är: Gram-Hucker-fläck, Schaeffer Fulton-fläck för sporer eller färgning av bakteriekapslar, bland andra.

egenskaper

Färgen på saffran (ett krydda som erhållits från stigmas av Crocus sativus-blomman) var inspirationen att namnge detta färgämne. Från termen saffran kommer namnet på safranin. Detta beror på den stora likheten mellan saffranens färg och färgen som detta färgämne ger.

Safranin finns som kristaller eller pulver, varvid båda presentationerna är lösliga i vatten. Safranin-färgämnet är luktfritt. Fläckar strukturer röd. Strukturer som lockar safraninfärgning kallas safranofiler.

Strukturellt är safranin komplex, det har två bensenoidringar i ändarna och i mitten finns de två quinoidringarna där N ⁺ katjonen finns . I mitten av strukturen är det system som ansvarar för att tillhandahålla färgen. På grund av denna egenskap klassificeras denna färgämne inom kategori II.

Använda sig av

Safranin används för att färga olika strukturer. Speciellt framhäver Kulchitsky-cellerna som finns i mag-tarmkanalen, även kallad enterokromaffinceller.

Den kan färga mikroorganismer som tillhör Rickettsiaceae-familjen. På samma sätt används det i olika tekniker, såsom Koster-metoden, en modifierad som används för att färga bakterier av släktet Brucella.

Å andra sidan används safranin i Schaeffer Fulton sporefärgningsteknik och i Gram-Hucker-färgning. I båda teknikerna fungerar safranin som ett kontrastfärgämne.

I det första tar sporerna färgen på malakitgrön och resten av strukturerna är röda av safranin. I den andra fasen förlorar de Gram-negativa bakterierna färgen på den violetta kristallen i missfärgningssteget, därför är safranin den som färgar de Gram-negativa bakterierna röda.

Dessutom används safranin i bakteriologi för att framställa Brucella agarmedier med en utspädning av safranin 1: 5000. Detta medium tjänar till att differentiera Brucella suis-arten från resten av arten. Brucella melitensis och Brucella abortus växer på detta medium men B. suis hämmas.

Inom det agroindustriella fältet har safranin använts med 2,25% och utspädd 1:10 för att färga stamprover från sockerrörsanläggningen.

Denna växt påverkas vanligtvis av bakterien Leifsonia xyli subsp. xyli, vilket skadar växtens xylem. De färgade stjälkarna utvärderas för att bestämma xylemkärlernas funktion.

Tekniker inom området bakteriologi

Castañeda-fläck för färgning

En blod- eller vävnadssprut placeras i en buffertlösning (fosfatbuffert pH 7,6). Låt torka spontant och täck sedan med metylenblått i 3 minuter och försänk med safranin. Rickettsiae är färgade blå, i kontrast till den röda bakgrunden.

Koster fläck modifierad för

En smuts görs och flammas i tändaren för fixering. Därefter täcks det med en blandning av 2 delar mättat vattenhaltigt safranin med 3 delar 1 mol / L KOH-lösning under 1 minut. En tvätt utförs med destillerat vatten och försänkas med 1% karboliskt metylenblått.

Om provet innehåller bakterier av släktet Brucella blir de orange på en blå bakgrund.

Bakteriell kapselfärgning

En blandning av bakteriesuspension görs med indisk färg och safranin tillsätts. Under mikroskopet kommer en rödaktig gloria att visas runt varje bakteriekapsel med svart bakgrund.

Sporfärgning

En spridning görs med bakteriesuspensionen. Sedan fixeras den till värme. Det är täckt med 5% malakitgrönt och flammar ofta tills ånga släpps ut. Processen upprepas i 6-10 minuter. Slutligen tvättas det med vatten och försänkas med 0,5% safranin under 30 sekunder. Bacillerna fläckar röda och sporerna gröna.

Gram-Hucker-fläck

En smuts görs med bakteriesuspension och fixeras i värmen. Täck bilden med kristallviolett i 1 minut. Sedan placeras lugol som en mordantlösning i 1 minut. Därefter bleks det med acetonalkohol och slutligen försänkas med safranin i 30 sekunder.

