KAPSELFÄRGNING: SKÄL OCH TEKNIKER - BIOLOGI - 2025

Den färgning kapseln är en differentialfärgningsteknik som har egenskapen av ansträngnings polysackarid struktur omgivande vissa bakterier och jäst kallas kapsel. Det används i kliniska laboratorier för att hjälpa till att diagnostisera vissa patologier orsakade av kapslade mikroorganismer.

Det används också i undervisningslaboratorier för att demonstrera denna morfologiska struktur för studenter i hälsovetenskapliga karriärer, såsom: medicin, bioanalys, omvårdnad eller cytoteknik, bland andra.

Klebsiella pneumoniae-smet färgad med kapselfärg. Indisk färgmetod med safranin. Källa: А.А.В

Det finns flera enkla tekniker för att demonstrera närvaron av kapseln i mikroorganismerna som har den, dessa är: den negativa fläcken, Anthony-fläcken och en variant som kombinerar de två föregående.

Negativ färgning används huvudsakligen i CSF-prover när förekomsten av jäst Cryptococcus neoformans misstänks. Denna jäst är en vanlig orsak till hjärnhinneinflammation.

Denna teknik använder nigrosin eller Indien bläck och baseras på att skapa en kontrast mellan beredningens bakgrund och den ogenomträngliga kapseln i mikroorganismen. Bakgrunden blir mörk och kapseln är färglös. På detta sätt avslöjas denna struktur.

När det gäller Anthony-tekniken kan man säga att den mest används i undervisningslaboratorier för att demonstrera polysackaridstrukturen i bakterier såsom Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae och Neisseria meningitidis.

Användningen av denna teknik för diagnostiska ändamål är mycket sällsynt, eftersom det finns andra rutinmässiga test som möjliggör identifiering av dessa mikroorganismer.

Grund

Kapseln är en stark struktur av polysackarid. Detta skyddar mikroorganismerna från fagocytos och är därför en svår struktur att penetrera.

Det är därför kapselfläckar baseras på kontrast. Färgämnena färgar preparatets botten medan kapseln förblir färglös.

Därför är kapseln lätt igenkänd med dessa tekniker. Om mikroorganismen inte har en kapsel kommer den inte att urskiljas med denna typ av färgning, eftersom allt kommer att färgas i samma färg.

Alla tekniker som används för att färga kapseln har samma skäl trots att de använder olika färgämnen och procedurer.

Tekniker par

-Anonyma fläck

Anthony fläck använder kristallviolett som en fläck. Detta fläckar bakteriekroppen och bakgrunden lila.

Å andra sidan används 20% kopparsulfat. Detta tjänar som en tvättlösning, det vill säga den tar bort överskottet av violetta kristaller från beredningen, vilket gör kapslarna klara men utan att bakteriekroppen eller bakgrunden förlorar färg.

material

- Iriserande mjölk.

- Slide.

- 1% violett kristall.

- 20% kopparsulfat.

- Optiskt mikroskop.

- Fördjupningsolja.

Bearbeta

Denna teknik består av:

1. Odla mikroorganismen i iriserande mjölk i 36 timmar.
2. Placera en droppe av kulturen i slutet av en bild och bredvid den, placera en droppe violetta glas, blanda och sprida med slutet på en annan bild.
3. Lufttorka och ställ inte in värmen.
4. Tvätta med 20% kopparsulfatlösning, låt lufttorka.
5. Observera under ett mikroskop med ett nedsänkningsmål. Sök mot ändarna på spridningen.

Det är viktigt att inte använda värme varken för att fixa eller torka, eftersom det skadar kapseln. Tvätta inte heller med vatten.

tolkning

Iriserande mjölk är ett utmärkt odlingsmedium eftersom det ger de nödvändiga näringsämnena för mikroorganismen att utveckla en framstående kapsel.

Å andra sidan kommer den iriserande mjölken att bilda en tjock och kompakt botten som kommer att färgas lila tillsammans med bakteriekroppen, men kapseln som omger mikroorganismen förblir färglös. Därför observeras en tydlig gloria runt bakteriekroppen.

Grafisk framställning vid mikroskopisk observation av en Klebsiella pneumoniae-smet färgad med Anthony fläck. Källa: Tillverkad av författaren MSc. Marielsa Gil.

