KINYOUN-FÄRGNING: SKÄL OCH TEKNIKER - BIOLOGI - 2025

Den Kinyoun färgning är en färgningsteknik som används för att fläck bakterier och parasiter resistent sur alkohol. Det föddes från modifieringen av Ziehl-Neelsen färg. Båda teknikerna tolkas på samma sätt men skiljer sig åt i två delar: i beredningen av huvudreagenset och genom att Kinyoun-tekniken inte använder värme.

Av denna anledning är det också känt som kallmodifierad Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kallfärg. Det är indicerat för färgning av Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiska mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris och Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum färgad med Kinyoun-fläck. Punlop Anusonpornperm, från Wikimedia Commons

Det är värt att notera att Nocardia fläckar svagt med denna teknik eftersom de delvis är sura alkoholbeständiga, så för detta släkt finns det en modifiering av metodiken.

I sin tur har den kalla Kinyoun-tekniken kombinerats med trikromtekniken modifierad av Didier för detektering av coccidia (Cryptosporidium parvum och Isospora belli) och mikrosporidia-sporer (Enterocytozoon bieneusi och Encephalitozoon intestinalis).

Grund

Det huvudsakliga färgningsreagenset är karbolfuchsin eller karbolfuchsin, som har egenskapen att binda till karbolsyrorna i den lipidrika vaxartade cellväggen (mykolsyror) i mykobakterier och vissa parasiter.

Denna bindning motverkas inte av syrablekmedlet; därför definieras mikroorganismer som syrasnabba.

Till skillnad från Ziehl-Neelsen-tekniken - som fixar färgämnet genom värme - i Kinyoun-tekniken är detta steg inte nödvändigt, eftersom den karboliska fuchsinlösningen förberedd för denna teknik innehåller en hög koncentration av fenol.

Fenol löser upp lipidmaterialet i cellväggen, vilket gör att karbolfuchsinfärgämnet kommer in. Efter att färgämnet tränger igenom förblir det fixerat trots den sura alkoholtvätten.

På detta sätt får de syrasnabba mikroorganismerna den karakteristiska röda färgen, medan allt som inte är syrafast blir missfärgat och fläckar blått.

Metod

material

- Modifierad carbol fuchsin.

- Alkohol-syra.

- Metylenblå.

Beredning av Kinyoun carbol fuchsin

- Grundläggande fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillerat vatten: 100 ml.

Den grundläggande fuchsinen bör lösas långsamt i alkoholen och blandas kontinuerligt. Därefter smälts den kristalliserade fenolen i ett vattenbad vid 56 ° C. När de har lösts tillsätts 8 ml till fuchsinlösningen som framställts ovan.

Beredning av syraalkoholen

- Koncentrerad saltsyra: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Det måste mätas, sammanfogas och blandas.

Beredning av metylenblått kontrastfärgämne

- Metylenblått: 0,3 g.

- Destillerat vatten: 100 ml.

Det vägs och upplöses.

Kinyoun-färgningsteknik

1- Förbered en smuts direkt från provet, som kan vara sputum, lungvätska, urinsediment, cerebrospinalvätska eller avföring, bland andra; eller från en suspension av mikroorganismer erhållna från rena kolonier utvecklade i primära odlingsmedier.

2- Fixa utstrykningen med värme.

3- Placera smet på färgningsbryggan och täck med det förberedda Kinyoun-karbolfuchsinreagenset. Låt den vila i 3 till 5 minuter.

4- Tvätta med destillerat vatten.

5- Blek med sur alkohol i 3 minuter och tvätt igen med destillerat vatten.

6- Blek igen med syraalkohol i 1 eller 2 minuter tills ingen färg färgas bort.

7- Tvätta med destillerat vatten och låt det rinna av och placera objektglaset vertikalt.

8- Täck preparatet med metylenblått och låt verka i 4 minuter.

9- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.

10- Undersök vid 40X och sedan vid 100X.

För att förbättra och påskynda färgningen av syrasnabba mikroorganismer, tillsätt 1 droppe vätmedel (såsom Tergitol nr 7) till 30 till 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Vissa laboratorier ändrar metylenblått kontrastfärg till ljusgrön eller pikrinsyra; den första ger en grön färg på bakgrunden och den andra genererar en gul färg.

Special Kinyoun-teknik för Nocardias

För att förbättra färgningen av bakterier i släktet Nocardia används en modifiering av Kinyoun-fläcken. Tekniken är som följer:

1- Täck utstrykningen med Kinyoun carbol fuchsin i 3 minuter.

2- Tvätta med destillerat vatten.

3 - Färgas kort med syraalkohol framställd vid 3% tills ingen färg färgas bort.

4- Tvätta igen med destillerat vatten.

5- Täck preparatet med metylenblått och låt det verka i 30 sekunder.

6- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.

Kombinerad karbolfuchsin- och trikromteknik modifierad av Didier

Denna teknik rekommenderas för analys av avföringsprover för coccidia- och Microsporidium-sporer samtidigt. Förfarandet som följer är följande:

1- Täck utstrykningen med Kinyoun carbol fuchsin i 10 minuter.

2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

3- Blek i 30 sekunder med saltsyraalkohol.

4- Tvätta igen med destillerat vatten.

5- Täck utstrykningen med trikromlösning i 30 minuter vid 37 ° C.

6- Tvätta med destillerat vatten.

7- Blek i 10 sekunder med ättiksyraalkohol.

8- Tvätta smetet i 30 sekunder med 95% etanol.

QA

Som en positiv kontroll framställs utstryk med Mycobacterium tuberculosis-stammar och färgas med de beredda reagensen för att verifiera att bakterierna får rätt färg (röd-fuchsia).

Negativa kontroller kan också användas genom att framställa utstryk med någon annan stam än syraalkohol snabbt, och därmed verifiera att hela provet får den kontrasterande färgen.

Kinyoun-teknik jämfört med Ziehl-Neelsen-tekniken

Kinyoun-tekniken är enklare eftersom den eliminerar uppvärmningssteget, men dess främsta fördel är att den undviker utsläpp av ångor, mycket giftiga och cancerframkallande på lång sikt. Därför är Kinyoun-fläcken säkrare för färgningspersonal.

Det är viktigt att ta hänsyn till att reagensen inte kommer i direkt kontakt med huden, eftersom de är frätande och blekmedlet är brandfarligt.

När det gäller nackdelarna indikerar en negativ utstrykning inte nödvändigtvis att organismen inte är närvarande. Vidare kan närvaron av cellulärt skräp leda till falska positiva effekter, vilket kan leda till förvirring i diagnosen.

Referens

1. Tillämpad klinisk kemi. (2016). BK Kinyoun Kit.Tillgängligt på: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-fläck och två Coccidia i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Wikipedia-bidragsgivare. "Kinyoun-fläck." Wikipedia, den fria encyklopedin. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 februari 2018. Webben. 5 januari 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering av en färgningsteknik för samtidig diagnos av Coccidia och Microsporidia. Institutet för hygien vid University of the Republic. Montevideo. Uruguay. Finns på: hygiene.edu.uy