Gram-positiva bakterier fläckar blåaktig violetta och Gram-negativa bakterier röda.

Vissa laboratorier har slutat använda Gram-Hucker-tekniken för att använda den modifierade Gram-Kopeloff-tekniken. I det senare ersätts safranin av basisk fuchsin. Detta beror på att safranin svagt fläckar arter av Legionella-, Campylobacter- och Brucella-släkten.

Tekniker inom histologi

Kulchitsky cellfärgning (enterokromaffiner)

Vävnadssektioner från mag-tarmkanalen är färgade med silverklorid. Därefter avfärgas den med natriumtiosulfat och slutligen försänkas med safranin.

Kulchitsky-celler kännetecknas av närvaron av svartbruna granuler.

Artrosfläck

Eftersom safranin har en positiv laddning binder det mycket bra till karboxyl- och sulfatgrupperna i glykosaminoglykaner. Dessa är en del av proteoglykanerna som utgör ledbrosket. I detta avseende kan man, vid färgning med safranin O, identifieras om det finns broskförlust eller inte.

Förlusten av broskvävnad kan mätas med hjälp av Mankin-skalan eller även kallas artrosskala.

Tekniken förklaras nedan: den histologiska sektionen nedsänks i ett bricka med Weigerts järnhematoxylinlösning, passeras sedan genom sur alkohol och tvättas med vatten.

Fortsätt färgningsprocessen genom att doppa arket i snabbgrönt, det tvättas med ättiksyra och nu nedsänks det i safranin O. För att avsluta processen dehydratiseras det med alkoholer i olika koncentrationer i stigande ordning. Det sista steget kräver xylen eller xylen för att provet ska klarläggas.

Objektglasen är konditionerade med Kanada balsam eller liknande som kan observeras under mikroskopet.

Med denna teknik är kärnorna färgade svarta, bengröna och brosket där proteoglykanerna är röda.

Fläck för identifiering av makroalger

Pérez et al 2003 föreslog en enkel och billig teknik för att färga makroalger. Proven bereds i histologiska sektioner med paraffin. Sektionerna fixeras med 1% glycerin, vilket gör att de kan torka fullständigt. Den placeras sedan i xylol för att avlägsna paraffinet.

Avsnittet rehydratiseras genom att passera det genom en serie fack som innehåller etanol i olika koncentrationsgrader (fallande ordning), i 2 minuter i var och en.

Därefter färgas det i 5 minuter med en 3: 1-blandning av 1% safranin med 1% toluidinblått, båda framställda med 50% etanol. Tre droppar pikronsyra sätts till blandningen, som fungerar som en mordant.

Sedan dehydratiseras genom att passera igenom alkoholbrickorna igen, men den här gången på stigande sätt. Slutligen sköljs det med xylol och provet bereds med Canada balsam för att observeras.

Giftighet

Lyckligtvis är safranin ett färgämne som inte utgör någon fara för dem som hanterar det. Det är ett ofarligt färgämne, det är inte cancerframkallande och det är inte brandfarligt.

Direkt kontakt med huden eller slemhinnan kan orsaka en lätt rodnad i området utan större komplikationer. För detta rekommenderas att tvätta det drabbade området med mycket vatten.

referenser

1. García H. Colorante safranina O. Tekniker inom hälsa, 2012; 1 (2): 83-85. Finns på: medigraphic.com
2. Gil M. Gram-fläck: fundament, material, teknik och användningsområden. 2019. Finns på: lifeder.com
3. Gil M. Spore-färgning: skäl, tekniker och användningsområden. 2019. Finns på: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, den fria encyklopedin. 7 mar 2017, 10:39 UTC. 3 aug 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Användbar färgningsteknik i den anatomiska tolkningen av Gracilariopsis tenuifrons och Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Finns på: scielo.org.
6. Aleika-kyrkan, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Förhållande mellan xylem-fartygens funktionalitet och närvaron av Leifsonia xyli subsp. xyli. Pastor Veg-skydd. 2007; 22 (1): 65-65. Finns på: scielo.sld