HEMATOXYLIN-EOSINFÄRGNING: EGENSKAPER, ANVÄNDNING, TEKNIKER - KEMI - 2026

Den hematoxylin - eosin är en färgningsteknik med användning av kombinationen av färgämnen hematoxylin och eosin. Detta par färgämnen gör en perfekt duo, eftersom hematoxylin fungerar som ett basfärgämne och eosin är ett surt färgämne.

Beteckningen av basiska eller sura färgämnen avser inte pH-värdet som de erhåller i lösning, utan snarare talar om den rådande andelen i termer av de anjoniska eller katjoniska laddningar som de besitter eller av platsen för kromoforgruppen.

Hematoxylin - eosin (HE) färgad cilierad columnar epitel Källa: Todd Straus och Vladimir Osipov

I denna mening betraktas hematoxylin som ett basiskt (katjoniskt) färgämne och har därför en affinitet för syrestrukturer, såsom cellkärnan. Medan eosin, som är ett surt (anjoniskt) färgämne, har en affinitet för alkaliska eller basiska strukturer, såsom cellcytoplasma.

Av denna anledning används denna färgkombination i stor utsträckning för vävnadsfärgning, eftersom den gör det möjligt att tydligt urskilja kärnor och cytoplasmer. Kärnorna fläckar mörkblått eller lila och cytoplasman rosa.

Hematoxylin-eosinfärgning är en av de mest använda färgningsteknikerna inom området histologi och cytologi på grund av dess enkla hantering och låga kostnader. Det används för att visualisera celler, tjocka nervfibrer och närvaron av vissa mikroorganismer i vävnader, såsom parasiter, svampar och bakterier, bland andra.

egenskaper

hematoxylin

Hematoxylin är ett neutralt färgämne. Emellertid är komponenten som tillhandahåller färgen (kromofor) lokaliserad i det katjoniska eller basiska mitten av molekylen. Därför dess affinitet för sura strukturer. Dess kemiska formel är C ₁₆ H ₁₄ O ₆ och dess vetenskapliga namn är 7,11b-dihydroindeno kromen-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Det fläckar främst cellkärnorna, eftersom de är mycket rika på nukleinsyror. Det kan också färga cytoplasmatiska inneslutningar av viralt ursprung.

För att hematoxylin ska färga måste det vara i oxiderat tillstånd och bundet till en metall. Det senare kommer att tjäna till att fixera till vävnaden, det vill säga att den kommer att fungera som en mordant.

När hematoxylin oxideras kallas det hematein. Oxidation uppnås genom exponering för syre (åldring) av reagenset eller av ämnen som hjälper till dess oxidation (kemisk oxidation).

Eosin

Eosin är ett färgämne som färgar rött eller rosa. Det är olösligt i vatten även om det finns en vattenlöslig version. Generellt framställs eosin genom upplösning i alkohol (95 ° etanol).

Det färgar cytoplasmer, muskelfibrer, cytoplasmiska organeller och kollagen, men fläckar inte cellkärnor. Detta beror på att det är negativt laddat, därför har det en affinitet för positivt laddade strukturer.

Det finns två typer av eosin "Y" och "B". Eosin "Y" kallas gult eosin. Dess vetenskapliga namn är tetrabromo-fluorescein och dess kemiska formel är C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Å andra sidan kallas eosin "B" ibland blåaktig erytrosin B. Dess vetenskapliga namn är dibromodynitro-fluorescein och formeln är C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Båda är väldigt lika och skillnaden mellan att använda den ena eller den andra märks inte riktigt. Men den mest populära är eosin "Y".

Eosin har egenskapen att skilja mellan en levande och en död cell, eftersom den bara kan korsa membranet för att färga dess cytoplasma när cellerna är döda, vilket lämnar cytoplasma i cellen färglös om den förblir levande.

tillämpningar

Nerverfiberfärgning

Tjocka nervfibrer kan färgas och identifieras med hematoxylin-eosin. Det är emellertid inte användbart för färgning av tunna nervfibrer, eftersom en silverfärgning krävs för att visualisera den senare.

Histologiska fläckar i hudavsnitt

Vid färgning av det kåta skiktet på huden är färgämnet som verkar eosin, eftersom cellerna på denna nivå inte har en kärna.

I det granulära skiktet på huden färgar hematoxylin starkt keratohyalinkornen i granulatcellerna. Tvärtom är det sponösa skiktet på huden färgat svagt med hematoxylin, medan bas- eller grovlagret är ganska färgat.

Eosin färgar cytoplasma för alla celler och färgens intensitet kan variera från lager till lager.

Hematoxylin-eosinfärgning av avföringsprover

Gómez et al., Visade 2005 att hematoxylin-eosinfärgning var effektivare för att identifiera fall av amoebiasis på grund av Entamoeba histolytica och Entamoeba dispar än den nya visualiseringsmetoden (saltlösning och lugol) hos patienter med akut diarrésjukdom.