Fördel

Det är en enkel teknik att utföra. Kräver inte fixering.

Det bör också noteras att andra odlingsmedier kan användas, men mjölkmediet föredras eftersom det har fördelen att tillhandahålla mer framstående kapslar.

nackdelar

Det är en lite mer arbetsintensiv teknik än negativ färgning, och dess visualisering kräver att väntan på att preparatet torkar helt.

-Negativ färgning

material

- Slides.

- Kulturmedium med mikroorganismen.

- Kinesiskt bläck eller nigrosin.

- Optiskt mikroskop.

- Fysiologisk saltlösning.

Bearbeta

Placera en droppe fysiologisk saltlösning på täckglaset och lösa upp en liten del av den mikrobiella kulturen. Det är viktigt att preparatet inte är för tjockt. Lägg sedan en droppe kinesiskt bläck eller nigrosin och blanda.

Ett täckskivan placeras sedan över beredningen utan att överströmma vätskan. Det observeras under mikroskopet genom att först fokusera på ett 10X-mål och sedan flytta till 40X.

Denna teknik kan också användas direkt på CSF-prover. Det vill säga, i stället för att placera en droppe mikrobiell kultur, placeras en droppe CSF.

Fördel

Det är en enkel metod att utföra och samtidigt billig. Det kräver inte fixering eller torkning av beredningen.

nackdelar

Nackdelen är att det måste observeras under ett mikroskop innan beredningen torkar, eftersom om detta händer kommer mikroorganismerna att sammandras, vilket kommer att göra visualisering svår.

Å andra sidan kan falska positiver uppstå om analytikern är oerfaren, eftersom leukocyter ofta förväxlas med jäst.

Observationen av jästkapslar med den kinesiska bläck- eller nigrosintekniken bör betraktas som en presumtiv diagnos av Cryptococcus neoformans tills den visas med kulturen.

Detta beror på att det finns andra jästar som kan vara orsaken till hjärnhinneinflammation och inte bara Cryptococcus neoformans, såsom de av släktet Candida och Rhodotorula, liksom andra arter av Cryptococcus.

tolkning

Om det finns kapslade mikroorganismer kommer en mörk bakgrund att observeras, med transparenta kroppar som flyter i vätskan, vilket belyser kapselns närvaro.

Cryptococcus neoformans kapsel färgad med kinesiskt bläck. Källa: Fotokredit: innehållsleverantörer: CDC / Dr. Leanor Haley

-Indisk bläckteknik

Denna teknik kan också göras med nigrosin. Det är en kombination av de tidigare förklarade teknikerna. Denna teknik använder kristallviolett och indiskt bläck eller nigrosin.

Bakteriekroppen förvandlas lila från kristallvioleten eftersom den är negativt laddad, medan nigrosin färgar botten på smet. Om bakterierna har en kapsel kommer den att visas som en transparent gloria runt mikroorganismen.

Kristallvioleten kan ersättas av någon av dessa färger: safranin, basisk fuchsin eller metylenblå.

material

- Violett glas.

- Nigrosin eller indiskt bläck.

- Slides.

- Mikroskop.

Bearbeta

- Odla mikroorganismen i ett kulturmedium.

- Placera en droppe av kulturen i slutet av en bild och bredvid den, placera en droppe kristallindiabläck eller nigrosin, blanda och sprida med slutet på en annan bild.

- Lufttorka och fixera inte till värmen.

- Täck med en violetkristallösning i 1 minut, tvätta med destillerat vatten men mycket försiktigt (mjuk stråle), låt det torka i friluft.

- Observera under mikroskopet med ett nedsänkningsmål. Sök mot ändarna på spridningen.

tolkning

En lila bakteriekropp och en mörk bakgrund kommer att ses. Kapslen, om den finns, kommer att visas färglös runt bakterierna.

referenser

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Grundläggande tekniker för mikrobiologi. Observation av bakterier. Reduca (biologi). Mikrobiologiserie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Grundfläckar i mikrobiologilaboratoriet. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Finns på: medigraphic.com
3. Gil M. Negativ färgning: skäl, teknik, fördelar och nackdelar. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: Princip, procedur och resultat. 2019. Medicinsk mikrobiologihandbok. Finns på: microbeonline.com