MAJ GRÜNWALD-GIEMSA FLÄCK: SKÄL, TEKNIK OCH ANVÄNDNINGSOMRÅDEN - BIOLOGI - 2025

Den May Grunwald-Giemsa eller Pappenheim fläcken är en differentialfärgningsteknik som blandar Giemsa och maj Grünwald reagens. Det används för differentiering av normala och onormala blodceller i perifert blod- och benmärgsutstryk, samt för färgning av histologiska sektioner och cytologiska prover.

Båda reagenserna -Giemsa och May Grünwald härrör från färgning av Romanowsky-typ, en teknik som bygger på kombinationen av sura och basiska färgämnen.

Smet som visar en segmenterad neutrofil och en millocyt i fallet med kronisk myeloid leukemi, färgad med May Grünwald Giemsa-fläcken. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) genom Wikipedia.org.

Giemsa förbättrade tekniken genom att stabilisera blandningen av eosin, metylenblått och derivat därav med glycerol. Istället använder May Grünwald eosin och metylenblått och använder metanol som lösningsmedel. Denna strategiska kombination har gett utmärkta resultat.

Även om det beträffar observation av cellmorfologi verkar det på liknande sätt som Giemsa och Wright-fläckarna, men denna teknik förbättrar de tidigare genom att förfina färgningen av parasiterna som orsakar malaria, Chagas sjukdom, leishmaniasis och trichomoniasis.

Dessutom har det visat sig vara en mycket användbar teknik för den cytologiska studien av spermatvätska. Det har utmärkt sig inte bara genom att visa de morfologiska egenskaperna hos spermier, utan också genom att möjliggöra differentiering av leukocyter, epitelceller och spermatogenesceller med stor effektivitet.

Grund

Tekniken följer grunden av Romanowsky-fläckar, där sura färgämnen har selektiv affinitet för grundläggande cellulära komponenter och sura komponenter lockar basfärger.

Förklarat på ett annat sätt har både cellstrukturer och färgämnen positiva eller negativa elektriska laddningar; som avgifter stöter och olika avgifter lockar.

Till exempel är basiska färgämnen som metylenblått positivt laddade och lockas till negativt laddade strukturer. Det är därför detta färgämne färgar kärnorna som är rika på DNA och RNA som har negativt laddade fosfatgrupper.

Granulerna av segmenterade basofiler och cytoplasmerna av RNA-innehållande mononukleära vita blodkroppar är också färgade.

På samma sätt har det sura färgämnet en negativ laddning, så det binder till positivt laddade strukturer såsom erytrocyter och granuler av segmenterade eosinofiler. När det gäller granulerna av segmenterade neutrofiler fixerar dessa båda färgämnen.

Olika färgämnen

I denna teknik existerar en kombination av reaktioner mellan ortokromatiska och metakromatiska färgämnen. Ortokromatika (eosin och metylenblått) binder till cellstrukturen som de är relaterade till och ger en stabil färg som inte varierar.

Å andra sidan varierar metakromatiken (derivaten av metylenblått azurblått A och azurblått B) sin ursprungliga färg när de fästs till den specifika strukturen, och det kan till och med finnas en mängd olika nyanser.

Slutligen kräver steget som May Grünwald-lösningen närvaro av vatten, eftersom utan detta färgämnet kommer att tränga igenom strukturerna men inte fixera. För att detta ska hända måste färgämnet bli polärt eller joniseras, och därmed kunna fälla ut och binda till relaterade strukturer.

Metod

material

- Slides.

- Färgbryggor.

- May-Grünwald-lösning.

- Giemsa-fläck.

- Destillerat vatten.

Kan Grünwald färga koncentrerad lösning

0,25 g eosin-metylenblått (fläck enligt May Grünwald) måste vägas ut och lösas i 100 ml metanol. Därefter blandas beredningen i 1 timme och lämnas att vila i 24 timmar. I slutet av tiden filtreras det.

För att använda tekniken måste färgämnet May Grünwald spädas enligt följande: för 200 ml utspädd färg, mät 30 ml av den koncentrerade lösningen, tillsätt 20 ml buffertlösning och 150 ml destillerat vatten justerat till pH 7,2-7,3 . Senare blandas och filtreras.

Giemsa fläckkoncentrat

0,5 g azur-eosin-metylenblått (fläck enligt Giemsa) måste vägas, lösas i 50 ml metanol och 50 ml glycerin tillsättes blandningen.

För att utföra tekniken, späd 1:10 med buffertlösning och låt den vila i 10 minuter. Det kan filtreras om det behövs.

Beredning av buffertlösningen vid pH 7,2

De bör vägas:

- 40 mg kaliumdi-vätefosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumvätefosfat 12-hydrat (Na2HPO4).

