TSI AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den TSI-agar eller trippelsocker järnagar är ett fast medium, som tjänar som ett biokemiskt test för att styra den initiala identifieringen av gramnegativa baciller. Det är baserat på att visa jäsning av närvarande sockerarter och produktion av vätesulfid och gas.

Dess sammansättning och bas liknar Kligler-järntestet, med skillnaden att det senare endast innehåller glukos och laktos. Istället, som namnet antyder, innehåller trippel sockerjärnagar tre jäsbara kolhydrater: glukos, laktos och sackaros.

Bilder av TSI-testet med olika mikroorganismer A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Källa: Witmadrid, från Wikimedia Commons

Dessutom har TSI-mediet fyra proteinderivat som gör det till en mycket näringsrik agar: jästextrakt, köttekstrakt, pepton och proteospepton. Den innehåller också järnhaltig ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolröd och agar.

Oförmågan hos en mikroorganism att fermentera glukosen som finns i mediet utesluter omedelbart den från att tillhöra Enterobacteriaceae-familjen. Därför är detta test viktigt för att bestämma vilken identifieringsväg man ska ta för att bestämma släkt och arter.

Varje laboratorium beslutar om man ska arbeta med TSI-agar eller med Kligler järnagar.

Grund

Var och en av föreningarna uppfyller en funktion inom mediet.

Natriumklorid och agar

Natriumklorid är nödvändig för att bibehålla det osmotiska balansen i mediet. Medan agaren ger den fasta konsistensen.

PH-indikator (fenolröd)

PH-värdet för det beredda mediet balanseras vid 7,3 och pH-indikatorn (fenolröd) blir gul under 6,8. Detta innebär att små mängder syror som produceras genom jäsning av sockerarter gör mediet från röd-orange till gult.

Om ingen jäsning inträffar kommer alkalinisering av mediet att ske genom användning av peptoner, vilket blir från röd-orange till stark röd.

Proteinderivat (jästextrakt, köttekstrakt, pepton och proteospepton)

När bakterierna metaboliserar proteinerna som finns i TSI-agar, produceras aminer som alkaliserar mediet (främst på avfasningsnivån), eftersom reaktionen kräver syre. Aminerna gör ringen ljusröd.

Men detta beror på bakteriens förmåga att jäs kolhydrater eller inte.

Fermentering av kolhydrater (glukos, laktos och sackaros)

Studien av jäsning av sockerarter kan ge flera bilder och var och en tolkas annorlunda. Testtolkningen delar mikroorganismer i 3 kategorier: icke-fermentatorer i glukos, icke-fermentatorer i laktos och laktos / sackaros-fermentatorer.

Det bör noteras att mängden glukos i mediet är begränsad, medan koncentrationen av laktos och sackaros är 10 gånger högre.

Bakterier från familjen Enterobacteriaceae och andra glukosjäsande mikroorganismer börjar jäsa detta socker eftersom det är det enklaste kolhydratet för energi.

Å andra sidan är laktos och sackaros komplexa kolhydrater som måste brytas ned och omvandlas till glukos för att de ska gå in i Embden-Meyerhof-cykeln.

-Mikroorganismer som inte fermenterar glukos

När den ympade mikroorganismen inte kan jäsna glukos kommer mycket mindre att kunna jäsa andra kolhydrater. Därför bildas inga syror här, men det bildas aminer i avfasningen med användning av peptoner.

I detta fall vänder ramen till en starkare röd och rörets botten kan förbli oförändrad eller den kan också vara alkaliserad, vilket lämnar hela röret rött.

Tolkning: K / K betyder alkalisk fas / alkalisk eller neutral botten

På bilden i början av artikeln se bilden av rör D.

Detta resultat indikerar att mikroorganismen inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen.

-Mikroorganismer som inte fermenterar laktos / sackaros

Om bakterierna kan fermentera glukos men inte laktos eller sackaros kommer följande att hända:

Bakterierna kommer att konsumera all glukos som är närvarande efter cirka 6 till 8 timmar, och kan försura både avfasningen och blocket; det vill säga, agaren har blivit helt gul. Men när glukos tappas och laktos och sackaros inte kan användas, kommer bakterierna att påbörja metabolismen av proteiner.

Denna reaktion behöver syre, därför sker nedbrytningen av peptoner på ytan (fas). Aminerna producerade alkaliserar ramen som blir gul till röd. Denna reaktion bevisas efter 18 till 24 timmars inkubation.

Tolkning: K / A betyder alkaliskt avfasning och syra.

På bilden i början av artikeln se bilden av rör B.

-Laktos / sackarosfermenterande mikroorganismer

Mikroorganismer som kan fermentera laktos och sackaros kan uppenbarligen fermentera glukos. Efter det att den minsta mängden glukos som finns i mediet har tömts börjar det bildade pyruvat att metabolisera för att bilda syror genom den aeroba Krebs-cykeln, och under 8 till 12 timmar kommer allt medium att vara gult.

Om bakterierna kan bryta ned laktos eller sackaros kommer syror att fortsätta att produceras, och efter 18 till 24 timmar fortsätter hela röret - avfasning och plugg - att gula.

Det bör noteras att användningen av glukos utförs på två sätt: ett aerobt vid rörets fas, och det andra anaerobt i botten av röret.

