LIA (LYSINJÄRN) AGAR: FOUNDATION, BEREDNING OCH ANVÄNDNING - BIOLOGI - 2025

Den agar LIA (Lysin Iron) är ett biokemiskt test används för att identifiera bakterier av familjen Enterobacteriaceae. Detta medium skapades av Edwards och Fife, baserat på Falkow-formeln.

Ursprungligen var detta test en buljong innehållande peptoner, jästextrakt, glukos, L-lysin, bromokresol purpur och destillerat vatten. Edwards och Fife tillsatte agar-agar, järn-ammoniumcitrat och natriumtiosulfat.

Positivt och negativt test för lysindekarboxylering. Källa: Foto- och diagramegenskap för författaren MSc. Marielsa gil

Testet består i grund och botten av att visa närvaron av enzymlysindekarboxylas, som kan reagera med karboxylgruppen i aminosyran L-lysin. En deamination av aminosyran kan också ske på grund av närvaron av enzymlysindeaminas.

Dessutom visar mediets sammansättning förmågan hos vissa bakteriella släkter att producera vätesulfid. Slutligen är det också möjligt att observera alstring eller inte av gas i mediet.

Grund

Peptoner och jästextrakt

Liksom de flesta kulturmedier innehåller Lysine Iron Agar komponenter som ger källan till näringsämnen som är nödvändiga för bakterietillväxt. Dessa komponenter representeras av peptoner och jästextrakt.

Glukos

På liknande sätt innehåller denna agar glukos som ett jäsbart kolhydrat. Alla bakterier i familjen Enterobacteriaceae är kända för att fermentera glukos.

Detta steg är avgörande, eftersom det kommer att vara ansvarigt för att surgöra mediet, ett väsentligt villkor för att enzymet lysindekarboxylas - om det är närvarande - kan verka på dess substrat.

I vissa bakteriegener kan gasproduktion på grund av glukosfermentering observeras.

Gasen bevisas när det finns en förskjutning av agaren i röret, vilket lämnar ett tomt utrymme i botten av röret eller genom sprickning av mediet i två eller flera delar.

L-lysin

När lysin har dekarboxylerats bildas en diamin (kadaverin) och koldioxid.

Dekarboxylering sker i närvaro av koenzympyridoxalfosfat. Denna reaktion är irreversibel.

PH-indikator (bromokresol purpur)

Alla pH-förändringar som inträffar i mediet genom de olika reaktionerna detekteras av den purpurfärgade bromocresol-pH-indikatorn.

I detta avseende, när det finns försurning blir mediet gult, och när det finns alkalisering återgår mediet till den ursprungliga lila eller lila färgen.

När lysindeaminering sker på grund av närvaron av lysindeaminasenzym, bildas en rödaktig färg på ytan, typisk i släkten Proteus, Providencia och vissa Morganella-arter.

Detta beror på det faktum att under deamineringsprocessen bildas alfa-keto-kolsyra, som reagerar med ammoniumcitrat i närvaro av syre, vilket orsakar nämnda färg.

Järn-ammoniumcitrat och natriumtiosulfat

Å andra sidan, bakterier som producerar vätesulfid bevisas genom närvaron av natriumtiosulfat (källa för svavel) och jämammoniumcitrat, som är utvecklaren av H ₂ S.

Bakterier som har enzymet tiosulfat reduktas har förmåga att verka genom att minska natriumtiosulfat närvarande, bildar sulfit och vätesulfid (H ₂ S).

Den senare är en färglös gas, men när den reagerar med järnsaltet bildar den järnhaltig metallisk sulfid, som är en olöslig förening (synlig svart fällning).

Emellertid förmågan att bilda H ₂ är S med detta medium inte särskilt tillförlitliga, eftersom vissa lysin-dekarboxylas negativa bakterier som kan producera H ₂ S kommer inte att bilda den svarta fällningen, som surheten hos mediet stör. Därför rekommenderas det att kontrollera med andra media som innehåller järn.

Tolkning av testet

Lysindekarboxylering

Rören bör läsas efter 24 timmars inkubation, annars finns det risk för felaktig tolkning av reaktionen och rapportering av falska negativ.

Det måste komma ihåg att den första reaktionen som kommer att inträffa är jäsningen av glukos, därför blir alla rör efter 10 till 12 timmar gula.

Om efter inkubationstiden (24 timmar) en gul bakgrund med en lila eller lila yta observeras, är reaktionen negativ. Den lila färgen på ytan motsvarar alkaliniseringen av mediet genom användning av peptoner.

En positiv reaktion är en där rörets botten och yta är helt lila, det vill säga den återgår till originalfärgen.

Därför vem som bestämmer testets positivitet är basen eller bakgrunden för mediet. Om du är osäker på färgen kan den jämföras med ett icke-inokulerat LIA-rör.

Deaminering av lysin

Ett rör som visar lysindeamination har en rödaktig rödbrun yta och en gul (syra) bakgrund, eller hela röret kommer att ha en rödaktig rödbrun färg.

Denna reaktion tolkas som negativ för lysindekarboxylering, men positiv för lysindeamination.

Denna reaktion definieras och tolkas på ramen.

Produktion av vätesulfid (H

En positiv reaktion observeras av uppkomsten av en svart fällning i hela eller delar av mediet. Vanligtvis mellan kantens kant och basen.

Om fällningen inträffar i hela röret, avslöjar det inte de andra reaktionerna som inträffar i mitten.

Resultat av resultat

Vid tolkning av testet registreras resultaten enligt följande:

Första avfasningen avläses, sedan botten eller blocket, då produktionen av H ₂ S, och slutligen produktion av gas.

Exempel: K / A + (-). Detta betyder:

• K: Alkalisk ram (lila färg)
• A: Syrabakgrund (gul), dvs. negativ dekarboxyleringsreaktion och negativ deamination.
• +: Produktion av vätesulfid
• (-): Utan gas.

Förberedelse

Väg 35 g av det dehydratiserade järnagarlysinmediet och upplös det i en liter destillerat vatten.

Värm tills agaren har upplösts helt, låt den koka en minut under omrörning ofta. Fördel 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullshättar.

Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt stå i en vinkel så att det finns en djup bas och en kort fas.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt den värmas upp innan du sår bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och det beredda mediet är rödaktigt lila.

Det slutliga pH för det beredda mediet är 6,7 ± 0,2

Mediet blir gult vid pH 5,2 eller lägre och är lila vid pH 6,5 och högre.

tillämpningar

Detta test, tillsammans med andra biokemiska tester, används för identifiering av baciller från familjen Enterobacteriaceae.

Mediet ympas med en rak slinga eller nål, en eller två punkteringar görs till botten av röret, och sedan får ytan på mediet poäng i en sicksack.

Inkubera i 24 timmar vid 35-37 ° C i aerobios. Vid behov lämnas det att inkubera i ytterligare 24 timmar.

Det är främst användbart att skilja laktosnegativa Citrobacter-arter från Salmonellas sp.

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.

referenser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. 3: e upplagan Redaktionell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 utg. Redaktör Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan Redaktör Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lysinjärnagar. 2015. Finns på: britanialab.com
5. BD-laboratorier. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Finns på: bd.com
6. Valtek Laboratories. Medium LIA 2009. Finns på: andinamedica.com