XLD AGAR: GRUND, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den XLD agar eller Xylos Lysin desoxycholat agarmedium är en selektiv och differentierad fast odling för isolering av tarmpatogener. Taylor designade XL-agarformatet (Xylose, Lysine) för att förbättra isoleringen av Shigella-släktet.

Han observerade att denna släkt inhiberades i de flesta media avsedda för isolering av enteropatogener. Därefter tillsattes natriumdeoxikolat, natriumtiosulfat och järn-ammoniumcitrat för att öka dess selektivitet. Denna formel har visat sig vara användbar för både isolering av Shigella och Salmonella.

Skillnader mellan kolonierna Shigella, Salmonella och coliforms på XLD-agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Källor: A. Av: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, med tillstånd: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Av: CDC / Dr. JJ-bonde, med tillstånd: Public Health Image Library

XLD-agar består av jästextrakt, natriumdeoxikolat, xylos, lysin, laktos, sackaros, natriumtiosulfat, järn-ammoniumcitrat, natriumklorid, fenolröd och agar. XLD Agar och SS Agar-duo används i de flesta bakteriologilaboratorier för att studera fekala prover för Shigella och Salmonella.

Andra laboratorier föredrar kombinationen av CHROMagar Salmonella och XLD-agar, bland andra tillgängliga alternativ. Dessa duon kan tillagas i dubbla petriskålar. På ena sidan placerar de XLD-agar och på motsatt sida det andra valda mediet.

Grund

-Närande kraft

XLD-agar har jästextrakt, som fungerar som en källa till näringsämnen för mikroorganismerna som växer på denna agar. Dessutom ger närvaron av kolhydrater (xylos, sackaros och laktos) energi till bakterierna som kan jäs dem.

-Selektivitet för mediet

Som ett hämmande ämne presenterar det natriumdeoxikolat; Detta förhindrar tillväxt av Gram-positiva bakterier, vilket ger mediet en selektiv karaktär.

-Differensiell kraft

Typiska Shigella-kolonier

Som redan nämnts innehåller XLD-agar xylos; Detta kolhydrat fermenteras av alla bakterier som växer i detta medium med undantag av Shigella-släktet.

Detta är en av de egenskaper som ger den dess olika karaktär, eftersom Shigella-kolonierna skiljer sig från resten genom att utveckla röda kolonier, medan de andra bakterierna producerar gula kolonier.

Typiska kolonier av Salmonella

Släktet Salmonella fermenterar också xylos, vilket initialt genererar gula kolonier. Emellertid, efter att de har tappat kolhydratxylosen, attackerar den lysin för dess enzymlysindekarboxylas. Dekarboxyleringen av lysin genererar alkalier som förvandlar färgen på kolonin och det omgivande mediet till det ursprungliga röda.

Detta beteende utförs endast av Salmonella, eftersom koliformerna som dekarboxylerar lysin inte kan alkalisera mediet. Detta beror på att koliformer också jäsar närvarande laktos och sackaros; därför är syresproduktionen mycket hög och lämnar den gula kolonin i dessa bakterier.

Det bör noteras att släktet Salmonella inte jäsar sackaros eller laktos.

Produktion av H

XLD tillåter agar också detektion av H ₂ S- producerande Salmonella-arter ; För detta beror det på svavelkällan som representeras av natriumtiosulfat och en reaktionsutvecklare, som är järn-ammoniumcitrat.

De senare reagerar med H ₂ S (färglös gas) och bildar ett synligt olösligt svart fällning av järnsulfat. I denna mening kommer egenskaperna hos salmonellakolonierna att vara röda med ett svart centrum.

Det bör noteras att för H ₂ S bildningsreaktion skall ske , behövs ett alkaliskt pH. Det är därför andra Enterobacteriaceae den formen H ₂ S inte kan eller göra så dåligt i denna miljö, eftersom den höga surheten produceras genom att fermentera kolhydrater som före hämmar eller hindrar reaktions.

-Sodiumklorid, agar och fenolröd

Slutligen bibehåller natriumklorid den osmotiska balansen; agar är stelningsmedel och fenolröd detekterar pH-förändringar, vilket gör koloniernas och mediets färg.