Det har också visat sig vara mycket känsligt för upptäckt av erytrofagocytos (amöber som har uppslukat erytrocyter).

Färgning av histologiska avsnitt för diagnos av infektion

Walwyn et al., Föreslog 2004 användning av histologiska fläckar för att upptäcka infektions orsakande mikroorganismer.

Med hjälp av hematoxylin-eosinfärgning kunde de visualisera infektioner orsakade av Clostridium, Actinomyces, spirillae eller Candida. De kunde också observera närvaron av parasiten Sarcoptes escabiei i hudavsnitt och virala inneslutningar av cytomegalovirus och herpes i sektioner i olika vävnader.

Tekniker

För histologiska prover

Histologisk sektionsfärgning går igenom en serie steg. Det första är att få det histologiska avsnittet. Detta måste vaxas för att senare erhålla skärningarna (ultrafina) med en mikrotom. Tekniken består av följande steg:

1-eliminering av överskott av paraffin : för detta kan du använda xylol eller Heme-D, sänk ned i 3-5 minuter.

2-Rehydrering av provet: detta uppnås genom att nedsänka provet i olika koncentrationer av alkoholer (etanol) i fallande ordning (100 °, 90 °, 70 °). I alla fall i 7 minuter.

3-eliminering av överskott av alkohol: för detta nedsänks det i vatten i 7 minuter.

4-Färgning med hematoxylin: provet nedsänks i 6-10 minuter i ett bricka som innehåller hematoxylin. Exponeringstiden beror på provets storlek och tjocklek.

5-eliminering av överskott av hematoxylin: det tvättas med vatten i 5 minuter och sedan genomförs en snabb passage (10-20 sekunder) genom sur alkohol. Senare tvättas det med vatten igen i 5 minuter. Sedan nedsänks den i etanol vid 96 ° under 1 minut.

6-Färgning med eosin: för detta doppas provet i 5 minuter i eosinbrickan.

7-Uttorkning av provet : för att göra detta går det igenom alkoholbrickorna (etanol), men den här gången i stigande ordning. (70 °, 90 °, 100 °). (Under 5 sekunder, 5 sekunder respektive 1 minut).

8-Förklaring av provet : för detta utsätts det för xylol i 5-10 minuter och torkas för att försegla permanent med Kanada balsam eller annat liknande material.

För avföringsprover som letar efter

En smuts görs på en bild med patientens avföring och fixeras med 80% alkohol under 5 minuter. Arket nedsänks i hematoxylin i 5 minuter och tvättas omedelbart med vatten.

Därefter nedsänks det snabbt i sur alkohol och sedan i ammoniakvatten. Det tvättas med vatten. Den färgas i 5 minuter i eosin. Provet dehydratiseras såsom förklarats i känd teknik och sköljs slutligen med xylen.

Beredning av reagens

- Hematoxylin

I en liter destillerat vatten löses 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Tillsätt 1 gram kristalliserat hematoxylin när det är helt upplöst. Vid fullständig upplösning tillsätts 1 g citronsyra tillsammans med 50 g klorhydrat och 0,2 g natriumjodat.

Blandningen kokas under 5 minuter, lämnas sedan för att svalna och filtreras för att avlägsna eventuella fasta partiklar som har kvar. Det sålunda framställda reagenset kan användas omedelbart.

- Eosin

Det kan framställas med en alkoholhaltig bas eller med en vattenbas.

Alkoholhaltig eosin

I 100 ml etanol vid 95 ° upplöses 0,5 gram eosin "Y". Tillsätt sedan några droppar isättika.

2% vattenhaltig eosin

I 1250 ml destillerat vatten löses 25 gram vattenlöslig eosin "Y". Tillsätt sedan några droppar isättika.

Syra alkohol

Mät 0,5 ml koncentrerad saltsyra och fyll på 100 ml med absolut alkohol.

Ammoniakvatten

Mät 0,5 ml koncentrerad ammoniak och fyll upp till 100 ml med destillerat vatten.

referenser

1. Navarrete, G. Histologi av huden. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Finns på: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifiering av Entamoeba histolytica / E. Dispar med den färska amebatekniken mot dess färgning med hematoxylin-eosin i akut diarré. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Finns på: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Användbarhet av histologiska tekniker för diagnos av infektion i anatomiska prover. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Finns på: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW-reagens. Hematoxylin-eosinfläck. 2017, Spanien. Finns på: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, den fria encyklopedin. 7 nov 2018, 08:18 UTC. 4 aug 2019, 22:13 sv.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, den fria encyklopedin. 3 maj 2019, 11:23 UTC. 4 aug 2019, 22:48 wikipedia.org