MÖRKFÄLTMIKROSKOP: EGENSKAPER, DELAR, FUNKTIONER - BIOLOGI - 2025

Det mörka fältmikroskopet är ett speciellt optiskt instrument som används i vissa laboratorier. Detta är resultatet av en modifiering gjord av ljusfältmikroskopi. Darkfield-mikroskopi kan åstadkommas genom transbelysning eller genom epi-illumination.

Den första är baserad på att blockera ljusstrålarna som når kondensorn direkt genom användning av enheter som interponerar innan ljusstrålarna når kondensorn.

Mörkfältmikroskop / Treponemes ses i mörkerfältmikroskop. Källa: Dietzel65 / Judith Miklossy, Sandor Kasas, Anne D Zurn, Sherman McCall, Sheng Yu och Patrick L McGeer

Det mörka fältet med överfört ljus gör det möjligt att belysa strukturerna och kunna observera extremt tunna partiklar. Strukturer ses med viss brytning eller ljusstyrka på en mörk bakgrund.

Medan epi-belysningseffekten uppnås med infallande eller snett ljus. I detta fall måste mikroskopet vara utrustat med ett speciellt halvmåneformat filter.

Med infallande belysning kännetecknas de observerade strukturerna av en visuell effekt i hög relieff. Den här egenskapen gör det möjligt att belysa de upphängda partiklarnas kanter.

Till skillnad från ljusfältmikroskopi är mörkfältmikroskopi särskilt användbart för visualisering av fresker som innehåller suspenderade partiklar, utan någon typ av färgning.

Det har emellertid flera nackdelar, inklusive att det inte kan användas för torra preparat eller färgade preparat. Det har ingen bra upplösning. För att säkerställa en god bild kan dessutom den numeriska öppningen för målen inte överstiga kondensorns.

egenskaper

Sammansättningen av det mörka fältmikroskopet presenterar viktiga modifieringar med avseende på det ljusa fältet, eftersom de båda mikroskopierna är motsatta.

Medan ljusstrålarna är koncentrerade i det ljusa fältet så att de passerar direkt genom provet, är i det mörka fältet strålarna spridda så att endast de sneda strålarna når provet. Dessa sprids sedan av samma prov och överför bilden mot målet.

Om du skulle fokusera på en bild utan ett prov skulle en mörk cirkel observeras, eftersom utan ett prov finns det inget som sprider ljuset mot målet.

För att få den önskade effekten i synfältet krävs användning av specifika kondensatorer, liksom membran som hjälper till att kontrollera ljusstrålarna.

I ett mörkt synfält ser elementen eller partiklarna i suspension ljusa och brytbara medan resten av fältet är mörkt, vilket gör en perfekt kontrast.

Om snett eller infallande ljus används erhålls en kanteffekt med hög lättnad i de observerade strukturerna.

Delar av mörkfältmikroskopet

Källa: amazon.com

-Mekaniskt system

Rör

Det är den enhet genom vilken bilden reflekteras och förstoras av objektivet rör sig tills den når okularet eller okularerna.

Vispa

Det är stödet där de olika målen finns. Målen är inte fastställda, de kan tas bort. Roteraren kan roteras på ett sådant sätt att målet kan ändras när operatören behöver det.

Makroskruv

Denna skruv används för att fokusera provet, den flyttas framåt eller bakåt för att flytta provet närmare eller längre från målet, och rörelsen är grotesk.

Mikrometerskruv

Mikrometerskruven förflyttas framåt eller bakåt för att förflytta provet närmare eller längre bort från målet. Den mikrometriska skruven används för mycket fina eller känsliga rörelser, nästan omöjliga. Det är den som uppnår det ultimata fokuset.

Platen

Det är stödet där provet vilar på bilden. Den har en central öppning genom vilken ljusstrålarna passerar. När makro- och mikrometerskruvarna flyttas går scenen upp eller ner, beroende på skruvens rörelse.

Bilen

Vagnen gör att hela provet kan korsas med målet. De tillåtna rörelserna är fram och tillbaka och vice versa, och från vänster till höger och vice versa.

Håller pincett

Dessa är belägna på scenen, är gjorda av metall och är avsedda att hålla sliden för att förhindra att den rullar under observation. Det är viktigt att provet förblir fixerat medan det observeras. Fästorganen är exakt storlek för att ta emot bilden.

Arm eller handtag

Armen förenar röret med basen. Det är platsen där mikroskopet måste hållas när det kommer att flyttas från ena sidan till den andra. Med ena handen fattas armen och basen hålls med den andra handen.

Sockel eller fot

Som namnet antyder är det mikroskopets bas eller stöd. Tack vare basen kan mikroskopet förbli fixerat och stabilt på en plan yta.

-Optiskt system

mål

De är cylindriska. De har en lins längst ner som förstorar bilden som kommer från provet. Målen kan vara av olika förstoringar. Exempel: 4,5X (förstoringsglas), 10X, 40X och 100X (nedsänkningsmål).

Nedsänkningsmålet heter så att det kräver placering av några droppar olja mellan objektivet och provet. De andra kallas torra mål.

Målen skrivs ut med de egenskaper de har.

Exempel: tillverkarens varumärke, fältskurvningskorrigering, aberrationskorrigering, förstoring, numerisk bländare, speciella optiska egenskaper, nedsänkningsmedium, rörlängd, brännvidd, täckglasets tjocklek och kodring Färg.

Linserna har en främre lins längst ner och en bakre lins överst.

okular

Gamla mikroskop är monokulära, det vill säga de har bara en okular, och moderna mikroskop är kikare, det vill säga de har två okular.

Okularna är cylindriska och ihåliga. Dessa har konvergerande linser inuti som utvidgar den virtuella bilden som skapas av linsen.

