KOAGULASSTEST: SKÄL, PROCEDUR OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den koagulastest är en laboratorieteknik som används för att avslöja närvaron av enzymet koagulas. Detta enzym har egenskapen att koagulera plasma. Loeb 1903 var den första som beskrev detta enzym.

Detta test utförs på Gram-positiva, katalas-positiva cocci, vilket gör att Staphylococcus aureus-stammar kan skiljas från resten av stafylokockerna, eftersom det är den enda mikroorganismen av klinisk betydelse som producerar den.

Båda bilderna avslöjar ett positivt koagulasetest. Källa: Vänster bild: Philippinjl. Höger bild: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil.

I detta avseende hänvisas ofta medlemmar av familjen Staphylococaceae som testar negativt som koagulas negativa Staphylococcus.

Det finns några andra stammar än S. aureus som kan producera koagulas, såsom Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius och S. delphini.

De tre första är emellertid av klinisk betydelse på veterinärnivå och kan mycket sällan hittas som ett kausalt medel för infektioner hos människor, medan S. delphini endast finns i marina miljöer.

Dessutom är de lätt differentierade eftersom S. hyicus och S. intermedius inte jäsar mannitol och S. schleiferi spp coagulans inte jäsar maltos eller trehalos, medan S. aureus jäsar dessa kolhydrater.

Närvaron av koagulasenzym har kopplats till stammens virulens. Emellertid har denna teori föll isär, eftersom andra virulenta koagulasnegativa arter som kan producera betydande infektioner observeras.

Grund

tolkning

Agglutination inom 5-20 sek (starkt positivt test).

Variabel agglutination som sker mellan 20 sekunder och en minut (försenat positivt test).

Någon grad av agglutination efter en minut (tveksamt bevis). Det rekommenderas att upprepa testet eller bekräfta med rörmetoden.

Det finns ingen agglutination (negativt test).

Resultat med SSF. Det måste alltid ge negativt, om det ger positivt automatiskt blir testresultatet ogiltigt.

-Toag koagulas test

material

-Sterilt provrör

-Plasma

-Bath of Mary vid 37 ° C

Metod

Pipettera 0,5 ml plasma i ett 12 x 75 provrör med en steril pipett. Ladda platinoslingan med 2 till 4 rena kolonier för att studera från en fast kultur under 18 till 24 timmar och lösa upp i plasma blanda försiktigt och inkubera vid 37 ° C i 4 timmar.

Undersök röret under den första timmen utan att skaka det, bara luta det försiktigt. Om en koagel fortfarande inte syns kan den observeras var 30: e minut tills de fyra timmarna är slutförda. Om det fortfarande är negativt efter 4 timmar, kan det lämnas i upp till 24 timmar men vid rumstemperatur. Observera och rapportera resultatet.

Baserat på erfarenheter rekommenderar vissa mikrobiologer att använda 500 pl av en bakteriesuspension från en 18-timmars kultur i flytande medium för att utföra testet.

Det verkar ge snabbare och mer tillförlitliga resultat än när emulgerande kolonier från fasta medier, särskilt om humant plasma erhållet från blodbanken har använts.

Användningen av stammar från en buljong hjälper till att utspäda den eventuella närvaron av humana anti-stafylokockantikroppar i plasma som kan hämma verkan av koagulas.

tolkning

Om en koagel ses som omfattar all vätska (fullständig koagulering) eller koagulering som inte alls finns i den återstående vätskan (partiell koagulering) bör det betraktas som ett positivt test.

Om ingen koagel bildas, det vill säga suspensionen förblir homogen, är testet negativt.

-Coagulas-test med fibrinogen

Fibrinogen används på samma sätt som plasma och används för både glid- och rörtester. Fortsätt som beskrivet för plasma och tolka på samma sätt.

Använda sig av

Det används för att skilja Staphylococcus aureus från koagulas-negativa stafylokocker.

QA

Har färska kulturer av en S. aureus-stam tillgängliga som kan användas som en positiv kontroll. En S. epidermidis-stam är också tillgänglig som en negativ kontroll.

begränsningar

-Et positivt test bör inte lämnas i inkubation under 24 timmar, eftersom S. aureus producerar ett fibrinolysin som löser koagot.

-För ett pålitligt test bör färsk eller nykonstituerad plasma användas, liksom det är viktigt att använda färska bakteriekulturer (18 till 24 timmar). Detta undviker falska negativ.

-Testet måste utföras tillsammans med en negativ och positiv kontroll.

-Vissa fasta medier kan störa koagulasetestet. Det rekommenderas inte att använda kolonier från salt mannitolagar.

-Om citrerad plasma används rekommenderas att placera 5 enheter heparin per ml plasma för att undvika falska positiver. Detta beror på att vissa andra mikroorganismer än S. aureus kan bryta ner citrat och få plasman att koagulera. I detta fall rekommenderas det att göra ett Gram- och ett katalasstest.

-Det är viktigt i rörtestet att övervaka reaktionen var 30: e minut, eftersom det finns stammar av S. aureus som producerar höga koncentrationer av fibrinolysin och kommer att späda ut den nybildade koageln snabbt. Undvik falska negativ.

-Når du övervakar testet, undvik att skaka röret plötsligt, kan detta förstöra början på koagulbildningen som inte kommer att återställas senare, vilket kan orsaka falska negativ.

referenser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-Lab-laboratorier. Kanin koagulerar plasma. Finns på: pro-lab.com
5. "Koagulaspositiva." Wikipedia, den fria encyklopedin. 12 feb 2019, 04:23 UTC. 22 april 2019, 15:50 wikipedia.org.