MEDIO MIO: GRUND, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den MIO mediet är ett biokemiskt test som används för att hjälpa till vid identifiering av arter av bakterier som tillhör familjen Enterobacteriaceae. Det är ganska näringsrikt och består av glukos, jästextrakt, pepton, triptein, L-ornitinhydroklorid, bromokresol purpur och agar.

Betydelsen av dess förkortning (MIO) beskriver var och en av parametrarna som kan observeras i detta medium; rörlighet, indol och ornitin. Motilitet är mikroorganismens förmåga att röra sig på grund av förekomsten av flagella. För att denna egenskap ska observeras måste mediets konsistens vara halvfast, så beredningen innehåller mindre agar.

Översikt över tolkning av resultat i MIO-mediet. Källa: Utarbetad av författaren MSc. Marielsa gil

Produktionen av indol visar närvaron av enzymet tryptofanas som verkar på aminosyran tryptofan, vilket kräver användning av ett avslöjande reagens för att synliggöra produktionen av indol.

Slutligen bestämmer ornitin om bakterien har förmåga att dekarboxylera aminosyran, det vill säga om den har enzymet orinitindekarboxylas.

Grund

Pepton, jästextrakt och triptein

Dessa element bidrar till näringskraften för detta medium. De fungerar som en källa till näringsämnen och essentiella aminosyror för bakterieutveckling.

Dessutom är triptein en källa till tryptofan för att visa närvaron av enzymet tryptofanas, vilket försämrar tryptofan genom reduktiv deamination, frigör indol, pyruvinsyra, ammoniak och energi.

Indol är färglös, därför avslöjas dess närvaro genom att tillsätta fem droppar Ehrlichs eller Kovacs reagens, båda med p-dimetylaminobenzaldehyd.

Aldehydgruppen i denna förening reagerar med indolen och alstrar en ringformad fuchsia-röd produkt på ytan av agaren.

Alla färgspår bör betraktas som ett positivt test. Beviset ska läsas omedelbart, eftersom med tiden färgen försämras.

Vidare bör detta test avslöjas efter att ornitinens rörlighet och dekarboxyleringsresultat har noterats.

tolkning

Positivt test: bildning av en röd fuchsia-röd vid tillsats av droppar Kovacs-reagens.

Negativt test: ingen ringbildning.

motilitet

Bakteriens förmåga att röra sig kommer att vara uppenbar om ett grumligt medium observeras eller om det finns en tjock tillväxtlinje som expanderar runt den initiala ympningen.

Ett negativt motilitetstest kommer att bevisas genom att observera en tunn tillväxtlinje, och allt omkring det kommer att vara utan tillväxt.

Det är viktigt att rörligheten avläses innan indolen avslöjas, eftersom tillsatsen av reagenset fördunklar hela mediet.

I mobila men långsamt växande bakterier är det svårt att visa deras rörlighet med detta medium. I det här fallet rekommenderas det att använda andra tester eller metoder, till exempel medelmotilitet eller drop-pending-metoden.

Glukos

Glukos är det jäsbara kolhydratet som, förutom att tillhandahålla energi, surgör miljön, ett nödvändigt villkor för att dekarboxylering av aminosyran ornitin ska uppstå.

Fermentering av glukos måste alltid ske, med utgångspunkt från principen att alla bakterier som tillhör Enterobacteriaceae-familjen fermenterar glukos.

L-ornitin

I händelse av att bakterierna producerar enzymet ornitinkarboxylas, kan detta verka när mediet har surgjorts genom fermentering av glukos.

Enzymet ornitindekarboxylas verkar på karboxylgruppen i aminosyran och producerar en amin som kallas putresin som alkaliserar mediet igen.

Detta test bör läsas efter 24 timmars inkubation, för om du försöker läsa innan du kan tolka testet med ett falskt negativt.

Det bör komma ihåg att den första reaktionen som inträffar är jäsningen av glukos, så att mediet blir gult i en initial fas (första 10 till 12 timmar). Om ornitindekarboxylering därefter inträffar blir mediet lila.