Tolkning: A / A betyder sur fas / syrabotten. Det kanske eller inte har gas.

På bilden i början av artikeln se bilden av rör A.

Gasproduktion

Vissa mikroorganismer kan producera gas under jäsningen av sockerarter. Gasen bevisas i röret av det tryck som den utövar i agar. Tryck orsakar bubbelbildning eller förskjutning av agar. Ibland kan bildningen av gas spruta mediet.

Det är viktigt att punkteringen görs rent genom centrum av agaren tills den når botten. Om punkteringen avleds mot rörets väggar kan det orsaka falska positiva effekter vid gasproduktionen, eftersom den kommer ut ur den felaktigt utformade kanalen.

Gasproduktionen, såväl som reaktionerna som inträffar i agarfasen, behöver syre, därför rekommenderas att röret täcks med en bomullsplugg, och om en Bakelite-kåpa används bör det inte vara helt tätt.

Gasproduktionen rapporteras som positiv (+) eller negativ (-).

Gasbildningsmönster. Källa: Schema gjord av MSc. Marielsa Gil. Bildkälla: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, via Wikimedia Commons

Natriumtiosulfat och järnhaltig ammoniumsulfat

Bakterier som kan producera vätesulfid (färglös gas) tar upp svavlet från natriumtiosulfat närvarande i mediet. Gång H ₂ S bildas, reagerar det med ferroammoniumsulfat, producerar järnsulfid (tydligt synlig svart fällning).

H ₂ S-produktion rapporteras som positiv (+) eller negativ (-).

På bilden i början av artikeln se bilden av röret C.

Förberedelse

Väg 62,5 g av det uttorkade trippel sockerjärnagar (TSI) och upplös i en liter destillerat vatten.

Värm tills agar är helt upplöst. Koka i en minut under omrörning ofta. Fördel 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullshättar.

Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt den vila i vinkel. Se till att både basen och ramen har samma avstånd.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt den värmas upp innan du sår bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är ljusbeige och det beredda mediet är rödorange.

Det slutliga pH för det beredda mediet är 7,3 ± 0,2.

tillämpningar

TSI-testet används i stor utsträckning på laboratorienivå för mikrobiologi. Detta test är viktigt för att vägleda vilken typ av test som måste tillämpas för att identifiera släktet och arten. Dess bra utförande och tolkning kan rädda material och arbete.

Om resultatet är en TSI K / K och cytokromoxidas-testet är positivt, är det känt att test bör användas för identifiering av icke-jäsande Gram-negativa stavar, såsom Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, bland andra släkter. Om den är oxidas-negativ är den inriktad på släktena Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc.

Å andra sidan, om en TSI A / A eller K / A erhålls och cytokromoxidas-testet är negativt, desto mer nitrater reduceras till nitriter, kommer vi att vara säkra på att det är en mikroorganism som tillhör Enterobacteriaceae-familjen. I detta fall kommer identifieringsvägen att fokusera på specifika test för denna grupp av bakterier.

Å andra sidan, om en K / A- eller A / A-bild erhålls och cytokromoxidas-testet är positivt, kommer de ytterligare testerna som ska monteras att vara inriktade på identifiering av jäsningsstammar som inte tillhör Enterobacteriaceae-familjen, såsom: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio och Pasteurella.

En TSI med vätesulfid, oxidasnegativ, kommer att leda identifieringen av följande släkter av familjen Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSD med liten eller måttlig vätesulfid i den alkaliska avfasning med en alkalisk bakgrund och en positiv oxidas, guidar användning av tester för identifiering av icke-fermenterande Gram-negativa stavar som producerar H ₂ S, såsom Shewanella putrefaciens.

Slutligen kan TSI användas för undersökning av väte-sulfidproduktion i Gram-positiva baciller, särskilt när Erysipelothrix rhusiopathiae misstänks.

sås

TSI-mediet måste inokuleras med rena kolonier, isolerade i primära eller selektiva kulturer. Om kolonin tas från selektiva medier som ympades med prover med blandad flora, bör man ta försiktighet endast från ytan, eftersom livskraftiga stammar som hämmas i det mediet kan existera i den nedre delen av kolonin.

Därför bör slingan aldrig kylas på selektivt medium och sedan tas kolonin upp och ympas med TSI-medium.

Såddningen sker med en rak slinga eller nål. En punktering kommer att göras och se till att den är genom mitten av mitten tills den når botten, och så är såddan avslutad genom ympning av ytan i en sicksackform. Gör inte två punkteringar.

Inkubera vid 37 ° C i aerobios under 18-24 timmar. Tolk nu, varken före eller efter.

begränsningar

TSI-testet bör läsas inom 18 till 24 timmar efter inkubationen. En avläsning före denna tid kan ge falskt positivt för A / A-fermentering. Medan en avläsning efter denna tid kan ge upphov till en falsk negativ bild av en icke-fermenterare, på grund av konsumtionen av peptoner som alkaliserar mediet.

referenser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
4. "TSI-agar." Wikipedia, den fria encyklopedin. 10 jul 2018, 08:09 UTC. 10 feb 2019, 03:33 Finns på: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. TSI Agar (Triple sockerjärnagar). 2015. Finns på: britanialab.com
6. BD-laboratorier. Trippel sockerjärnagar (TSI Agar). 2003. Finns på: bd.com