MEDIUM SIM: FOUNDATION, FÖRBEREDELSE OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den SIM mediet är en halvfast och differential agar, speciellt utformad för att hjälpa till att identifiera vissa bakterier, särskilt Enterobacteriaceae. Det består av triptein, pepton, järnsulfat, ammoniumsulfat, natriumtiosulfat och agar.

Detta medium tillåter exekveringen av tre viktiga test: produktion av vätesulfid (H ₂ S), bildandet av indol och motilitet, därav akronymen SIM. På grund av dess stora användbarhet kan den inte vara frånvarande i ett bakteriologilaboratorium.

A. Kommersiellt SIM-medium B. SIM H2S (-), Indole (-) och Motility (+) Test och SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+) Test. Källa: A. Foto taget av författaren MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Till skillnad från andra media måste det vara halvfast för att vissa bakteriers rörelsekapacitet kan upptäckas. I detta avseende fungerar detta test mycket bra för Enterobacteriaceae, men inte för icke-jäsande gramnegativa stavar, där andra metoder föredras, t.ex. hängande droppe.

SIM-mediet tillåter att särskilja vissa specifika egenskaper som kännetecknar vissa bakterier i förhållande till andra. Exempelvis kännetecknas Escherichia coli av att vara H ₂ S (-), Indole (+) och rörlighet (+), medan Proteus mirabilis är H ₂ S (+), indole (-), rörlighet (+).

Grund

Det är ett odlingsmedium som anses vara differentiellt, eftersom dess användning skiljer mellan mikroorganismer som kan producera vätesulfid från de som inte gör det; det belyser också de som bildar indol från tryptofan från de som inte gör det, och slutligen differentierar rörliga bakterier från orörliga bakterier.

Kraftkälla

Liksom alla odlingsmedier har den element som ger de nödvändiga näringsämnena så att icke-krävande mikroorganismer kan utvecklas. Dessa element representeras av peptoner och triptein.

Utvecklingen av mikroorganismen i mediet är nödvändig för att kunna observera närvaron eller frånvaron av de egenskaper som detta medium utvärderar.

Produktion av vätesulfid

Bokstaven S av förkortningen SIM avser produktionen av vätesulfid (H ₂ S). Bakterier som kan bilda vätesulfid tar upp svavlet från natriumtiosulfat.

När väl H ₂ S -colourless gas- bildas, reagerar det med järnsaltet är närvarande i mediet, bildande järn sulfid, klart synligt (svart fällning). Bakterier som inte bildar H ₂ S, lämnar mediet den ursprungliga färgen (beige).

Närvaron av den svarta fällningen kan hindra tolkningen av rörlighet. Dock de flesta H ₂ S- producerande Enterobacteriaceae är kända att vara positivt motila, såsom Salmonella, Proteus, och Citrobacter. Dessutom antyder den svarta fällningen som täcker nästan hela mediet positiv rörlighet.

Indolbildning

Den andra bokstaven i förkortningen SIM är "jag", som representerar bildandet av indol.

I denna mening fullgör Triptein, förutom att det är en näringskälla, en annan grundläggande funktion. Denna pepton är rik på en aminosyra som kallas tryptofan, därför kan den visa bakterier som producerar tryptofanas.

Detta enzym ansvarar för klyvning av aminosyran tryptofan, med den bildande indolen (färglös substans), pyruvinsyra och ammonium.

Det är därför, för att visa denna reaktion, är det nödvändigt att lägga till ett avslöjande ämne (Ehrlichs reagens eller Kovacs reagens). Antingen reagerar med indol och bildar en röd-fuchsia ringformad substans på ytan av agaren. Om fuchsia-ringen visas tolkas indoltestet som positivt.

Bakterier som inte har detta enzym bildar inte ringen och den tolkas som ett negativt indoltest.

Det är viktigt att notera att indoltestet ska vara det sista som ska tolkas, eftersom när reagenset tillsätts blir mediet grumligt, vilket gör det svårt att visualisera rörlighet.

motilitet

Slutligen betyder bokstaven "M" i ordet SIM rörlighet. För att utvärdera rörlighet är detta medium strategiskt halvfast, eftersom denna egenskap är väsentlig för att kunna observera om det finns bakterierörelse eller inte. Bakterier som har flagella är de som ger detta positiva test.

