MEDIO AV: SKÄL, BEREDNING, ANVÄNDNING OCH BEGRÄNSNINGAR - BIOLOGI - 2025

Den AV eller glukos fermentationsmediet

Det skapades av Hugh och Leifson; dessa forskare insåg att konventionella metoder för att studera syraproduktion från kolhydrater inte var lämpliga för denna specifika bakteriegrupp.

A. Kommersiell basal OF medium. B. Rör med OF medium frön. Källa: A och B Foton tagna av författaren MSc. Marielsa Gil.

Detta beror på att icke-enteriska Gram-negativa stavar generellt producerar låga mängder syror, till skillnad från Enterobacteriaceae.

I detta avseende har OF-mediet speciella egenskaper som kan detektera de små mängder syra som bildas, både genom oxidativa och fermentativa vägar. Dessa skillnader är relaterade till mängden peptoner, kolhydrater och agar.

Detta medium innehåller mindre peptoner och en högre koncentration av kolhydrater och reducerar därmed de produkter som alkaliserar mediet som ett resultat av proteinmetabolism och ökar produktionen av syror på grund av användning av kolhydrater.

Å andra sidan gynnar minskningen av mängden agar spridningen av syran som produceras i hela mediet, förutom att vi kan observera rörlighet.

OF-mediet består av pepton, natriumklorid, bromotymolblått, dipotassiumfosfat, agar och ett kolhydrat. Det vanligaste kolhydratet är glukos men andra kan användas enligt vilka man vill studera, till exempel laktos, maltos, xylos.

Grund

Liksom alla odlingsmedier måste OF-mediet innehålla näringsämnen som garanterar bakterietillväxt; dessa ämnen är peptoner.

På sin sida tillhandahåller kolhydratet energi och tjänar samtidigt till att studera beteendet hos mikroorganismen mot den, det vill säga det gör att bakterierna kan klassificeras som en oxidativ, fermentativ eller icke-sackarolytisk organisme.

OF-medium innehåller ett 1: 5-pepton / kolhydratförhållande i motsats till 2: 1 konventionella medier. Detta säkerställer att mängden alkaliska aminer som bildas genom nedbrytning av peptoner inte neutraliserar bildningen av svaga syror.

Å andra sidan innehåller mediet natriumklorid och dipotassiumfosfat. Dessa föreningar stabiliserar mediet osmotiskt och reglerar pH respektive. Bromothymolblått är pH-indikatorn, som förvandlar färgen på mediet från grönt till gult med syraproduktionen.

Vissa mikroorganismer kan använda kolhydrater via oxidationsvägarna eller jäsningsvägarna, medan andra inte tar någon väg.

Detta beror på egenskaperna hos varje mikroorganism. Till exempel kan vissa strikta aeroba mikroorganismer oxidera vissa kolhydrater, och fakultativa anaerober kan oxideras och jäsas beroende på miljön runt dem, medan andra inte oxiderar eller jäsar kolhydrater (asakarolytiska).

Slutligen finns det en modifiering av OF-mediet som rekommenderas av CDC som innehåller en speciell OF-bas med fenolröd som indikator.

Oxidationsprocess

Glukosoxidationsprocessen kräver inte fosforylering av glukos, liksom fermenteringsprocessen. I detta fall oxideras aldehydgruppen till en karboxylgrupp, vilket resulterar i glukonsyra. Detta oxideras i sin tur till 2-ketogluconic.

Den senare ackumuleras antingen eller bryts ned till två molekyler av pyruvinsyra. Detta system kräver närvaro av syre eller någon oorganisk förening som den slutliga elektronacceptorn.

Produktionen av syror på denna väg är svagare än den som erhålls genom fermenteringsvägen.

Fermenteringsprocess

För att glukosfermentering ska kunna ske på någon av de tillgängliga vägarna måste den först fosforyleras och bli glukos-6-fosfat.

Glukosfermentering kan ta flera rutter, den viktigaste är Embden-Meyerhof-Parnas-rutten, men de kan också ta Entner-Doudoroff-rutten, eller Warburg-Dickens hexos-monofosfatväg, även känd som av nedbrytningen av pentoser.

Den valda vägen beror på det enzymatiska systemet som mikroorganismen har.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Vid fermentering av glukos genom vägen Embden-Meyerhof-Parnas delas den upp i två triomolekyler för att senare nedbrytas till olika kolföreningar tills bildandet av glyceraldehyd-3-fosfat. Därifrån kommer ett mellanliggande ämne, som är pyruvinsyra.