Båda föreningarna löses i 100 ml vatten.

Förfarande för färgning av blod- eller benmärgsfärgning

Det finns två lägen: en klassiker och en snabb.

Klassiskt läge

1. Täck utstryk i 2 till 3 minuter med den utspädda May-Grünwald-lösningen.
2. Tvätta med buffrat destillerat vatten för att ta bort den tidigare lösningen.
3. Täck med samma buffrade tvättlösning och låt stå i 1 minut. Tanken är att det föregående färgämnet är fixerat till strukturerna och att cellerna samtidigt hydratiseras.
4. Tillsätt 12 droppar utspädd Giemsa-tinktur i det buffrade vattnet och blåsa för att blanda och homogenisera. Låt den vila i 15 till 20 minuter.
5. Tvätta utstryk med buffrat destillerat vatten och lägg till lufttorka.
6. Fokusera och se de färgade blodkropparna under ett ljusmikroskop med 40X-målet. Om nödvändigt kan 100X användas.

Snabbläge

1. Täck utstryket med utspädd May Grünwald-fläck i 1 minut.
2. Tvätta med buffrat destillerat vatten.
3. Täck med buffrat vatten och låt det vila i 1 minut.
4. Tillsätt den utspädda Giemsa-fläcken och låt stå i 5 minuter.
5. Tvätta med buffrat destillerat vatten och låt lufttorka.

Teknikerna som beskrivs här är en riktlinje, men det bör beaktas att procedurerna och färgningstiderna varierar beroende på det kommersiella företag som distribuerar reagensen. Det är lämpligt att följa stegen som strikt anges av varje kommersiellt hus.

Teknik för färgning av spermatvätska

1- Täck utstrykningen med ett tunt lager av May Grünwald-lösningen i 4 minuter.

2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

3 - Placera ett skikt utspädd Giemsa (1:10) i destillerat vatten i 15 minuter.

4- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

5- Låt torka och observera under mikroskopet.

Förväntade färger med May Grünwald Giemsa-fläcken

Viktiga specifikationer

Tekniken kräver att reagensen och tvättlösningarna har ett pH-värde justerat till 7,2 -7,3, så att affiniteterna för färgämnena för cellstrukturerna inte förvrängs och den förväntade slutliga färgen inte varierar.

tillämpningar

Denna teknik används av kliniska laboratorier för att färga perifert blod- och benmärgsutstryk, vävnadssektioner och cytologier.

Inom det hematologiska fältet är denna teknik av avgörande betydelse i studien av avvikelser hos celler i form av form, storlek och antal. Det är ett mycket värdefullt verktyg för diagnos av vissa sjukdomar, såsom leukemier och anemier.

Dessutom är det av enastående nytta när man letar efter parasiter i hematologiska (Plasmodium sp och Trypanosoma cruzi) eller histologiska (Leishmanias sp) områden.

Vaginal cytologi

Beträffande vaginalcytologi är denna teknik särskilt fördelaktig för observation av Trichomonas vaginalis. Detta är ett viktigt fynd eftersom dess närvaro simulerar karcinom in situ-bilder som senare försvinner när parasiten elimineras.

Spermprov

Det har varit ett idealiskt verktyg för att studera spermieprover, eftersom det ger värdefull information om spermiernas kvalitet.

Uppgifterna som den erbjuder har främst att göra med antal och morfologi, såväl som med de samtidiga cellerna som kan finnas och som är av avgörande betydelse, såsom groddceller, leukocyter och epitelceller.

Med denna analys är det möjligt att beskriva avvikelser som observerats i spermierna i huvudet, nacken, mittstycket och huvudstycket.

Dessutom kan de också hjälpa till att visa fall av hemospermia (närvaro av röda blodkroppar i sperma) och leukospermi eller piospermi (ökat antal leukocyter i sperma).

referenser

1. Costamagna S, Prado M. Validering av det nya testet, May Grünwald-Giemsa och Gram-fläckar och odlingsmedia för diagnos av Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Finns i: scielo.
2. Merck KGaA Laboratory. Maj Grünwald eosin metylenblått för mikroskopi.
3. "May-Grünwald-Giemsa-fläck." Wikipedia, den fria encyklopedin. 15 nov 2018, 14:37 UTC. 8 jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Glaskemikalier Panreac Laboratory. Reagens för histologiska tekniker, hematologi och mikrobiologi. Finns på: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Rekommendation för färgning av blodutstryk för att läsa hemogrammet. Nationellt och referensbiomedicinsk laboratorium. Institutet för folkhälsa i Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram enligt WHO-kriterierna. Utvecklingsprogram för anatomi och biologi. Medicinsk skola. University of Chile. Finns på: pp.centramerica.com