Ett positivt test kommer att vara uppenbart när grumligheten observeras, både i den initiala ympningen och runt den. Medan icke-motoriska bakterier utvecklas endast i vägen för den första inokulum.

Förberedelse

Medium SIM

Väg 30 g av det dehydratiserade mediet och upplöst i en liter destillerat vatten. Blandningen får stå i 5 minuter och upphettas sedan till kokande under omrörning ofta tills den är helt upplöst.

Distribuera blandningen i provrör med bomullshättar och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort rörstället från autoklaven och låt det stelna i vertikalt läge så att mediet är i form av ett block.

För att bevara det förvaras det i kylen tills det används. Det beredda mediet måste ha ett slutligt pH på 7,3 ± 0,2.

Vid tidpunkten för inokulering av mediet måste det vara vid rumstemperatur. Mittfärgen är beige.

Kovacs reagens

Mät 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Använd en av de tre nämnda).

Lös upp 10 g p-dimetylaminobensaldehyd. Tillsätt sedan långsamt 50 ml koncentrerad saltsyra.

Det färdiga reagenset är färglöst eller ljusgult. Det ska förvaras i en bärnstensflaska och förvaras i kylskåp. Använd inte om den blir mörkbrun; som indikerar att den är skadad. Detta reagens föredras när det gäller Enterobacteriaceae.

Erlichs reagens

Väg ut 2 g p-dimetylaminobensaldehyd och upplöst i 190 ml absolut etylalkohol och blanda långsamt med 40 ml koncentrerad saltsyra. Förvara på samma sätt som Kovacs reagens. Ehrlichs reagens används mest för icke-jäsande och anaeroba bakterier.

tillämpningar

SIM-medium används mycket i bakteriologilaboratorier. Dess fördel är att tre väsentliga egenskaper kan observeras i samma rör vid identifiering av Enterobacteriaceae.

sås

Det korrekta sättet att så detta medium är att använda nålen, med vilken en del av den rena kolonin som ska studeras tas och sättas lodrätt i centrum av mediet. En enda utsträckning bör utföras. Punkteringen ska inte nå botten av röret, det rätta är att täcka bara två tredjedelar av djupet.

Upprepa inokulum rekommenderas inte, eftersom det kan leda till falska tolkningar av positiv rörlighet. Det ympade mediet inkuberas aerobt vid 37 ° C under 24 timmar.

När tiden har ingått observeras huruvida det var produktionen av H ₂ S och rörlighet läses. Slutligen avslöjas indolen, tillsätt 3 till 4 droppar av Ehrlich eller Kovacs reagens, blanda försiktigt och tolka.

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

QA

Som en sterilitetskontroll inkuberas ett eller två rör utan ympning i en ugn vid 37 ° C under 24 timmar. Det förväntas att efter denna tid inte sker någon tillväxt eller färgförändring.

Som kvalitetskontroll kan kända certifierade stammar användas, såsom: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De förväntade resultaten är: Escherichia coli H ₂ S negativ, indol och positiv rörlighet, Enterobacter aerogenes endast positiv rörlighet, Salmonella typhimurium H ₂ S och positiv rörlighet, med negativ indol. Proteus vulgaris är alla positiva, medan Klebsiella pneumoniae och Shigella alla är negativa.

begränsningar

-Vissa stammar av Morganella morganii, bland andra stammar, kan producera ett bruntaktigt pigment i detta medium på grund av produktionen av melanin, detta bör inte förväxlas med utfällningen av järn sulfid. Hos oerfarna yrkesverksamma kan denna situation generera falska positiva resultat i tolkningen av H ₂ S- testet .

-Strikta aeroba bakterier kommer bara att växa på tubens yta, vilket gör det svårt att tolka rörligheten.

referenser

1. BD-laboratorier. BBL SIM Medium. 2008. Finns på: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Finns på: livsmedelssäkerhet
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tillgänglig på: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab-laboratorium. Medium SIM. Finns på: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Medium SIM. 2015. Finns på: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.