Förberedelse

Väg upp 55 g dehydratiserat XLD-medium och upplöst i 1 liter vatten. Värm upp och rör om blandningen tills den når kokpunkten. Överhett inte, eftersom värmen skadar mediet och skapar en fällning som förändrar morfologin hos typiska kolonier.

Detta medium får inte autoklaveras. Vid upplösning måste den överföras till ett vattenbad vid 50 ° C. Vid kylning ska den serveras direkt på sterila petriskålar. De kan hällas i enkla plattor eller dubbla plattor. De lämnas att stelna och förvaras i kylen tills de används.

Temperatur före användning. Eftersom det är ett icke-sterilt medium rekommenderas det att förbereda det nära användningsdatumet.

Mediets slutliga pH bör vara 7,4 ± 0,2. Färgen på det beredda mediet är orange-röd, genomskinlig utan fällning.

Om du har Xylose Lysine (XL) basagar kan du lägga till natriumdeoxikolat, natriumtiosulfat och järnammoniumcitrat. På detta sätt erhålls XLD-agarformeln.

tillämpningar

XLD-agar används för återhämtning av enteropatogener, främst av släktet Shigella och sekundärt av släktet Salmonella. Det är användbart för utvärdering av avföring, vatten och livsmedelsprover.

Typ av prov

Avföring

Avföringsprover kan sås direkt på XLD-agar, vilket gör en god fördelning av materialet för att erhålla isolerade kolonier.

För att förbättra Salmonella-återhämtningen kan XLD-agar strimlas från Salmonella-anrikningsmedia.

Mat

När det gäller mat kan anrikningsbuljonger för Salmonella och Shigella användas. För Salmonella kan du använda selenit cystinbuljong, ljusgrön tetrationionatbuljong, bland andra.

I fallet med Shigella kan det berikas med Shigella buljong med 0,5 | j / ml novobiocin, inkuberat vid 42 ° ± 1 ° C under 16-20 timmar.

Vatten

Vid vattenanalys rekommenderas bland annat membranfiltreringsteknik och användning av XLD-agar.

Planterings- och identifieringsvillkor

Det ympade mediet inkuberas aerobt vid 35 ° C under 24 till 48 timmar.

De typiska kolonierna i varje släkt observeras, de misstänkta kolonierna bör genomgå biokemiska test för att identifiera dem.

QA

För att utvärdera kvalitetskontrollen för mediet kan följande bakteriestammar användas: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, ProteC mir7130 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Släktet Salmonella kännetecknas av att röda kolonier presenteras med ett svart centrum eller helt svarta kolonier på detta medium. I Shigella-släktet måste kolonierna vara röda, det vill säga mediets färg.

När det gäller Escherichia coli, förväntas det hämmas helt eller delvis; om den växer är kolonierna gula. För Proteus mirabilis förväntas dålig tillväxt med rosa kolonier med eller utan svart centrum. Så småningom kommer Klebsiella-släkten att växa som gula kolonier.

Slutgiltiga tankar

XLD-agar används ofta i bakteriologilaboratorier för sin höga effektivitet för återhämtning av Shigella och har också en god återhämtning av släktet Salmonella.

Rall et al. (2005) i sitt arbete med titeln "Utvärdering av tre berikningsbuljonger och fem fasta medier för detektion av Salmonella i fjäderfä" visade att de tre testade klassiska medierna (ljusgrön agar, SS-agar och XLD-agar) , XLD-agar hade den bästa återhämtningsgraden.

Återställningsprocenten var följande: 13,8% för ljusgrön agar, 27,6% för SS och 34,5% för XLD. Rambach-agar med 48% återhämtning och CHROMagar med 79,3% överträffades endast av kromogena medier.

referenser

1. Matburna sjukdomar. Shigellainfektion. Finns på: anmat.gov.ar
2. "XLD-agar." Wikipedia, den fria encyklopedin. 9 feb 2019, 11:46 UTC. 10 april 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL-laboratorier. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Finns på: bd.com
4. Lab Neogen. XLD-agar. Finns på: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Finns på: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Utvärdering av tre berikningsbuljonger och fem pläteringsmedier för Salmonella-detektion hos fjäderfä. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Tillgängligt från: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.