Därifrån bildas olika typer av blandade syror som kan variera från en art till en annan.

Detta system förekommer i frånvaro av syre och kräver en organisk förening som den slutliga elektronacceptorn.

Entner-Doudoroff-väg

Vid fermentering av glukos via Entner-Doudoroff-vägen blir glukos 6-fosfat glucono-act-lakton-6-fosfat och därifrån oxideras det till 6-fosfoglukonat och 2-keto-3-deoxi-6- fosfoglukonat för att slutligen bilda pyruvinsyra. Denna väg behöver syre för att glykolys ska inträffa.

Pentos nedbrytningsväg eller Warburg-Dickens Hexoxa monofosfatväg

Denna rutt är en hybrid av ovanstående 2. Det börjar liknar Entner-Doudoroff-vägen, men senare bildas glyceraldehyd-3-fosfat som en föregångare till pyruvinsyra, som förekommer i Embden-Meyerhof-Parnas-vägen.

Förberedelse

Att väga:

2 g pepton

5 g natriumklorid

10 g D-glukos (eller kolhydratet som ska beredas)

0,03 g bromotymolblått

3 gram agar

0,30 g dipotassiumfosfat

1 liter destillerat vatten.

Blanda alla föreningar förutom kolhydratet och upplös i 1 liter destillerat vatten. Värm upp och skaka tills det är helt löst.

Vid kylning till 50 ° C tillsättes 100 ml 10% glukos (filtrerad).

Distribuera aseptiskt 5 ml OF-medium i bomullsöverdragna provrör och autoklav vid 121 ° C, 15 pund tryck under 15 minuter.

Låt stelna i vertikalt läge.

PH för mediet bör vara 7,1 Färgen på det beredda mediet är grönt.

Förvara i kylskåp.

tillämpningar

OF-mediet är ett speciellt medium för att bestämma metabolismbeteendet hos en mikroorganism mot ett kolhydrat. Speciellt för de som bildar små, svaga eller inga syror.

sås

För varje mikroorganism behövs 2 OF-rör, båda måste inokuleras med mikroorganismen som ska studeras. Kolonin tas med ett rakt handtag och en punktering görs i mitten av röret utan att nå botten; Flera punkteringar kan göras, så länge det inte finns något intresse för att observera rörlighet.

Ett skikt av steril flytande petroleumgelé eller steril smält paraffin (ungefär 1 till 2 ml) tillsätts till ett av rören och märkts med bokstaven "F". Det andra röret lämnas original och är märkt "O". Båda rören inkuberas vid 35 ° C och observeras dagligen i upp till 3 till 4 dagar.

tolkning

Metabolism och gasproduktion

Tabell: Klassificering av mikroorganismer enligt deras beteende i öppna (oxidativa) och stängda (fermentativa) OF-rör

Källa: Tillverkad av författaren MSc. Marielsa gil

Gasen observeras med bildning av bubblor eller förskjutning av agaren.

Det bör noteras att en organism som endast oxiderar glukos men inte jäsar den inte kommer att kunna jäs andra kolhydrater, i vilket fall den bara oxiderar den. Därför kommer det förseglade röret för studier av andra kolhydrater utelämnas i denna situation.

motilitet

Dessutom kan rörlighet ses i OF-mediet.

Positiv rörlighet : tillväxt som inte är begränsad till ympningsområdet. Det finns tillväxt mot rörets sidor.

Negativ rörlighet : tillväxt endast i den initiala inokulum.

QA

Följande stammar kan användas som kvalitetskontroll: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa och Moraxella sp. De förväntade resultaten är:

1. coli: Glukosfermentator (både gula och mousserande rör).
2. aeruginosa: Glukosoxidationsmedel (öppet gult rör och grön eller blå tätning).
3. Moraxella sp: Ej sackarolytiskt (grönt eller blått öppet rör, grönt tätat rör).

begränsningar

-Vissa mikroorganismer kan inte växa i OF-medium. I dessa fall upprepas testet men 2% serum eller 0,1% jästextrakt tillsätts till mediet.

-Oxidationsreaktioner observeras ofta bara nära ytan och resten av mediet kan förbli grönt, på samma sätt som det tas som positivt.

referenser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. AV glukosmedium. Finns på: http://f-soria.es
5. Conda Pronadisa Laboratories. AV glukosmedium. Finns på: condalab.com
6. BD-laboratorier. 2007. OF Basal Medium. Finns på: bd.com