VOGES-PROSKAUER TEST: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den Voges-Proskauer -testet är ett biokemiskt test som används för att hjälpa till vid identifieringen av bakterier som hör till familjen Enterobacteriaceae. Det är särskilt användbart för att differentiera stammar av Escherichia coli från Klebsiella och Enterobacter, bland andra.

Testet utförs i ett flytande odlingsmedium som heter Methyl Red - Voges Proskauer, bättre känt av förkortningen RM / VP. Detta medium består av buffrat polypepton, glukos, dipotassiumfosfat och destillerat vatten.

Metyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) kommersiellt medium / VP test positivt respektive negativt. Källa: Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, från Wikimedia Commons

Det nuvarande RM / VP-mediet är en modifiering av Clark och Lubs-mediet, som ursprungligen innehöll en lägre koncentration av peptoner och glukos. Således producerades mindre av vätejonen, som krävs för den positiva Voges-Proskauer-reaktionen.

Testet är baserat på mikroorganismens förmåga att använda glukos genom butylenglykolvägen och bilda en neutral slutprodukt som kallas acetoin, i närvaro av syre och ett alkaliskt pH.

I RM / VP-mediet, förutom att kunna avslöja Voges-Proskauer-testet, kan metylröda testet också avslöjas.

Grund

Voges-Proskauer testbasis

Pluripeptonerna som finns i mediet ger de väsentliga näringsbehovet för bakterietillväxt. För sin del är glukos huvudföreningen. Många bakterier har förmågan att metabolisera glukos och bilda pyruvinsyra.

Pyruvinsyra är en mittpunkt i glukosmetabolismen och därifrån kan varje mikroorganism ta olika vägar. Vissa kommer att bilda blandade syror, såsom mjölksyra, ättiksyra, myrsyra och bärnstenssyra, och andra kommer att bilda neutrala produkter som 2,3-butandiol.

Voges-Proskauer-testet visar mikroorganismens förmåga att bilda acetylmetylkarbinol (acetoin), en mellanprodukt av 2,3-butandiol under aeroba förhållanden.

Acetoin reduceras och bildar 2,3-butandiol, men denna reaktion är reversibel, därför bildas acetoin om 2,3-butandiol oxideras. Därför är syre viktigt.

Dipotassiumfosfat är bufferten som buffrar blandningen vid pH 6,9 ± 0,2.

Bevisdokumentation och tolkningsunderlag

För att demonstrera reaktionen måste en utveckling genomföras med hjälp av två reagens (Barrit-reagens), så kallade Voges A och Voges B.

Voges A är en 5% -ig lösning av a-naftol, och Voges B är en 40% kaliumhydroxidpreparat. Om kaliumhydroxid inte finns tillgängligt kan den ersättas med 40% natriumhydroxid.

Α-Naftol är en katalysator som ökar intensiteten på reaktionsfärgen, vilket gör testet känsligare. A-naftolen måste alltid tillsättas först och skaka röret så att mediet kommer i kontakt med syre. På detta sätt oxideras det närvarande acetoinet till diacetyl, och 2,3-butandiol oxideras för att bilda acetoin, vilket överförs till diacetyl.

Således kommer a-naftol att binda till diacetyl, som i sin tur har förenats med guanidinkärnan som finns i aminosyran arginin, den senare kommer från pluripeptoner.

För sin del är kalium- eller natriumhydroxid ansvarig för absorption av CO ₂ och reaktion med peptoner. Denna reaktion orsakar bildandet av en laxrosa färg, tydligt synlig efter att man skakat röret mycket väl.

Korrekta mängder diacetyl, pepton och α-naftol måste blandas för att färg ska kunna inträffa direkt. Om detta inte händer får röret vila i 15 minuter innan det tolkas.

Testet är vanligtvis positivt efter 2 till 5 minuter, när en svag rosa färg kan ses. Om den får stå i 30 minuter till 1 timme, blir färgens intensitet maximalt (intensivt rött).

Ett negativt test visas när buljongen blir gul. Efter en timme, om testet är negativt, kan en kopparfärg bildas som ett resultat av reaktionen av kaliumhydroxid på a-naftol.

Förberedelse

Medium MR / VP

Väg 17 g av det dehydratiserade odlingsmediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter. Värm till en koka så att den upplöses fullständigt. Servera 3 till 4 ml i rör och sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Det dehydratiserade odlingsmediet är beige i färg och det framställda mediet är ljusbärnstensfärgat.

Mediets slutliga pH är 6,9 ± 0,2.

Voges A-reagens

Väg ut 5 g a-naftol och upplös i 50 ml etylalkohol (absolut). Fortsätt sedan tillsätta etylalkohol tills den når 100 ml.

Voges B-reagens

Väg ut 40 g kaliumhydroxid och upplös i 50 ml destillerat vatten i en bägare. Glaset måste placeras i ett kallt vattenbad för att reglera temperaturen, för när beredningen är upplöst stiger temperaturen kraftigt.

Efter att lösningen är kall överförs den till en volymkolv och fylls upp till 100 ml med destillerat vatten.

Voges-Proskauer testprocedur

För att utföra Voges-Proskauer-testet inokuleras en RM / VP-buljong med mikroorganismen som studeras, från en ren kultur under 18 till 24 timmar.

Inokulatet ska inte vara särskilt tätt. Den inkuberas vid 35-37 ° C under 24 till 48 timmar, även om inkubation i flera dagar ibland är nödvändig. Cowan and Steel anser att 5 dagar är den minsta inkubationstiden som krävs för att upptäcka alla positiva Voges-Proskauer (VP) arter av familjen Enterobacteriaceae.

Testutveckling

Separera en portion på 1 ml i ett rör och utveckla enligt följande: Placera 12 droppar (0,6 ml) Voges A-reagens och 4 droppar (0,2 ml) Voges B. Blanda till luftning och låt sedimentera i 5 - 10 minuter innan tolkningen. Men om testet fortfarande är negativt, låt det sitta och observera röret efter 30 minuter till 1 timme.

Utseendet på en rosa-röd färg indikerar att Voges-Proskauer-reaktionen är positiv. Om mediet förblir gult är reaktionen negativ.

Att lägga till utvecklare i den angivna ordningen och kvantiteten är viktigt för att undvika falska negativ.

Använda sig av

Voges-Proskauer-testet är användbart för att skilja mellan stammar av E. coli som är VP-negativa, bland släktena Klebsiella, Enterobacter, Serratia, bland andra, som är VP-positiva.

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

QA

Kontrollstammar, inklusive Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium och Enterobacter cloacae ATCC 13047, kan användas för att testa kvaliteten på det beredda mediet.

De förväntade resultaten är positiva Voges-Proskauer-reaktioner endast för K. pneumoniae och E. cloacae. Resten ger negativa reaktioner.

referenser

1. Britannia Laboratories. MR-VP Medium. 2015. Finns på: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tillgänglig: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.