Okularet går i röret. Det senare tillåter bilden som sänds av målet att nå okularet, vilket förstorar den igen.

Okularet i dess övre del innehåller en lins som kallas en okular och i den nedre delen innehåller den en lins som kallas en samlare.

Den har också ett membran och beroende på var den befinner sig kommer den att ha ett namn. De som finns mellan båda linserna kallas Huygens okular och om den är belägen efter de två linserna kallas det Ramsden okular. Även om det finns många andra.

Förstoringen av okularet sträcker sig mellan 5X, 10X, 15X eller 20X, beroende på mikroskopet.

Det är genom okularet eller okularen som operatören kan se provet. Vissa modeller har en ring på vänster okular som är rörlig och gör det möjligt att justera bilden. Denna justerbara ring kallas en diopterring.

-Ljussystem

Lampa

Det är källan till belysning och ligger längst ner i mikroskopet. Ljuset är halogen och släpps nerifrån och upp. Generellt sett är lampan som mikroskop har 12 V.

Diafragman

Membranen i mörkfältmikroskop saknar iris; i detta fall förhindrar detta att strålarna från lampan når direkt till provet, endast de sneda strålarna kommer att beröra provet. De balkar som sprids av strukturerna i provet är de som kommer att passera målet.

Detta förklarar varför strukturer ser ljusa och lysande ut i ett mörkt fält.

Kondensor

Kondensatorn i ett mörkt fältmikroskop skiljer sig från det för ett ljust fält.

Det finns två typer: brytningskondensatorer och reflektionskondensatorer. Det senare i sin tur är indelat i två kategorier: paraboloider och kardioider.

Brytningskondensatorer

Denna typ av kondensor har en skiva som är placerad för att bryta ljusstrålar, den kan placeras ovanför frontlinsen eller på baksidan.

Det är mycket enkelt att improvisera en kondensor av denna typ, eftersom det räcker att placera framför linsen på kondensorn en skiva av svart kartong som är mindre än linsen (membranet).

Ett ljusfältmikroskop kan konverteras till ett mörkfältmikroskop med hjälp av detta tips.

Reflektionskondensatorer

Det är de som används av stereoskopiska mikroskop. Det finns två typer: paraboloider och kardioider.

• Paraboloider: de har en typ av krökning som kallas paraboloider på grund av deras likhet med en parabola. Denna typ av kondensor används ofta i studien av syfilis, eftersom den gör det möjligt att observera Treponemes.
• Kardioid : kondensorns krökning liknar ett hjärta, därav namnet "kardioid", kondensorn har samma namn. Den har ett membran som är justerbart.

Funktioner

-Det används för att undersöka förekomsten av Treponema pallidum i kliniska prover.

-Det är också användbart att observera Borrelias och Leptospira.

-Det är idealiskt för att observera in vivo-beteende hos celler eller mikroorganismer, så länge det inte är nödvändigt att specificera specifika strukturer.

-Det är perfekt att markera kapseln eller väggen i mikroorganismer.

Fördel

-Markfältmikroskop med en brytningskondensor är billigare.

-Den är mycket användbar i 40X förstoring.

-De är perfekta för att observera prover som har ett brytningsindex som liknar mediet där de finns. Till exempel celler i kultur, jäst eller rörliga bakterier som spirocheter (Borrelias, Leptospiras och Treponemas).

-Cellen kan observeras in vivo, vilket gör det möjligt att utvärdera dess beteende. Till exempel brownisk rörelse, rörelse med flageller, rörelse genom utsläpp av pseudopoder, process med mitotisk uppdelning, kläckning av larver, spirande av jästar, fagocytos, bland andra.

-Det gör det möjligt att markera strukturernas kanter, till exempel kapseln och cellväggen.

-Det är möjligt att analysera uppdelade partiklar.

-Användningen av färgämnen är inte nödvändig.

nackdelar

-Särskild försiktighet måste vidtas vid montering av beredningarna, eftersom om de är för tjocka kommer det inte att observeras väl.

-Bildens upplösning är låg.

-Markfältmikroskop som använder brytningskondensatorer har en mycket låg procentuell ljusstyrka.

-För att förbättra bildkvaliteten med ett nedsänkningsmål (100X) är det nödvändigt att minska den numeriska öppningen för målen och därmed öka den hos den upplysta konen. För detta är det viktigt att införliva ett ytterligare membran som kan reglera objektets numeriska öppning.

-Du kan inte visualisera torra preparat eller färgade beredningar om de inte är viktiga färgämnen.

-Det tillåter inte visualisering av vissa strukturer, särskilt interna.

-Marka fältmikroskop är dyrare.

referenser

1. "Mörkfältmikroskop." Wikipedia, den fria encyklopedin. 26 aug 2018, 00:18 UTC. 30 juni 2019, 01:06
2. Agudelo P, Restrepo M, Moreno N. Diagnos av leptospiros från blodprover och kultur genom observation under ett mörkt fältmikroskop. Biomedical. 2008; 28 (1): 7-9. Tillgängligt från: scielo.org
3. Rodríguez F. Typer av optiska mikroskop. Klinisk och biomedicinsk laboratorieblogg. Finns på: franrzmn.com
4. Wikipedia-bidragsgivare. Mörkfältmikroskopi. Wikipedia, den fria encyklopedin. 19 oktober 2018, 00:13 UTC. Finns på: wikipedia.org
5. Bhatia M, Umapathy B, Navaneeth B. En utvärdering av mikroskopi av mörka fält, kultur och kommersiella serologiska satser för diagnos av leptospiros. Indiska J Med Microbiol. 2015; 33 (3): 416-21. Finns i: nlm.nih.gov