Det är viktigt att tolka ornitindekarboxyleringstestet innan indol avslöjas, eftersom tillsatsen av Kovacs reagens förändrar mediets färg.

tolkning

Negativt test: medium med en gul färg eller med en gul bakgrund.

Positivt test: medium helt lila.

PH-indikator

I detta fall används bromocresol-lila; den som ansvarar för att avslöja när det är en förändring i pH i mediet. Vid surgöring blir indikatorn gul och vid alkalisering blir den lila.

Frö och utveckling av teknik

För att så MIO-mediet används en rak slinga eller nål och med den samlas en del av kolonin som ska studeras.

En djup punktering görs mitt i MIO i en rak linje. Det är inte tillrådligt att utföra dubbel punktering, eftersom det kan ge en falsk bild av rörlighet om punkteringarna inte utförs på samma plats.

Inkubera i 24 till 48 timmar vid 37 ° C i aerobios. Titta på resultaten i denna ordning: rörlighet, dekarboxylering av ornitinet och avslöja slutligen indolen.

Det rekommenderas att aseptiskt ta bort 2 ml av mediet, överföra det till ett sterilt rör och utföra indoltestet där, så att om det är negativt kan resten av det ursprungliga röret inkuberas under ytterligare 24 timmar för att avslöja indolen igen.

Utvecklingen av indolen utförs på följande sätt: 3 till 5 droppar Kovacs reagens sättes till MIO-mediet och omrörs kraftigt. Det observeras om en röd-fuchsia-ring visas eller inte.

Förberedelse

MIO-medium

Väg ut 31 g MIO-medium och upplös i en liter destillerat vatten.

Värm tills blandningen kokar i en minut, skak ofta tills agar är helt upplöst. Fördel 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullshättar.

Sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt stå rakt i en rack, så att ett halvfast block bildas.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt den värmas upp innan du sår bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och färgen på det beredda mediet något opaliserande lila.

Det slutliga pH för det beredda mediet är 6,5 ± 0,2

Mediet blir gult vid surt pH och är lila vid alkaliskt pH.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Detta reagens framställs enligt följande:

150 ml amyl, isoamyl eller butylalkohol (vilken som helst av de tre) mäts. I den löstes 10 g p-dimetylaminobensaldehyd. Därefter tillsättes långsamt 50 ml koncentrerad saltsyra.

Det framställda reagenset är färglöst eller ljusgult. Det ska förvaras i bärnsten flaska och förvaras i kylskåp. En mörkbrun färg visar dess försämring.

Även Kovacs-reagenset kan ersättas med Ehrlich-reagenset. Den senare, som är mer känslig, föredras att avslöja indol i bakterier som producerar den i små mängder, såsom i vissa icke-jäsande gramnegativa stavar och vissa anaerober.

Använda sig av

Detta medium är ett test som kompletterar ett batteri av biokemiska tester för identifiering av bakterier som tillhör Enterobacteriaceae-familjen.

Ornitindekarboxyleringsdata tjänar till att differentiera Shigella sonnei, som testar positivt, från Shigella boydii, Shigella flexneri och S. dysenterieae, som testar negativt.

Den skiljer också släkten Klebsiella, som testar negativt, från släktet Enterobacter, där de flesta av dess arter testar positiva.

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

QA

Varje gång en sats MIO-medium framställs kan ett kontrolltest utföras. För detta används kända eller certifierade stammar för att observera mediets beteende.

Stammarna som kan användas är Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes och Proteus mirabilis.

De förväntade resultaten är E. coli och M. morganii. Dan M: +, I: + och O: +.

Klebsiella pneumoniae är alla negativa (M: -, jag: -, O :-). Proteus mirabilis och Enterobacter aerogenes ger M: + I: - och O: +.

referenser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Finns på: britanialab.com
5. BD-laboratorier. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Finns på: bd.com
6. Valtek Laboratories. Medium MIO Motility, Indole, Ornithine. 2010. Finns på: andinamedica.com